 |
Реакция связывания комплемента
|
|
|
|
Цель:
серодиагностика: определение Ат в сыворотке пациента;
сероидентификация: определение Аг(исследуемый материал).
Сущность - используется две конкурирующие системы Аг и Ат и один комплемент.
Реакция связывания комплемента
1 система – основная (исследуемая или тест-система): Серодиагностика: сыворотка больного (Ат) + антиген + комплемент (реакция связывания комплемента).
Сероидентификация: исследуемый материал, содержащий Аг (моча, ликвор, носоглоточный смыв и др.) + диагностическая сыворотка (известные Ат) + комплемент (реакция связывания комплемента).
2 система - индикаторная или гемолитическая: выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы: эритроциты барана и антиглобулиновая кроличья сыворотка - свободный комплемент вызывает гемолиз. При отсутствии свободного комплемента (связывание с 1 системой) – задержка гемолиза.
Реакция Вассермана
Цель: серодиагностика сифилиса
51. РЕАКЦИИ ИММУННОГО ЛИЗИСА: В основе реакции лежит способность специфических антител образовывать иммунные комплексы с клетками, в том числе с эритроцитами, бактериями, что приводит к активации системы комплемента по классическому пути и лизису клеток. Из реакций иммунного лизиса чаще других применяется реакция гемолиза и редко - реакция бактериолиза (главным образом при дифференциации Холерных и холероподобных вибрионов).
Реакция гемолиза (Ag – эритроцит);
Реакция бактериолиза (Ag – бактерии);
Реакция цитолиза (Ag – клетка).
РЕАКЦИЯ ГЕМОЛИЗА
Цель:
Для определения титра и активности системы
комплемента (радиального гемолиза).
Как индикатор для оценки РСК.
|
|
|
Компоненты (ингредиенты) – Аг (эритроциты барана) + Ат (гемолитическая сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана) + комплемент (сыворотка крови морской свинки).
Титрование комплемента.Для этого свежую сыворотку морской свинки разводят изотоническим раствором хлорида натрия от 1:10 до 1:40 (табл. 18). К 0,2 мл каждого разведения комплемента добавляют по 0,4 мл гемолитической системы (смеси равных объемов 3 % суспензии эритроцитов в (изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки в разведении, соответствующем ее тройному титру). Пробирки выдерживают при 37°С и через 30 мин
титр комплемента—наибольшее разведение комплемента, которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки.
Рабочая доза комплемента должна быть выше титра на 25%.
50. комплемент является компонентом многих иммунологических реакций, направленных на освобождение организма от микробов и других чужеродных клеток и антигенов.
Свойста:
а) участвует в лизисе микробных и других клеток (цитотоксическое действие);
б) обладает хемотаксической активностью;
в) принимает участие в анафилаксии;
г) участвует в фагоцитозе.
Пути активации
По классическому пути комплемент активируется комплексом антиген-антитело. Для этого достаточно участия в связывании антигена одной молекулы IgM или двух молекул IgG. Процесс начинается с присоединения к комплексу АГ+АТ компонента С1, который распадается на субъединицы C1q, C1r и С1s. Далее в реакции участвуют последовательно активированные «ранние» компоненты комплемента в такой последовательности: С4, С2, СЗ. когда одна молекула предыдущего компонента активирует несколько молекул последующего. «Ранний» компонент комплемента С3 активирует компонент С5, который обладает свойством прикрепляться к мембране клетки. На компоненте С5 путем последовательного присоединения «поздних» компонентов С6, С7, С8, С9 образуется литический или мембраноатакующий комплекс который нарушает целостность мембраны (образует в ней отверстие), и клетка погибает в результате осмотического лизиса.
|
|
|
Альтернативный путь активации комплемента проходит без участия антител. Этот путь характерен для защиты от грамотрицательных микробов. Каскадная цепная реакция при альтернативном пути начинается с взаимодействия антигена (например, полисахарида) с протеинами В, D и пропердином (Р) с последующей активацией компонента СЗ. Далее реакция идет так же, как и при классическом пути — образуется мембраноатакующий комплекс.
Лектиновый путь активации комплемента также происходит без участия антител. Он инициируется особым маннозосвязывающим белком сыворотки крови, который после взаимодействия с остатками маннозы на поверхности микробных клеток катализирует С4. Дальнейший каскад реакций сходен с классическим путем.
49.РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ:
сущность:осаждение (преципитация) антигена, находящегося в коллоидном состоянии, под воздействием специфических антител в растворе электролита.
Применение
1. диагностика инфекционных заболеваний
2. судебная-медицинская экспертиза
*определение видовой принадлежности белков – при анализе кровяных пятен,спермы и т.д.
3. санитарная практика:выявление фальсификации рыбных и мясных изделий.
Цель: сероидентификация.
Преципитоген - антиген
• Преципитин – антитело
Преципитат – иммунный комплекс (осадок), образующийся в результате РП.
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ: по Асколи В пробирке: высокочувствительная (как всякая РП)
Компоненты (ингредиенты) - последовательные разведения антигена экстрагированные из исследуемого материала – шерсти животного) наслаивают на стандартные разведения диагностической преципитирующей сыворотки; титр РП – максимальное разведение антигена, при котором наблюдается кольцо преципитации.
в геле ►преимущество по сравнению с пробирочной - гель, высокоочищенный агар, выполняет функцию локализации преципитата, т.к. он, в отличие от антител и антигенов, не может диффундировать в геле.
|
|
|
