Parvoviridae infection bovis

Определение. Парвовирусная инфекция - латентная инфекция, проявляющаяся у новорожденных телят поражением желудочно-кишечного тракта. Установлено, что парвовирус проникает через плацентарный барьер, нарушая трофику плода, обусловливая аборты у коров и поражение органов пищеварения у телят.

Историческая справка. Впервые о выделении парвовируса типа 1 крупного рогатого скота сообщил Бэтэс с сотр. в 1959 г. В 1961 г. в Великобритании Абианти и Уорфилд выделили этот вирус из кишечника коров. В дальнейшем парвовирусы были выделены в США, Японии, Великобритании, ФРГ, России.

Эпизоотологические данные. Возбудители, относящиеся к парвовирусам, поражают многие виды животных: крыс, мышей, кошек, свиней, крупный рогатый скот, собак, человека. У парвовирусов существует адаптация к животным определенных видов, вследствие чего в литературе описана парвовирусная инфекция у отдельных животных. Хотя вирусы и не обладают высокой степенью антигенного родства между собой, однако имеют способность циркулировать в организме несвойственного для них вида. Так, антитела к парвовирусам свиней обнаруживают в сыворотках крупного рогатого скота, овец, кошек, морских свинок, мышей, крыс, но их нет у лошадей, собак, кроликов, цыплят и людей.

Проведенные исследования по распространению парвовирусов показали, что последние широко распространены среди различных видов животных в разных странах мира - США, Англии, Франции, ФРГ, России, на Украине.

Биологические свойства возбудителя. Возбудитель парвовирусной инфекции относится к ДНК-геномным вирусам, семейству Parvoviridae, роду Parvovirus. Вирион размером 23 нм представляет собой изометрическую голую частицу без оболочки, содержит 32 капсомера диаметром 2—4 нм, уложенные по икосаэдральному типу симметрии. Удельная плотность вириона в градиенте хлористого цезия — 1,38 г/см³. Вместо оболочки имеются небольшие (похожие на кольцо) образования размером 7—8 нм. Репродукция вирионов происходит в ядре чувствительной клетки. В вирионах идентифицировано 3 белка, молекулярная масса их — 66800 Д (75,6—82,7%), 76150 Д (10,6—7,7%), и 85500 Д (13,8—9,6%). Возбудитель парвовирусной инфекции содержит односпиралевую ДНК подгруппы В с молекулярной массой от 1,2х10⁶ до 1,8х10⁶ Д, которая in vivo становится двухспиральной.

Парвовирус крупного рогатого скота агглютинирует эритроциты лошади, барана, козы, морской свинки, хомячка, утки, гуся, собаки, человека, но не агглютинирует эритроцты крупного рогатого скота, кролика, мышей и кур. Агглютинация происходит при рН от 5,0 до 8,0.

Культивирование парвовирусов крупного рогатого скота. Вирус хорошо репродуцируется в первичных культурах клеток легких, селезенке, тестикул, надпочечников и почек эмбрионов крупного рогатого скота. Цитопатические изменения появляются лишь после нескольких пассажей. ЦПД наблюдают через 3—4 дня после заражения, и это приводит к полному лизису клеток. Эозинофильные ядерные включения появляются через 18—24 часа.

Клинические признаки заболевания. Из клинических признаков регистрируют профузный понос, незначительный подъем температуры тела (до 40°С), фекалии - светло-серого цвета со значительным количеством слизи. При инраназальном заражении парвовирусом в сочетании с апатогенной микрофлорой (пастереллами, сальмонеллами, стафилококками) у телят появляются признаки ярко выраженного поражения органов дыхания и диарея. Кроме того, для данной инфекции характерны церебральная гипоплазия, кортикоцеребральный некроз, аборты, мертворождение.

Диагноз. Постановка диагноза осуществляется на основе клинических, патологоанатомических и лабораторных методов исследования.

Патологоанатомические изменения. Патолого-анатомические изменения наблюдаются в виде катарально-геморрагического воспаления кишечника. В лабораторию направляют отрезок тонкого кишечника с содержимым, который имеет видимые морфологические изменения, а также пробы фекалий в одни-двое суток болезни.

Лабораторные методы исследования. Вирусологическое исследование заключается в выделении вируса в культуре клеток с последующей его идентификацией иммунологическими методами (реакции нейтрализации, гемагглютинации, гемадсорбции, методом флуоресцирующих антител). Идентификацию парвовирусов проводят на основе гемагглютинации и гемадсорбции эритроцитов морских свинок и нулевой группы человека, образования фельгенположительных включений типа А.

 

ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ СВИНЕЙ

 

ТРАНСМИССИВНЫЙ ГАСТРОЭНТЕРИТ СВИНЕЙ

(Gastroenteritis infectiosa suum)

Определение. Трасмиссивный гастроэнтерит свиней (ТГС) - высококонтагиозное, остро протекающее инфекционное кишечное заболевание, которое характеризуется рвотой, изнурительной диареей, быстрым обезвоживанием организма животных и сопровождается падежом животных, особенно поросят до 10--14-дневного возраста.

Заболевание возникает внезапно, к нему восприимчивы свиньи всех возрастных групп. Однако наиболее восприимчивы поросята до двухнедельного возраста. Падеж колеблется в зависимости от возраста животных. Среди 1--7-дневных поросят он составляет 90--100 %, среди поросят 28-дневного возраста не превышает 25-50 % (25).

Историческая справка. Трансмиссивный гастроэнтерит впервые описали американские исследователи Дойл и Хатчингс в 1946 г. у свиней, доказали его вирусную природу и патогенность вируса для поросят. В дальнейшем вспышки отмечены в Японии (1956), Великобритании (1957), Канаде (1964) и во многих странах Европы, Азии и Африки. Распространенность в странах Европы составляет около 100%.

Эпизоотологические данные. Трансмиссивному гастроэнтериту свиней свойственны те биологические закономерности, которые присущи многим инфекционным заболеваниям, т.е. присутствие трех звеньев эпизоотического процесса: источника возбудителя инфекции, путей (механизма) передачи и заражения свиней восприимчивых животных.

Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие животные - вирусоносители. Больные животные в течении двух месяцев после переболевания выделяют вирус с фекалиями. Концентрация вируса в экскрементах особенно высока в начале болезни, когда водянистые фекалии загрязняют окружающие предметы. Вирус ТГС сохраняется в субпродуктах и охлажденном до 3-5°С мясе, полученном после убоя больных и переболевших свиней в течение 15 дней.

Заражение происходит преимущественно алиментарным путем, реже - аэрогенным. Передача вируса происходит при контакте здоровых животных с больными, через корма, воду, обслуживающий персонал, транспорт. Не исключено заражение животных воздушно-капельным путем. Наши наблюдения показывают, что в благополучные хозяйства в большинстве случаев возбудитель ТГС передается (завозится) с больными и переболевшими животными - вирусоносителями, а также с необезвреженными субпродуктами и боенскими отходами. Это - главные пути заноса возбудителя ТГС в благополучные хозяйства.

По сообщению зарубежных и отечественных ученых лабораторные животные не чувствительны к вирусу ТГС. Однако после искусственного заражения собак и лисиц возбудителем ТГС коронавирус выделялся с фекалиями до 2 недель. У собак после введения вируса обнаруживаются вируснейтрализующие антитела. Установлено, что скворцы выделяют вирус ТГС после скармливания им кусочков кишечника больных гастроэнтеритом поросят до двух суток. Возникновение очагов ТГС ученые часто связывали с перелетом скворцов.

Трансмиссивный гастроэнтерит протекает в виде эпизоотии или энзоотии. Эпизоотическая форма ТГС наблюдается при заносе инфекции в свиноводческие хозяйства, в которых животные не имеют иммунитета к вирусу ТГС и являются восприимчивыми к этому заболеванию. Вспышки ТГС появляются через несколько дней после завоза свиней из неблагополучного хозяйства, в частности после завоза племенных свинок и хряков, а также кормов, продуктов животного происхождения. Обычно в течение нескольких дней болезнь охватывает свиней всех возрастных групп. Заболевание характеризуется диареей, которая появляется внезапно и быстро распространяется среди животных всех возрастов, охватывая практически 100 % поголовья свиней. Новорожденные поросята и подсосные свиноматки болеют ТГС в тяжелой форме. Падеж среди новорожденных поросят до 10-дневного возраста составляет 80--90%, 2--3-недельного - 20--30 %, поросят-отъемышей - 3--4 %, взрослых животных - менее 1 %.

К.Н. Груздев, И.И. Скворцова (1995) в опыте показали высокую чувствительность поросят к вирусу ТГС в зависимости от их возраста. Заболеваемость новорожденных поросят в возрасте 1, 7, 14, 28 и 45 дней при экспериментальном заражении эпизоотическим штаммом вируса ТГС "Миллер" составила 100%. Падеж поросят, экспериментально инфицированных вирусом ТГС, составил: в возрасте от 1 до 7 дней -- 100 %, в возрасте 14, 28 и 45 дней - соответственно 70, 50 и 30 %. Возрастная устойчивость поросят к ТГС показана на рисунке 1. По данным А.И. Собко и Е.А. Краснобаева (1987) падеж среди новорожденных поросят моложе 10-дневного возраста составляет 80--90 % и более, 2--3-недельного - 20--30 %, отъемышей - 3--4 %, взрослых свиней - менее 1%.

Наши наблюдения за заболеваемостью и падежом новорожденных поросят при их экспериментальном заражении вирулентным штаммом вируса ТГС и при естественном заражении при вспышках заболевания в свиноводческих хозяйствах показали высокую контагиозность возбудителя трансмиссивного гастроэнтерита для этого возраста животных. В одном из свиноводческих хозяйств Гродненской области в 1990 году при первичной острой вспышке ТГС в течение 5-7 дней погибло 90--100 % новорожденных поросят от 200 опоросившихся свиноматок.

Одной из особенностей ТГС является сезонность его появления. Заболевание чаще всего регистрируют в осенне-зимне-весенние месяцы. Это связано, по всей вероятности, с тем, что в холодное время года вирус более устойчив к воздействию внешних факторов, чем летом при высокой температуре.

Продолжительность эпизоотии ТГС бывает различной в зависимости от типа и величины свиноводческого хозяйства. При поточной системе воспроизводства в крупных хозяйствах эпизоотия заболевания растягивается на многие месяцы (и даже годы) в связи с беспрерывными круглогодовыми опоросами свиноматок и получением восприимчивого к ТГС молодняка. В небольших свиноводческих хозяйствах продолжительность эпизоотии ТГС ограничивается 3--4 неделями. Свиноматки, инфицированные в начале возникновения болезни, через 3 недели приобретают иммунитет, который они передают новорожденным поросятам через молозиво и молоко. Поросята, полученные от переболевших ТГС свиноматок, обычно устойчивы к болезни до 1--1,5 месяца. В послеотъемный период они могут заболевать гастроэнтеритом в связи с потерей колострального иммунитета.

По наблюдению П.И. Притулина (1975), ТГС может возникнуть в любое время года. Вспышки в свиноводческих хозяйствах повторялись, как правило, в периоды массовых опоросов и отъема поросят от свиноматок. Возникновению и распространению трансмиссивного гастроэнтерита способствуют неудовлетворительные условия содержания, неполноценное кормление животных, резкая смена рационов, переохлаждение и перегревание, длительные их транспортировки. Все названные выше стресс-факторы снижают резистентность организма, способствуют возникновению и отягощают течение вирусного гастроэнтерита свиней.

Энзоотии ТГС наблюдаются в крупных свиноводческих комплексах, где свиноматки приобрели иммунитет в результате предшедствующей ТГС - инфекции. Через несколько месяцев его напряженность снижается и у поросят старше 6--7-дневного возраста регистрируется гастроэнтерит, причем у отдельных поросят помета заболевание протекает в легкой форме. У больных не всегда отмечается рвота. Падеж при такой форме ТГС не превышает 10--20 %. Свиноматки обычно не болеют. Энзоотия вирусного гастроэнтерита связана, как правило, с персистенцией вируса в хозяйстве, наличием высоко восприимчивых поросят (система непрерывных опоросов) или частого завоза не иммунных, чувствительных к вирусу ТГС свиней.

Особенностью энзоотической формы ТГС является периодическое появление вспышек гастроэнтеритов среди новорожденных поросят. Отмечано, что наиболее часто болеет молодняк, полученный от свиноматок - первоопоросок, у которых низкий уровень специфических антител к вирусу ТГС (особенно при раннем отъеме). Если опоросы от свиноматок-первоопоросок идут одновременно с опоросами более старых свиноматок, то заболевание гастроэнтеритом от больных поросят, полученных от первой категории животных, может передаваться поросятам, полученным от другой категории свиноматок. В этой связи В.И. Варганов с соавт. (1979) при оздоровлении хозяйств, неблагополучных по ТГС, считает целесообразным удлинить сроки использования основных свиноматок до 6--7 опоросов и проводить обособленный от общего стада опорос свиноматок-первоопоросок.

Трансмиссивный гастроэнтерит наносит свиноводческим хозяйствам значительный экономический ущерб, который складывается из падежа поросят-сосунов до 80--90 %. Переболевшие животные отстают в росте и развитии, снижаются привесы.

Биологические свойства возбудителя. Возбудитель трансмиссивного гастроэнтерита (Transmissible gastroenteritis virus of swine) относится к семейству Coronaviridae, рода Coronavirus. Его вирионы морфологически имеют вид плеоморфных частиц округлой или овальной формы, состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии, в котором заключен вирусный геном, липопротеиновой оболочки, на поверхности которой расположены булавовидные (грушевидные) отростки (шипы), далеко отстоящие друг от друга и напоминающие солнечную корону. Отсюда название коронавирус. Геномом вируса является цельная одноцепочная линейная нефрагментированная молекула РНК. В ультратонких срезах инфицированных эпителиальных клеток вирионы вируса ТГС имеют диаметр 65--95 нм. Эталонным штаммом вируса ТГС является штамм Purdue, выделенный в США Дойлем и Хатчингсом.

Вирус ТГС чувствителен к растворителям липидов (эфиру, хлороформу), дезоксихолату натрия, термолабилен и инактивируется при температуре 56°С в течение 30 мин, при 50°С - в течение 60 мин. Вирус не изменяет своих вирулентных свойств при рН от 4 до 9,0. При хранении в замороженном состоянии остается жизнеспособным в течение многих недель.

Вирус ТГС чувствителен к свету, а также к действию дезинфектантов: 0,5%-ный формальдегид, 2%-ная натрия гидроокись, 20%-ная взвесь свежегашенной и взвесь хлорной извести, содержащей 2,5% активного хлора, губительны для возбудителя ТГС. При комнатной температуре в темноте инфекционная активность вируса не изменяется на протяжении 3-х дней, тогда как на свету она снижается за один день на 99%. Вирус стабилен в течение 1--2 лет при температуре минус 20--70°С, не чувствителен к антибиотикам (пенициллину, стрептомицину, нистатину и др.).

Вирус ТГС патогенен для свиней. Наиболее чувствительны новорожденные поросята 1--7-дневного возраста и поросята-гнотобиоты. Новорожденные поросята в 1000 раз чувствительнее к вирусу ТГС, чем взрослые особи.

Отдельные эпизоотические штаммы и изоляты вируса ТГС могут различаться по вирулентности к животным. Серийное пассирование вируса в клеточных культурах свинного происхождения снижает вирулентность и делает его аттенуированным. Нередко при пассажах аттенуированных штаммов вируса ТГС на новорожденных поросятах патогенность возвращается в исходное состояние (реверсия).

Для культивирования вируса ТГС заражают поросят с последующим взятием от них тонкого отдела кишечника или используют чувствительные клеточные культуры. У больных животных вирус локализуется в эпителиальных клетках, выстилающих ворсинки тонкого отдела кишечника (тощая, 12-перстная кишка). В 1 г ткани 12-перстной или тощей кишки инфицированного вирусом ТГС поросенка содержится 10⁶ инфекционных доз возбудителя.

Культивирование возбудителя. Отсутствие цитопатогенного действия (ЦПД) вируса в клеточной культуре на первых порах тормозила изучение его свойств. После сообщения о выделении в Японии штамма SHizuoka, который вызывал ЦПД в культуре клеток свиных почек, проведено большое количество исследований по размножению вируса в клетках свиных тестикулов, почек плодов свиней, щитовидной железы. Наиболее чувствительными к вирусу ТГС и приемлемыми для его выделения оказались первично трипсинизированные клетки тестикул и почки поросят. Перевиваемая культура клеток СПЭВ и IBRS оказались непригодными для выделения коронавируса.

Установоено стимулирующее действие трипсина на вирус ТГС при формировании бляшек. Число бляшек, образованных штаммами коронавируса ТО-163, Укиха и Ниигата, повышалось в 2,6--3,5 раза при внесении трипсина в вирус после его адсорбции при 4°С в течение 2-х часов при инкубации при 37°С в течение 1 часа.

Цитопатогенное действие эпизоотических штаммов вируса ТГС на культуре клеток может отсутствовать или быть незначительным в первых пассажах. Это зависит от чувствительности культуры клеток к изоляту вируса ТГС. Выраженное цитопатогенное действие вируса на чувствительной культуре клеток проявляется чаще всего после проведения нескольких последовательных пассажей. ЦПД характеризуется округлением клеток и отделением их от монослоя.

Выделенные в разных лабораториях вирусы ТГС, как правило, идентичны или близки в антигенном отношении к эталонным штаммам. Однако в литературе имеется сообщение о том, что изолированный от больных свиней вирус CV-777, похожий на коронавирус, вызывает у поросят поражение кишечника, но репродуцируется медленнее. В свете современных данных названный штамм коронавируса вызывает эпизоотическую диарею свиней. Его антигенные свойства отличаются от антигенных свойств вируса ТГС.

Патогенез трансмиссивного гостроэнтерита. Вирус ТГС проникает в пищеварительный тракт орально или нозо -- орально. Не исключен и аэрогенный путь заражения животных. Устойчивость вируса к кислотам позволяет ему оставаться жизнеспособным в кислой среде желудка, где он не размножается. Репликация вируса происходит в эпителиальных клетках, покрывающих ворсинки тонкого отдела кишечника через 5--6 часов после заражения. Эти эпителиальные клетки кишечных ворсинок обеспечивают всасывание питательных веществ. В результате репликации вируса в эпителиальных клетках ворсинок происходит их разрушение. Ворсинки атрофируются и сокращаются, их эпителии заменяется на кубический. В клетках кубического эпителия вирус не размножается. Разрушение вирусом ТГС эпителиальных клеток, ответственных за адсорбцию питательных веществ, атрофия ворсинок приводит к нарушению пищеварения и усвоения организмом белков, жиров, углеводов, воды и т.д. В результате через 12--24 часов после заражения возникает диарея.

Больные поросята теряют большое количество жидкости, что приводит к тяжелому обезвоживанию организма. В результате нарушается обмен веществ, развивается ацидоз. У поросят, пораженных ТГС, развивается дисбактериоз, который сопровождается уменьшением количества молочно-кислых бактерий и увеличением гнилостной микрофлоры. Осложнения ТГС обусловлены энтеропатогенной кишечной палочкой, клостридиями и другой микрофлорой.

Гибель животных происходит через 1--5 дней после заболевания в результате обезвоживания и интоксикации. У выздоровевших поросят регенерация эпителиальных клеток ворсинок тонкого отдела кишечника происходит через 3--4 дня после заражения, в последующие 2--3 дня понос прекращается.

Особенностью патогенеза трансмиссивного гастроэнтерита свиней, объясняющей возможность передачи вируса аэрогенным путем, является способность коронавируса размножаться в респираторном тракте свиней -- в эпителиальных клетках слизистой оболочки носовой полости и в легких. Вследствие репликации коронавируса в дыхательных путях развивается пневмония.

 

Клинические признаки трансмиссивного гастроэнтерита свиней. Инкубационный период при естественном инфицировании поросят вирусом трансмиссивного гастроэнтерита колеблется от 12 часов до 5 дней. В среднем он равен 1-3 дням. У взрослых животных он составляет 1-7 дней. Клинические признаки ТГС и его течение прямо зависят от возраста животных. Типичным клиническим признаком заболевания у поросят является внезапная рвота, которая сопровождается быстро наступающей диареей, отказом от соска, вялостью и скучиванием.

Первые клинические признаки заболевания у них можно обнаружить уже через несколько часов после рождения, но чаще -- на 2—3 сутки. Фекалии, как правило, водянистые, желто-зеленого, реже серого цвета. В испражнениях могут присутствовать сгустки свернувшегося молока. Щетина поросят испачкана фекалиями, вследствие чего кожа становится грязной и липкой. Отмечается быстрая потеря массы животных, обезвоживание и исхудание, высокий процент заболеваемости и падежа поросят до 2-недельного возраста. Выраженность клинических признаков болезни, ее продолжительность и исход прямо пропорциональны возрасту животных. Так, падеж поросят при инфицировании до 5-дневного возраста составляет 100 %, а в 6--10-дневном – 67 %, в 11--15-дневном - 30, 15-105-дневном - 3,5 % (66). Таким образом, основная масса поросят погибает от ТГС со 2-го по 7-й день после появления клинических признаков болезни.

Клинические признаки ТГС у поросят старших возрастов и взрослых свиней характеризуются угнетением, частичной или полной потерей аппетита и кратковременной диареей и рвотой у части животных. Заболевание продолжается 1--5 дней, реже -- 1--2 недели и, как правило, заканчивается выздоровлением. У больных свиноматок отмечают угнетение, уменьшении или полное прекращение секреции молока. Гипо- или агалактия начинается у них с 3--7-го дня после заболевания. У переболевших животных восстанавливается аппетит и нормализуется общее состояние.

Диагноз на трансмиссивный гастроэнтерит ставят комплексно на основании клинико-эпизоотологических данных, патолого-анатомических изменений и лабораторных исследований.

Предварительный диагноз на ТГС может быть поставлен на основании клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных заболевания. Клинические признаки при трансмиссивном гастроэнтерите у поросят, как уже нами описывалось ранее, характеризуются у части животных рвотой, гастроэнтеритом (фекалии водянистые, желто-зеленого цвета), скучиванием, загрязнением и потемнением щетины и кожи поросят, быстрым обезвоживанием организма животных.

При анализе эпизоотологических данных принимают во внимание фактор внезапного возникновения рвоты и диареи среди свиней различных возрастных групп в любое время, часто независимо от условий кормления и содержания животных. Однако необходимо отметить, что различные нарушения условий кормления и содержания животных часто являются "пусковым" механизмом для возникновения заболевания. Учитывают высокую контагиозность заболевания и быстрое его распространение, большой процент заболеваемости и падежа новорожденных поросят в первые дни жизни (до 10--14-дневного возраста). Необходимо учитывать и то, что острое течение трансмиссивного гастроэнтерита, как правило, через 3-4 недели сменяется подострой, энзоотической формой. Процент заболеваемости и падежа снижается до 50%.

При патологоанатомическом вскрытии трупов поросят, павших от этой болезни, в желудке содержится не свернувшееся молоко, слизистая дна желудка - темно-красного цвета с наличием на отдельных участках единичных кровоизлияний. Слизистая оболочка 12-перстной, тощей и частично подвздошной кишок отечная, покрасневшая. Мезентериальные лимфатические узлы сочные, увеличены, гиперемированы. В паренхиматозных органах (сердце, легкие, печень) видимых патологоанатомических изменений не обнаруживают. Часто под капсулой почек, которая с трудом отделяется, обнаруживают мелкие точечные кровоизлияния.

При гистологическом исследовании материала из тонкого отдела кишечника (тощая, подвздошная кишка) поросят, павших от ТГС, находят дистрофию и поверхностный некроз эпителия ворсинок тонкого кишечника. У взрослых свиней при вскрытии находят картину катарального гастроэнтерита.

Трансмиссивный гастроэнтерит по клиническим, эпизоотологическим и патолого--анатомическим признакам сходен с другими инфекционными заболеваниями вирусной этиологии (эпизоотическая вирусная диарея, ротавирусная болезнь, энтеровирусный гастроэнтерит свиней), протекающими с синдромом диареи. Все они клинически проявляются гастроэнтеритом. Поэтому практически затруднительно по клиническим, эпизоотологическим и патолого--анатомическим данным различать вирусные гастроэнтериты. В этой связи возникает необходимость в проведении лабораторных исследований и использовании лабораторных методов диагностики.

Достоверный диагноз на ТГС может быть поставлен путем постановки биологической пробы на новорожденных поросятах в возрасте до 10 дней, находящихся под свиноматкой или искусственно вскармливаемых коровьим молоком или теплой молочной смесью типа "Детолакт". Для этой цели поросят завозят из хозяйства, заведомо благополучного по трансмиссивному гастроэнтериту от серонегативных свиноматок. Поросятам инокулируют 20 %-ную стерильную безмикробную суспензию или фильтрат патологического материала от убитых больных животных. Биопробу считают положительной в случае, если подопытные поросята заболевают на 2--3-й день после заражения, проявляя клинические признаки, характерные для ТГС (рвота, понос, обезвоживание). На 3-5 день животные обычно погибают. Контрольным поросятам вводят стерильный раствор Хенкса. Они не должны заболеть и остаются здоровыми.

Биопроба является дорогостоящим методом диагностики ТГС, и ее постановку осуществляют при необходимости с разрешения Главного управления ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь или Департамента ветеринарии Минсельхозпрода Российской Федерации..

Лабораторные методы диагностики трансмиссивного гастроэнтерита основаны на обнаружении антигена вируса ТГС в РИФ, РДП, выделении вируса ТГС от больных гастроэнтеритом животных на культуре клеток и обнаружении специфических антител к вирусу ТГС в РН или РНГА.

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) основана на взаимодействии антигена вируса ТГС со специфическими антителами к нему, которые конъюгируют с флуорохромом (флуоресценцин изотиоционат -- ФИТЦ). Образовавшийся комплекс антиген-антитело под воздействием ультрафиолетовых лучей в люминесцентном микроскопе светиться зеленым светом.

Для диагностики трансмиссивного гастроэнтерита нами в БелНИИЭВ разработана тест-система по обнаружению антигена вируса ТГС в РИФ, включающая набор диагностикумов для этой реакции. В набор входят: кроличий специфический иммуноглобулин G к вирусу ТГС, меченный ФИТЦ; нормальный глобулин класса G кролика, меченный ФИТЦ; специфическая сыворотка кролика к вирусу ТГС; нормальная сыворотка кролика.

В качестве препаратов для выявления антигена вируса ТГС в РИФ являются мазки-отпечатки из стенок тонкого отдела кишечника, брыжеечных лимфатических узлов поросят, убитых с диагностической целью, которые готовили прикладывая обезжиренные предметные стекла к поверхности разреза ткани кишечника или лимфоузла. Кроме того, для этой цели использовали препараты из культуры клеток, выращенных на покровных стеклах и инфицированных 20%-ной суспензией из кишечника и паренхиматозных органов (легкие, селезенка, почки, брыжеечные лимфатические узлы) больных поросят. Через 24--48 часов после инфицирования культуры клеток покровные стекла с клетками извлекали из пробирок и монтировали на предметных стеклах.

Установлено также, что время отбора материала для исследования от начала заболевания поросят ТГС существенно влияло на результативность исследования. В том случае, если патматериал (отрезки тонкого отдела кишечника, брыжеечные лимфоузлы) отбирали у поросят, убитых не позже первых суток после проявления клинических признаков ВТГС, свечение на 3--4 креста обнаруживали в 70,8 % случаев. Если же материал отбирали от поросят, убитых через 6--7 суток после заболевания, положительные результаты обнаруживали только в 23 % случаев. Это связано, по-видимому, с тем, что у больных поросят происходит разрушение цилиндрического эпителия ворсинок тонкого отдела кишечника и замена его кубическим эпителием, в которых вирус не внедряется и, следовательно, в нем не обнаруживается.

К числу других экспресс-методов диагностики ТГС относится и тест-система диагностики трансмиссивного гастроэнтерита в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле (РДП). Сущность реакции заключается в том, что специфические антигены и антитела диффундируют в агаровом геле из мест локализации навстречу друг другу и, взаимодействуюя, между собой, образуют в агаре полосы (линии) преципитации. Скорость диффузии компонентов реакции зависит от их молекулярной массы. Чем больше их молекулы, тем медленнее идет диффузия, и наоборот. Реакция проявляется при определенном количественном соотношении антигена и антител к нему. Для постановки реакции необходимы: 1%-ный агаровый гель, специфическая кроличья преципитирующая сыворотка к вирусу ТГС, положительный специфический антиген, нормальная сыворотка кролика, отрицательный (контрольный) антиген и испытуемые антигены.

Реакцию ставят в 2 вариантах: макро- и микрометодом. Макровариант реакции осуществляется на агаре в чашках Петри, микровариант - на предметных стеклах. Более приемлемым является макровариант РДП. Для этого в чашки Петри вносят 25,0 мл расплавленного агара. В слое застывшего агара с помощью специального штампа делали лунки диаметром 5--6 мм: 1 лунка -- центральная, 6 лунок -- периферических. Расстояние между лунками – 4--5 мм. На дно каждой лунки вносили по 1 капле расплавленного агара для предупреждения подтекания компонентов под слой агара.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной линии преципитации между лункой со специфической преципитирующей сывороткой и испытуемым антигеном, которая плавно переходит в линию преципитации между лункой со специфической сывороткой и положительным антигеном, образуя в геле замкнутый шестиугольник. В контроле (специфическая преципитирующая сыворотка и отрицательный антиген; нормальная кроличья сыворотка и положительный преципитирующий антиген) линии преципитации отсутствуют.

РДП по обнаружению антигена вируса ТГС является специфичной и достаточно чувствительной реакцией и в комплексе с клиническими, эпизоотологическими, патолого-анатомическими данными позволяет ставить диагноз на трансмиссивный гастроэнтерит.

С целью изоляции вируса ТГС проводят вирусологические исследования патматериала на чувствительной к вирусу ТГС линии культуры клеток. Чаще всего для этой цели используют первично трипсинизированную культуру клеток почки поросенка, тестикул, щитовидной железы поросят. Важное значение имеет методика отбора проб патологического материала для изоляции вируса. В лабораторию направляют в сосуде Дьюара с жидким азотом или термосе со льдом участки пораженного тонкого отдела кишечника, кусочки легкого, селезенки, почек и печени убитых больных диареей поросят. Из патматериала готовят 20%-ную суспензию на растворе Хенкса, центрифугируют при 3--4 тыс. об/мин. в течение 30 мин. В надосадочную жидкость вносят антибиотики. Выдерживают при температуре 4 ⁰С 6 часов, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 30 мин. Надосадок после проверки на стерильность используют для заражения культуры клеток. Вносят по 0,2 см³ материала каждой пробы в 4 пробирки с культурой клеток, из которых предварительно удаляют ростовую среду и промывают монослой клеток раствором Хенкса. После инкубирования материала в термостате при 37 ⁰С в течение 30--60 мин вносят в каждую пробирку 0,8--1,0 см³ поддерживающей среды (среда 199). Для выявления цитопатогенного действия (ЦПД) возбудителя ТГС культуру клеток ежедневно микроскопируют в течение 5--7 суток.

При отсутствии ЦПД в 1-м пассаже материала проводят ряд последовательных пассажей на культуре клеток. ЦПД обычно проявляется в 3--7-м пассажах и характеризуется набуханием, округлением клеток и отторжением их от стекла. В случае выделения изолята вируса проводят его идентификацию в реакции нейтрализации на культуре клеток с использованием антисывороток.

Однако изоляция вируса еще не является доказательством того, что он является причиной гастроэнтерита у поросят. Необходимо воспроизвести заболевание на поросятах путем экспериментального заражения поросят изолятом вируса ТГС. Таким путем доказывают, что выделенный от больных животных вирус патогенен для поросят и является этиологическим агентом в возникновении гастроэнтерита.

Для диагностики ТГС достаточно обнаружить антиген вируса. Для этой цели используют РИФ, РДП и ИФА.

Обнаружение антител к вирусу ТГС является ретроспективным методом диагностики заболевания. Для этой цели используют реакцию нейтрализации (РН) на культуре ткани с сыворотками крови больных и переболевших свиней и вирусом ТГС. В РН исследуют сыворотки крови не менее чем от 10 свиноматок, взятые через 2--3 недели от начала заболевания и повторно с интервалом 14--21 день. Максимальный титр вируснейтрализующих антител к вирусу ТГС появляется через 3 недели после начала болезни. В организме переболевших животных вируснейтрализующие антитела сохраняются от 3 до 12 мес.

Для ретроспективной диагностики ТГС используют также реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Определяют специфические антитела в парных сыворотках крови больных и переболевших свиней.

РОТАВИРУСНАЯ БОЛЕЗНЬ СВИНЕЙ

(Porcine rotaviral infections)

Определение. Ротавирусная болезнь свиней (синонимы: ротавирусная инфекция, ротавирусная диарея) является инфекционным диарейным заболеванием, которое проявляется рвотой, гастроэнтеритом, обезвоживанием организма.

Историческая справка. Впервые ротавирусную инфекцию установил Mebus et al. В дальнейшем ротавирусная инфекция была установлена практически во всех странах странах, в которых имеется свиноводство. В 1957--1958 гг. был выделен возбудитель диареи молодых белых мышей, названные ЕДIМ (Epizootic diarrhea of infant mice). В 1958 г. выделен вирус SA-11 из фекалий обезьяны, вирус NCDN (Nebraska calf diarrhea virus) - возбудитель ротавирусной инфекции телят, выделен от больных телят.

Эпизоотологические данные болезни. Источником возбудителя ротавирусной болезни свиней являются переболевшие и латентно инфицированные животные. Ротавирус выделяется во внешнюю среду с фекалиями (до 10¹⁰ вирусных частиц в 1 г фекалий). Заражение происходит алиментарным путем. Передача возбудителя осуществляется путем непосредственного прямого контакта здоровых животных с больными, а также косвенно через обслуживающий персонал, корма, транспортные средства и т.д. Наиболее чувствительными к болезни являются новорожденные поросята 7--10- дневного возраста. Заболеваемость их составляет 50--80 %, летальность --до 50 %. На летальный исход животных существенно влияют сопутствующие инфекции (ТГС, колибактериоз), которые осложняют течение болезни и приводят к более высокой смертности (до 80—90 %).

Взрослые свиньи, переболевая бессимптомно, выделяют в окружающую среду с фекалиями большое количество ротавирусов, которые передаются молодняку. Чаще всего ротавирус обнаруживают у новорожденных поросят в возрасте 21--41 день и преимущественно у приплода от свиноматок-первоопоросок. Инфекцию в стаде поддерживают переболевшие поросята, которые остаются вирусоносителями, а также взрослые особи, переболевшие ротавирусной инфекцией без проявления клинических признаков. Эти животные длительное время являются источником возбудителя инфекции и способствуют циркуляции ротавируса в хозяйстве.

Ротавирусная болезнь, как правило, протекает в виде энзоотии. Заболевание (как и при трансмиссивном гастроэнтерите) имеет тенденцию к стационарности. Однажды возникнув в хозяйстве, болезнь регистрируется в течение нескольких лет, обостряясь в осенне-зимни<

⇐ Предыдущая234567891011Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: