Дифференциация биоваров V.cholerae 01

Признаки	Биовары V.cholerae 01
	eltor	cholerae
Лизабельность монофагами: eltorcholerae	+	-
Чувствительность к 30 Емл полимиксина	-(+)	+
Образование ацетилметилкарбинола	+-	-

 

Методы ускоренной диагностики

Метод флюоресцирующих антител. Для выявления холерных вибрионов серогруппы 01 применяют прямой метод в соответствии с «На­ставлением по применению сыворотки холерной люминесцирующей». Для вы­явления холерных вибрионов серогруппы, 0139 используют непрямой МФА.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Используется для выявления холерных вибрионов по методике, изложенной в «Наставлении по применению диагностикума холерного эритроцитарного антительного».

Реакция объемной агглютинации (РОЛ). Для обнаружения холерных вибрионов реакция ставится по типу РНГА в соответствии с наставлением по применению холерного иммуноглобулилового диагностикума на основе поли­мерных микросфер.

Метод иммобилизации вибрионов специфической холерной О - сывороткой. Напредметное стекло наносят по одной капле испражнений, рвотных масс или верхнего слоя пептонной воды. Первую каплю накрывают покровным стеклом (контроль), ко второй добавляют каплю 01 сыворотки в разведении 1:100, перемешивают и также накрывают стеклом. Раздавленную каплю смотрят под микроскопом при увеличении 400-600х, используя фазово-контрастное устройство или конденсор темного поля. При наличии в исследуемом образце холерных вибрионов в первой капле наблюдают характерную подвижность, во второй - иммобилиз ацию отдельны х микробны х клеток и образование микроагглютинатов немедленно или в течение 1-2 мин.

 

Иммунологические исследования

Данные методы исследований имеют дополнительное значение, и лишь в отдельны х случаях результаты их могут быть решающими в ретроспективной диагностике заболеваний. Для этиологической диагностики используют иммунологические реакции, выявляющие в сыворотке больных, переболевших, вибриононосителей, вакцинированных специфические антитела: агглютинины, вибриоцидины, антитоксины. У больных холерой на 5-7-й день заболевания появляются агглютинины и вибриоцидные антитела в высоких титрах. Титры ан­титоксинов нарастают медленнее. Исследуют парные сыворотки.

Определение агглютининов методом развернутой реакции агглютинации. Исследуемую сыворотку разводят 1% пептонной водой (рН 7,5) в объе­ме 1 мл от 1:30 до 1:640, в качестве антигена используют 3-часовую бульонную культуру..В пробирки с раститрованной сывороткой вносят по 1 капле культу­ры-антигена и ставят на час в термостат, затем до утра в холодильник при 40,5 °С, после чего отмечают результаты. Реакция сопровождается контролями антигена и сыворотки. Результат в разведении 1:40 и выше считается ориенти­ровочно положительным. Диагностическое значение имеет 4-кратное нараста­ние титра антител. •

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с антигенным холерным эритроцитарным диагностикумом. Ставится по методике, изложенной в наставлении к препарату.

Реакция нейтрализации антигена (РНАг) для выявления антител с использованием холерного иммуноглобулинового эритроцитарного диагностикума. Методика ее постановки изложена в наставлении к диагностакуму. Диагностическое значение имеет не менее чем 4-кратное нарастание титров ан­тител при исследовании парных сывороток в РИГА и РНАг.

Определение вибриоцидных антител в сыворотке крови (РВА). Прин­цип метода во всех его вариантах заключается в том, что в присутствии вибриоцидных антител не происходит размножения холерных вибрионов.

РИГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим диагностикумом. Предназначена для определения в сыворотке больных холерой, вибрионосителей и привитых холерогенанатоксином антител, нейтрализующих холерный токсин. Токсиннейтрализующие антитела появляются на 5-6-й день болезни, достигают максимума на 14-21 день. Диагностическим титром следует считать 1:160. Этой реакций можно также выявлять токсиннейтрализирующие антитела в сыворотке крови больных и вибриононосителей, у которых инфицирование обусловлено холерными вибрионами серогруппы 0139.

Для этиотропной терапии используют антибиотики.

Специфическая профилактика не разработана.

 

Вопросы для обсуждения

1. Классификация вибрионов.

2. Биология возбудителей.

3. Патогенез холеры.

4. Методы лабораторной диагностики холеры.

5. Бактериологический метод исследования холеры.

6. Ускоренная диагностика холеры.

7. Лечение и профилактика холеры.

Самостоятельная работа студентов

1. Познакомиться со схемой исследования при диагностике холеры.

2. Познакомиться с подготовкой материала к отправке в лабораторию (демонстрация).

3. Выписать направления для исследования испражнений.

4. Изучить ход исследования испражнений на наличие холерных вибрионов:

а) познакомиться с ускоренной диагностикой холеры;

б) познакомиться с методом иммобилизации и микроагглютинации, посмотреть демонстрационные препараты под микроскопом;

в) сделать посев испражнений на первую пептонную воду и щелочной агар.

5. Изучить дальнейший ход исследования испражнений:

а) приготовить мазки из колоний на щелочном агаре, окраска по Граму;

б) изучить подвижность микробов из колоний в раздавленной капле;

в) сделать посев культуры в пробирки с лактозо-сахорозной средой;

г) поставить агглютинацию с О-сывороткой.

6. Познакомиться с идентификацией выделенной чистой культуры (демонстрация):

а) рост на лактозо-сахарной среде;

б) проба на диастазу;

в) развернутая реакция агглютинации с О-холерной сывороткой;

г) биохимические свойства (среды Гисса);

д) нитрозо-индоловая реакция;

е) гемолиз;

ж) учесть результаты пробы с диагностическим холерофагом.

7. Познакомиться с препаратами, применяемыми для диагностики, лечения и профилактики холеры.

 

Выполненную работу и полученные результаты

оформить в виде протокола по схеме:

 

Протокол бактериологического исследования

 

Материал для исследования:

Предполагаемый диагноз:

Цель исследования:

 

Этапы исследования	Ход исследования	Результаты исследования с предварительными выводами

Заключение:

ЭШЕРИХИОЗЫ

Группа инфекционных заболеваний, вызываемых микроорганизмами ро­да Escherichia. При эшерихиозах наблюдается диарея с выраженны м болевы м синдромом.

Цель занятия: выработать навыки лабораторного анализа эшерихиоза.

Знать:

- возбудителей эшерихиозов;

- биологию возбудителей;

- эпидемиологию возбудителей;

- лабораторную диагностику.

Уметь:

- интерпретировать полученные результаты бактериологического анали­за эшерихиозов;

- оценить результаты антибиотикограмм;

- подобрать препараты для специфической профилактики и терапии заболеваний.

Раздел	Вопросы для изучения
Биология возбудителя	Таксономическое положение 1. Таксономическое положение. Семейство Enterobacteriaceae, род Escherichiae 2. Морфологические свойства: Гр-палочки. Подвижны. 3. Тип дыхария: факультативные аэробы. 4. Культураутьные свойства: элективные питательные среды - Эндо, Плоскирева. 5. Биохимические свойства: оксидаз оотрицательны, активно ферментируют углево­ды с образфанием К и Г индол + сероводород - 6. Антигенное строение: О – Аr - более 170 вариантов; К – Аr - более 100 вариантов; Н – Аr - около 60 вариантов.
Патогенез	Возбудителями являются четыре группы Е. coli 1) энтеротоксигенные (ЭТКП) 2) энтероинвазивные (ЭИКП) 3) энтеропатогенные (ЭПКП) 4) энтерогеморрагические (ЭГКП)
Лабораторная диагностика	Основной метод диагностики - бактериологический: 1) посев на дифференциально-диагностические среды; 2) выделение чистой культуры; 3) биохимическая идентификация; 4) сероидентификация. Определение принадлежности к серогруппам позволяет отличить условно-патогенные от диареегенных. Внутривидовая идентификация, имеющая эпидемиологическое значение, заключается в определении серовара с помощью диагностических адсорбированных иммунных сывороток.

Специфическая профилактика не разработана.

 

ВОПРОСЫ ДЛЯ ОБСУЖДЕНИЯ

1. Биология возбудителя фнпечных эшерихиозов.

2. Эпидемиология, патогенез, клиника.

3. Микробиологическая диагностика.

4. Специфическое лечение и профилактика.

 

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

1. Используя демонстрационный материал, провести 2-й и З-й эта­пы бактериологического исследования испражнений для выде­ления возбудителя кишечного эшерихиоза.

2. Оценить результаты посеве испражнений на среду Эндо. Результат записать в протокол.

3. Поставить РА с поливалентной ОК - сывороткой.

4. Используя демонстрацию, оценить результаты посева агглюти­нирующихся ОК - сывороткой, лактозоположительных колоний на среде Клиглера.

5. Определить серогруппу выделенной на среде Клиглера культуры диареегенной кишечной палочки.

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: