Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!

Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.

Нормальная микрофлора организма человека (продолжение). Дисбиозы

Цель занятия:

1.Изучить микрофлору организма человека.

2.Функции нормальной микрофлоры.

3. Причины и условия формирования дисбактериозов.

4. Коррекция дисбактериозов.

Студент должен знать:

1. Нормальную микрофлору организма человека, ее функции.

2. Факторы, оказывающие влияние на количественный и качественный состав нормальной

микрофлоры организма человека.

3. Методы изучения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры, критерии

оценки.

4. Причины и условия возникновения дисбактериозов, их коррекция.

Студент должен уметь:

· проводить взятие материала для исследования микрофлоры организма человека;

· проводить оценку качественного и количественного состава микрофлоры.

Студент должен иметь представление:

об особенностях взаимоотношений между отдельными микроорганизмами в различных биотопах организма человека (синергизм, антагонизм и др.).

Работа № 1. Микрофлора желудочно-кишечного тракта

Цель: изучить микрофлору желудочно-кишечного тракта.

Самостоятельная работа: оценить по готовым посевам и препаратам-мазкам результат исследования кала на дисбактериоз. Зарисовать, описать. Рекомендовать препараты для коррекции дисбактериоза. Сделать вывод.

Задача:

В бактериологическую лабораторию доставили материал (кал) для исследования на дисбактериоз. Сделаны посевы на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Калины, Блаурокка.

а) Описать культуральные свойства колоний.

Среда Блаурокка (для бифидумбактерий)

Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Среда Эндо (ДДС для лак⁺ бактерий)

Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Среда Калины (для энтерококков)

Результат:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

б) По готовым мазкам, приготовленным из выросших колоний описать морфологические

и тинкториальные свойства микроорганизмов. Окраска по Граму.

Со среды Блаурокка

Со среды Эндо

Со среды Калины

Результаты микробиологического исследования кала:

ГБОУ ВПО ТюмГМА, Многопрофильная клиника

Бактериологическая лаборатория

Микробиологическое исследование фекалий

на дисбактериоз

(ост 91500. 11. 0004-2003)

№ пробы_____________ первичный, повторный (подчеркнуть)

от «_____»_________________20_____г.

Ф.И.О. пациента____Петров П.П.________________________________

возраст___24 года_____________________________________________

Диагноз______________________________________________________

Откуда направлен______________________________________________

Микроорганизмы	Количество микроорганизмов в 1 гр. фекалий
норма до 1 г	Норма от 1г до 60л	норма старше 60л	у пациента
Патогенные энтеробактерии	нет	нет	нет
E. coli с нормальной ферментативной активностью	10⁷- 10⁸	10⁷- 10⁸	10⁷ - 10⁸	10⁶
E. coli лактозонегативные	< 10⁵	< 10⁵	< 10⁵
E. coli гемолитические	нет	нет	нет	10³
Другие условно-патогенные энтеробактерии: а) б) в)	< 10⁴	< 10⁴	< 10⁴	< 10⁴
Неферментирующие бактерии	≤ 10³	≤ 10⁴	≤ 10⁴
Энтерококки	10⁵ - 10⁷	10⁵ - 10⁸	10⁶ - 10⁷	10⁵
Стафилококк золотистый	нет	Нет	нет
Стафилококки (сапрофитный, эпидермальный) негемолизирующие	≤ 10⁴	≤ 10⁴	≤ 10⁴	≤ 10³
Бифидобактерии	10¹⁰-10¹¹	10⁹ - 10¹⁰	10⁸ - 10⁹	10⁷
Лактобактерии	10⁶ - 10⁷	10⁷ - 10⁸	10⁶ - 10⁷	10⁶
Лактострептококки	10⁷ - 10⁸	10⁷ - 10⁸	10⁷ - 10⁸	10⁸
Грибы	≤ 10³	≤ 10⁴	≤ 10⁴	≤ 10⁴
Клостридии	≤ 10³	≤ 10⁵	≤ 10⁶	≤ 10⁵
Прочие микроорганизмы

Заключение:

____________________________________________________________________

«____»_____________20____г. Врач _________________

в) Объяснить назначение и механизм действия пробиотиков с учетом изменений качественного и количественного состава микрофлоры, классифицировать предложенные препараты. Результаты внести в таблицу.

Название пробиотика	Классифика-ционное положение	Действующее начало	Получение	Применение	Способ применения

Теоретическая справка

Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы.

Микрофлора тонкого кишечника также не многочисленна (благодаря действию ферментов), в этом биотопе обнаруживаются лактобактерии, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.

Микрофлора толстого кишечника: в толстом кишечнике находится самая разнообразная по составу микрофлора.

Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.

Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть - аэробы.

Вся микрофлора кишечника подразделяется на:

1) облигатную её часть - это микроорганизмы, постоянно входящие в состав нормальной микрофлоры и играющие очень важную позитивную роль в макроорганизме;

2) факультативная часть, к которой относятся микроорганизмы, достаточно часто встречающиеся у здоровых людей, но иногда, в случаях снижения общей резистентности организма человека, эти микробы могут быть условно-патогенными и выступать в качестве этиологических факторов заболеваний;

3) транзиторная часть микрофлоры, которая носит случайный характер, представители этой микрофлоры неспособны к длительному пребыванию, персистированию в кишечнике. В этой группе могут быть, в небольших количествах, и возбудители инфекционных заболеваний.

К резидентной микрофлоре относятся как условно-патогенные микроорганизмы, такие как представители семейства энтеробактерии (протеи, серрации, клебсиеллы и др.), стафилококки, простейшие (псевдомонада, кишечная амеба), энтеровирусы, так и патогенные микроорганизмы, такие как, атипичные эшерихии (лак-), гемолитические стафилококки, вирулентные дрожжеподобные грибы.

Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника, показания для него разнообразны - предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др.

Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.

Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа.

Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов. Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С

Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.

Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.

Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах.

Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.

Характеристика культуральных и морфологических свойств представителей нормальной микрофлоры кишечника человека.

1. Бифидобактерии (род Bifidobacterium).

Строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек - бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блаурокка, в пробирках в анаэробных условиях.

Среда Блаурокка готовится следующим образом - к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут.

Культуральные свойства бифидобактерии. На среде Блаурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост - в виде "точек с хвостиками" или маленьких комочков.

Морфологические свойства бифидобактерии. В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.

2. Кишечные палочки (Escherihia coli).

Факультативные анаэробы. Прямые Гр^-палочки с закругленными концами.

ДДС - среда Эндо (питательный агар, 1% лактоза и индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте кишечной палочки (лактозоположительных бактерий) их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бледно-розовые колонии.

3. Энтерококки (род Enterococcus).

Аэробы. В настоящее время определяют 2 вида энтерококков - 1) Ent. fecalis и 2) Ent. faecium. Культивирование энтерококков проводится на среде Калины.

Среда Калины - это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой гидролизат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор).

На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культурным свойствам - первый вид даёт мелкие или средних размеров колонии яркие, красно-вишнёвые, второй вид - розовые, розовато-серые колонии.

Морфологические свойства энтерококков - в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.

Воспользуйтесь поиском по сайту: