ЧЕК-ЛИСТ Критерии оценки постановки реакции определения токсигенности дифтерийных бактерий.
ЧЕК-ЛИСТ Критерии оценки постановки ориентировочной реакции агглютинации
№
Критерии оценки
Полностью названа цель применения ориентировочной реакции агглютинации, полностью дано определение ориентировочной реакции агглютинации, отобраны необходимые принадлежности для постановки реакции.
С одного конца предметного стекла наносят каплю физиологического раствора для контроля. На другом конце стекла наносят каплю агглютинирующей сыворотки в разведении 1:20.
Перед каждым забором материала прокаливают бактериологическую петлю.
В каждую каплю прокаленной петлей вносят небольшое количество чистой культуры до получения гомогенной взвеси бактерий.
При положительной реакции через несколько минут в капле с сывороткой появится заметное скучивание бактерий, которое ускорится, если слегка покачивать стекло. Контрольная капля останется равномерно мутной. Прокомментировать полученный результат. Объяснить механизм реакции.
ЧЕК-ЛИСТ Критерии оценки постановки реакции гемагглютинации (РГА)
№
Критерии оценки
Полностью названа цель применения реакции гемагглютинации, полностью дано определение реакции гемагглютинации, названы используемые компоненты реакции.
РГА ставят на специальных пластмассовых планшетах с лунками.
В 6 луночек вносят разведения вируса от 1:2 до 1:64. 7-я луночка – контроль эритроцитов.
4.
Во все луночки вносят по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. Планшет оставляют при комнатной температуре на 30 минут.
5.
В контрольной луночке отмечают осадок эритроцитов в виде «пуговки», в случае положительной реакции на дне луночек образуется осадок в виде «зонтика». Прокомментировать полученный результат. Объяснить механизм реакции.
ЧЕК-ЛИСТ Критерии оценки постановки реакции торможения гемагглютинации (РТГА) для обнаружения антител
№
Критерии оценки
Полностью названа цель применения РТГА для обнаружения антител, полностью дано определение РТГА для обнаружения антител, названы используемые компоненты реакции.
Сыворотку больного разводят в лунках планшета от 1:10 до 1:320.
Во все луночки добавляют по 0,25 мл вирусного диагностикума соответствующего заболевания. Затем добавляют по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов. Реакцию сопровождают тримя контролями:1. КС – сыворотка+эритроциты. 2. КВ – вирус+эритроциты. 3. КЭ – физиологический раствор+эритроциты..Инкубируют 45 минут.
При положительной реакции в опытных луночках образуется осадок в виде «пуговки» до соответствующего титра. В контроле вируса – осадок в виде «зонтика», в контроле эритроцитов – в виде «пуговки», в контроле сыворотки – в виде «пуговки».
Прокомментировать полученный результат. Объяснить механизм реакции.
ЧЕК-ЛИСТ Критерии оценки постановки реакции непрямой гемагглютинации (РНГА)
№
Критерии оценки
Полностью названа цель применения РНГА, полностью дано определение РНГА для обнаружения антител, названы используемые компоненты реакции.
В ряд лунок полистеролового планшета вносят по 0,5 мл физиологического раствора, затем в 1-ю лунку вносят 0,5 мл исследуемой сыворотки в разведении 1:25 и готовят двукратные разведения путем переноса из одной лунки в другую. Получают разведения от 1:50 до 1:800.
В полученные разведения сыворотки добавляют по 0,1 мл эритроцитарного диагностикума.
Реакцию сопровождают 2-мя контролями: КА – контроль антигена (зонтик) – физиологический раствор и антиген
1. КС – контроль сыворотки (пуговка) – физиологический раствор и сыворотка. Планшет ставят в термостат при t-37оС на 2 часа.
При положительном результате на дне лунок образуется осадок в виде «пуговки», при отрицательном - осадок в виде «зонтика».
Прокомментировать полученный результат. Объяснить механизм реакции.
ЧЕК-ЛИСТ Критерии оценки постановки реакции торможения гемагглютинации (РТГА) для определения типа вируса гриппа
№
Критерии оценки
Полностью названа цель применения РТГА для определения типа вируса гриппа, полностью дано определение РТГА для определения типа вируса гриппа, названы используемые компоненты реакции.
В 5 луночек пластмассового планшета вносят по 0,25 мл вируссодержащего материала, добавляют типовые сыворотки против вируса гриппа – по 0,25 мл А0, А1, А2, В, С.
Затем – по 0,5 мл 1% куриных эритроцитов, планшет оставляют при комнатной температуре на 1 час.
Вирус гриппа относится к тому типу сыворотки, с которой образовался осадок в виде «пуговки».
Прокомментировать полученный результат. Объяснить механизм реакции.
ЧЕК-ЛИСТ Критерии оценки постановки реакции кольцепреципитации.
№
Критерии оценки
Полностью названа цель применения реакции кольцепреципитации, полностью дано определение реакции кольцепреципитации, отобраны необходимые принадлежности для постановки реакции.
В преципитационную пробирку наливают преципитирующую сыворотку и осторожно по стенке наслаивают преципитиноген.
При положительной реакции на границе обеих жидкостей появляется мутное кольцо (преципитат). В связи, с чем эту реакцию часто называют кольцепреципитацией.
Обязательным условием для постановки реакции является полная прозрачность антигена и антитела. В противном случае результаты реакции будут неясны. Реакция характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью.
Прокомментировать полученный результат. Объяснить механизм реакции.
ЧЕК-ЛИСТ Критерии оценки постановки реакции связывания комплемента (РСК)
№
Критерии оценки
Полностью названа цель применения РСК, полностью дано определение РСК, названы используемые компоненты реакции.
РСК проводится в два этапа: I-этап. Взаимодействие антигена и антитела, связывание происходит в 1-й пробирке (опыт). Во 2-й (КА) и 3-й (КС) пробирках связывания не происходит, т.к. они являются контрольными, в них нет одного из ингредиентов (или антигена, или антитела).
II-этап. Добавление гемолитической системы (гемолитическая сыворотка+эритроциты барана) для определения в каком состоянии находится комплемент (в связанном или свободном).
В случае положительного результата в опытной пробирке не произойдет гемолиз ввиду отсутствия свободного комплемента.
В контрольных пробирках произойдет гемолиз т.к. в присутствии свободного комплемента гемолитическая сыворотка гемолизирует эритроциты барана.
В случае отрицательного результата во всех 3-х пробирках произойдет гемолиз. Прокомментировать полученный результат. Объяснить механизм реакции.
ЧЕК-ЛИСТ Критерии оценки постановки реакции определения токсигенности дифтерийных бактерий.
№
Критерии оценки
Полностью названа цель применения реакции, полностью дано определение, названы используемые компоненты реакции.
На середину чашки с питательным агаром кладут фильтровальную бумагу, заранее смоченную антитоксической противодифтерийной сывороткой.
С 2-х сторон от бумаги делают посев культур, выделенных от больных. Чашки помещают в термостат при t – 37оС на 24 часа.
Через сутки учитывают результат: Линии преципитации (или «усики») образуются в местах взаимодействия экзотоксина с антитоксином. Происходит реакция нейтрализации токсина антитоксином.
Прокомментировать полученный результат. Объяснить механизм реакции.
