Иммобилизованные биообъекты и их многократное использование.

Иммобилизация ферментов существенно повышает их стабильность и позволяет длительно использовать одну партию или серию промышленного биокатализатора. Иммобилизованные клетки например можно использовать неделями и месяцами и при этом они не теряют жизнеспособность.

Использование иммобилизованных ферментов в органическом синтезе

На основе иммобилизованной пеницилиномидазы реализован процесс эффективного деацелирования бензилпенициллина, который является сырьем для получения 6-АПК. Протекает в одну стадию при обычных условиях(t = +10-40). Иммобилизованные ферменты применяются для получения простогландинов, тромбоксанов, простоциклина из арахидоновой кислоты. Ключевым ферментом является простогландинэндопероксидсинтетаза, катализирующая трехсубстратную реакцию: опряженное окисление арахидоновой кислоты кислородом и донором электронов в виде триптофана или феррацианида. Сама арахидоновая кислота может быть получена из масел с помощью использования специфических фосфолипаз.

Нерастворимые носители органической и неорганической природы.

Органические полимерные носители. Существующие органические полимерные носите­ли можно разделить на два класса: природные и синтетические полимерные носители. В свою очередь, каждый из классов орга­нических полимерных носителей подразделяется на группы в за­висимости от их строения. Среди природных полимеров выделя­ют белковые, полисахаридные: целлюлоза, декстран, агароза (агар) и липидные носители, а среди синтетических- полиметиленовые, полиамидные и полиэфир­ные.

К преимуществам природных носителей следует отнести их доступность, полифункциональность и гидрофильность, а к недо­статкам - биодеградируемость и достаточно высокую стоимость.

Синтетические полимерные носители. Благодаря разнообразию и доступности материалы этой группы широко используются как носители для иммобилизации. К ним относятся полимеры на ос­нове стирола, акриловой кислоты, поливинилового спирта; по­лиамидные и полиуретановые полимеры. Большинство синтети­ческих полимерных носителей обладают механической прочнос­тью, а при образовании обеспечивают возможность варьирования в широких пределах величины пор, введения различных функци­ональных групп. Некоторые синтетические полимеры могут быть произведены в различных физических формах (трубы, волокна, гранулы). Все эти свойства полезны для разных способов иммоби­лизации ферментов.

Носители неорганической природы. В качестве носителей наи­более часто применяют материалы из стекла, глины, керамики, графитовой сажи, силикагеля, а также силохромы, оксиды ме­таллов. Их можно подвергать химической модификации, для чего носители покрывают пленкой оксидов алюминия, титана, гаф­ния, циркония или обрабатывают органическими полимерами. Основное преимущество неорганических носителей - легкость регенерации. Подобно синтетическим полимерам неорганическим носителям можно придать любую форму и получать их с любой степенью пористости

Иммобилизация за счет образования ковалентных связей между ферментом и носителем.

Иммобилиза­ция ферментов путем образования новых ковалентных связей между ферментом и носителем - наиболее массовый способ получения промышленных биокатализаторов.

В отличие от физических методов этот способ иммобилизации обеспечивает прочную и необратимую связь фермента с носите­лем и часто сопровождается стабилизацией молекулы энзима. Од­нако расположение фермента относительно носителя на расстоя­нии одной ковалентной связи создает стерические трудности в осуществлении каталитического процесса. Фермент отделяют от носителя с помощью вставки (сшивка, спейсер), в роли которой чаще всего выступают бифункциональные и полифункциональ­ные агенты (бромциан, гидразин, сульфурилхлорид, глутаровый диальдегид и др.). Принципиально важно, чтобы в иммобилизации фермента уча­ствовали функциональные группы, не существенные для его ка­талитической функции.

Адсорбция ферментов на инертных носителях и ионообменниках.

При ад­сорбционной иммобилизации белковая молекула удерживается на поверхности носителя за счет электростатических, гидрофобных, дисперсионных взаимодействий и водородных связей. Процесс адсорбции ферментов на нерастворимых носителях отличается край­ней простотой и достигается при контакте водного раствора фер­мента с носителем (статистическим способом, при перемешива­нии, динамическим способом с использованием колонок). С этой целью раствор фермента смешивают со свежим осадком, напри­мер, гидроксида титана, и высушивают в мягких условиях. Актив­ность фермента при таком варианте иммобилизации сохраняется практически на 100 %, а удельная концентрация белка достигает 64 мг на 1 г носителя.

К недостаткам адсорбционного метода следует отнести невы­сокую прочность связывания фермента с носителем. При измене­нии условий иммобили-зации могут происходить десорбция фер­мента, его потеря и загрязнение продуктов реакции. Существенно повысить прочность связывания фермента с носителем может предварительная его модификация (обработка ионами металлов, полимерами, белками, и пр.). Иногда, наоборот, модификации подвергается молекула исходного фер­мента, однако зачастую это ведет к снижению его активности.

Иммобилизация ферментов путем включения в структуру геля.

Способ иммобили-зации ферментов путем включения в трехмерную струк­туру полимерного геля широко распространен благодаря своей простоте и уникальности. Иммобилизацию ферментов в геле осуществляют двумя способами. В первом случае фермент вво­дят в водный раствор мономера, а затем проводят полимериза­цию, в результате которой возникает пространственная структура полимерного геля с включенными в его ячейки молекулами фер­мента. Во втором случае фермент вносят в раствор уже готового полимера, который впоследствии переводят в гелеобразное со­стояние. Для первого варианта используют гели полиакриламида, поли-винилового спирта, поливинилпирролидона, силикагеля, для второго - гели крахмала, агар-агара, каррагинана, агарозы, фос­фата кальция.

Иммобилизация ферментов в гелях обеспечивает равномерное распределение энзима в объеме носителя. Большинство гелевых матриц обладает высокой механической, химической, тепловой и биологической стойкостью и обеспечивает возможность много­кратного использования фермента, включенного в его структуру. Однако метод непригоден для иммобилизации ферментов, дей­ствующих на водонерастворимые субстраты.

⇐ Предыдущая123456Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: