Реакция связывания комплемента (РСК)

Реакция ставится:

1) для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий и других высокодисперстных веществ, риккетсий и вирусов, комплексы которых с агглютининами в обычных РА увидеть не удается,

2) для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперстным веществам и мельчайшим микроорганизмам.

Под непрямой, или пассивной, агглютинацией понимают реакцию, в которой антитела взаимодействуют с антигенами, предварительно адсорбированными на инертных частицах (латекс, целлюлоза, полистерол, оксид бария и др. или эритроциты барана, I(0)-группы крови человека)

В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика). Если нагрузить эритроциты антителами (эритроцитарный антительный диагностикум), то можно применять для выявления антигенов.

Постановка. В лунках полистироловых планшетов готовят ряд последовательных разведений сыворотки. В предпоследнюю лунку вносят - 0,5 мл заведомо положительной сыворотки и в последнюю 0,5 мл физиологического раствора (контроли). Затем во все лунки добавляют по 0,1 мл разведенного эритроцитарного диагностикума, встряхивают и помещают в термостат на 2 ч.

Учет. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном - оседают в виде пуговки или колечка

41.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ. РЕАКЦИЯ ЛИЗИСА. РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА

Для постановки реакции лизиса и реакции связывания комплемента (РСК) используют комплемент, который содержится в сыворотке крови морских свинок. Гемолитическая активность комплемента термолабильна и полностью утрачивается при прогревании сыворотки в течение 30 мин при 56°С. При адсорбции комплемента на комплексе антиген — антитело его действие проявляется в реакции лизиса антигена, если это клетки, или не сопровождается никакими видимыми изменениями, если это мелкодисперсные или растворимые антигены. Для учета результатов данной реакции РСК вводят вспомогательную (индикаторную) гемолитическую систему. Она состоит из взвеси эритроцитов барана в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки кролика, полученной путем его иммунизации упомянутыми эритроцитами. Положительная РСК характеризуется задержкой гемолиза вследствие адсорбции комплемента системой антиген — антитело (рис. 60). Отрицательная РСК характеризуется наличием гемолиза, поскольку свободный комплемент связывается с системой эритроциты барана — гемолитическая сыворотка кролика. РСК обладает высокой чувствительностью й специфичностью, что позволяет использовать ее для серодиагностики многих заболеваний, а также для выявления антигенов в крови больного. Кроме того, ее применяют для идентификации бактерий, вирусов и других антигенов.

42.Вакци́на— медицинский или ветеринарный препарат, предназначенный для создания иммунитета к инфекционным болезням. Вакцина изготавливается из ослабленных или убитых микроорганизмов, продуктов их жизнедеятельности, или из их антигенов, полученных генно-инженерным или химическим путём. Классификация
Различают живые, корпускулярные (убитые), химические и рекомбинантные.
Живые вакцины
Живые вакцины изготовляют на основе ослабленных штаммов микроорганизма со стойко закрепленной авирулентностью (безвредностью). Вакцинный штамм после введения размножается в организме привитого и вызывает вакцинальный инфекционный процесс. У большинства привитых вакцинальная инфекция протекает без выраженных клинических симптомов и приводит к формированию, как правило, стойкого иммунитета. Примером живых вакцин могут служить вакцины для профилактики краснухи, кори, полиомиелита, туберкулеза, паротита.
Корпускулярные вакцины
Корпускулярные вакцины содержат ослабленные или убитые компоненты вириона (вирионы). Для умерщвления обычно используют тепловую обработку или химические вещества (фенол, формалин, ацетон)
Химические вакцины
Создаются из антигенных компонентов, извлеченных из микробной клетки. Выделяют те антигены, которые определяют иммуногенные характеристики микроорганизма.
Рекомбинантные вакцины
Для производства этих вакцин применяют методы генной инженерии, встраивая генетический материал микроорганизма в дрожжевые клетки, продуцирующие антиген. После культивирования дрожжей из них выделяют нужный антиген, очищают и готовят вакцину. Примером таких вакцин может служить вакцина против гепатита В, а также вакцина против вируса папилломы человека (ВПЧ) Вакцинация - один из наиболее успешных методов борьбы с инфекционными заболеваниями. Суть его заключается в следующем: ввести в организм пациента инфекционный агент (или идентичный ему искусственно синтезированный белок), который будет стимулировать образование антител. Эти антитела будут вести борьбу с возбудителями инфекции, что позволит выработать для конкретного заболевания стойкий иммунитет в организме человека.

Так современная медицина с успехом борется с вирусами различных заболеваний: краснухи, кори, свинки, гепатита B, полиомиелита или бактериями – возбудителями следующих болезней: коклюша, туберкулеза, столбняка, дифтерии и др. Вакцинация проводится в зависимости от вида инфекций однократно или многократно.

Ревакцинация представляет собой процедуру, которая ориентируется на поддержание иммунитета, сложившегося в связи с предыдущими прививками. Ее делают строго через определенное время от первой прививки конкретного в данном случае возбудителя инфекции.

Например, на сроке 3-7 дней жизни ребенка с целью профилактики туберкулеза под кожу вводится вакцина БЦЖ, которая является проверенным временем средством защиты от этого заболевания.

В шесть или семь лет жизни малыша осуществляется ревакцинация против этого заболевания. Предварительно ребенку проводится проба Манту для того, чтобы выяснить, какова потенциальная невосприимчивость малыша к инфекции этого заболевания. В случае отрицательного результата вводится вакцина БЦЖ-м. Если туберкулез не лечить, то это может быть чревато серьезными осложнениями: болезнь может принять хронический характер и в результате вызвать летальный исход.

Если проба Манту проявляется положительная, то есть размер прививочного рубчика может составлять или пять миллиметров или более этой величины, в этом случае лекарственные препараты не вводятся.

В возрасте 1 года малышу проводят вакцинацию против краснухи, эпидемического паротита и кори. А ревакцинация против этих опасных инфекционных заболеваний - в шесть лет. Это самые распространенные детские заболевания, и лекарственные процедуры против этих инфекций нужно производить в обязательном порядке. А перед школой нужно пройти комплексную вакцинацию.

Кроме вышеперечисленных процедур ребенок проходит первичные вакцинации и ревакцинации, чтобы выработать иммунитет против различных заболеваний.

43.ИС-иммуннологические сыворотки
ИС-сыворотка крови, полученная от человека или животного, иммунизированного каким-либо антигеном, и содержащая антитела к этому антигену; применяется в качестве лечебного или диагностического средства.
Её используют для создания исскуственного иммуннитета.как правило они применяются для лечения,а редко для профилактики, например столбняк. исскуственный пассивный имменитет не стойкий в отличии от активного.
Виды ИС:
-гомолитический-от человека
-гетерологический-от животного
Их поучают от доноров или животных(например лошадь)
ЕМОГЛОБИНЫ
красные железосодержащие пигменты крови и гемолимфы, обратимо связывающие мол. кислород; сложные белки, состоящие из железопор-фириновой простетич. группы (гема) и белка глобина. Обеспечивают перенос О2 от органов дыхания к тканям и углекислоты от тканей к органам дыхания, участвуют в поддержании рН крови. Имеются у всех позвоночных, за исключением нек-рых антарктич. рыб, у мн. беспозвоночных. В крови находятся в эритроцитах (у позвоночных и нек-рых беспозвоночных) или свободно растворены в плазме (у большинства беспозвоночных). Мол. м. Г. млекопитающих 66000— 68000, птиц, рыб, земноводных, пресмыкающихся t>l000—72000, у беспозвоночных (у к-рых Г. растворён в плазме) — до 3000000. Молекула Г. большинства высших позвоночных построена из полипептидных цепей, к каждой из к-рых присоединён гем, способный без изменения валентности атомов Fe(II) присоединять и отдавать О2. В собранной в тетрамер молекуле Г. все 4 остатка гема расположены на поверхности и легко доступны для О2. Видовая специфичность Г., обладающих разл. сродством к О2, обусловлена их белковыми компонентами. Г. взрослого человека (НbА) содержат две идентичные а-цепи (в каждой 141 аминокислотный остаток) и две b-цепи (в каждой 146 остатков), Г. плода, или фетальный Г. (HbF), состоит из двух а- и двух b-цепей. Соотношение разл. форм Г. в крови меняется в процессе развития организма, нек-рые из них различаются по своему сродству к О2 (у HbF оно выше, чем у НbА, что обеспечивает большую устойчивость организма плода к недостатку О2). Присоединение О2 к Г. в органах дыхания (оксигенация) с образованием оксигемоглобина обеспечивается содержанием в геме Fe2+ и сопровождается кон-формационной перестройкой молекулы Г.— связывание Ог с одним из четырёх гемов изменяет трёхмерную структуру Г. и сродство др. гемов к О2 (4-й гем окси-генируется в 500 раз быстрее). Этот механизм значительно улучшает снабжение тканей кислородом. Оксигенация зависит от парциального давления (напряжения) О2 и косвенно регулируется кол-вом СО2 (как правило, СО2 облегчает отдачу О2 тканям, а выход СО2 из крови, наоборот, способствует её насыщению О2). Важную роль в связывании Г. О2 играет 2,3-дифосфоглицериновая к-та и нек-рые анионы, такие, как С1. В капиллярах лёгких парциальное давление О2 составляет ок. 0,15 атм (несколько ниже, чем в выдыхаемом воздухе). При таком давлении Г. оксигенирован на 96%; в тканях, где парциальное, давление ок. 0,04 атм,— на 20%. Кол-во Г. в 100 мл крови человека 13—16 г (у женщин несколько меньше, чем у мужчин). 1 г Г. (при обычном парциальном давлении в альвеолах) может связывать до 1,34 мл О2. Каждые 100 мл крови, протекая по тканевым капиллярам, отдают тканям ок. 5— 6,5 мл О2. В состоянии покоя через сердце человека протекает ок. 4 л крови в мин, что обеспечивает получение тканями ок. 200 мл О2. При напряжённой мыщечной работе поглощение О2 тканями возрастает в 10 и более раз. Г. синтезируется в молодых формах эритроцитов непрерывно, что обеспечивает его постоянное обновление в организме; скорость синтеза заметно возрастает при длит, гипоксии или анемии. Ежесекундно образуется ок. 650-1012 молекул Г. (в каждом эритроците 265-106 молекул Г.). -«Сборка» всей молекулы Г. занимает ок. 90 сек. Синтез Г. у позвоночных регулируется гормоном эритро-поэтином и контролируется 4 генами, обозначаемыми по названию полипептидных цепей. Г., освобождающиеся при разрушении эритроцитов,— источник образования жёлчных пигментов. В результате мутаций генов, кодирующих биосинтез полипептидных цепей, и замены одних аминокислотных остатков на другие могут образовываться аномальные Г. (у человека известно ок. 300 таких форм Г.), что приводит к развитию заболеваний — гемоглобинопатии (серповидноклеточная анемия, талассемия и др.). В мышечной ткани содержится мышечный Г.— миоглобин. Аналоги Г., напр. легоглобин, обнаружены у нек-рых растений.
Серопрофилактика — профилактика заболеваний инфекционных с помощью иммунных сывороточных препаратов (см. Иммунизация пассивная).
Серотерапия — лечение заболеваний инфекционных иммунными сывороточными препаратами, особенно при токсинемических инфекциях.
Система паразитарная — популяция паразита во взаимодействии с популяцией специфического хозяина и с необходимыми для него условиями существования. Система, в которой хозяином паразита является человек, составляет биологическую основу процесса эпидемического, а паразитарная система, в которой хозяином паразита служат животные, составляет биологическую основу эпизоотического процесса. Паразитарными системами являются также биологической основой очага природного болезни инфекционной. По составу может быть двучленной (возбудитель и теплокровное животное) и трёхчленной (возбудитель, членистоногий переносчик, теплокровное животное). Характер функционирования каждой паразитарной системы определяется механизмом передачи возбудителя и взаимными влияниями составляющих её видовых популяций.
Система противоэпидемическая (син. система противоэпидемической защиты — обеспечения населения) — совокупность медицинских и немедицинских сил и средств, взаимосвязанных между собой определенными отношениями с целью предупреждения и снижения заболеваемости, а также ликвидации отдельных инфекций. Медицинские силы и средства включают: амбулаторно-поликлинические и лечебно-профилактические организации; органы и учреждения санитарно-эпидемиологические службы; профильные НИИ, профильные кафедры вузов. Немедицинские силы и средства в системе противоэпидемического обеспечения представлены органами власти, учреждениями (предприятиями, хозяйственными организациями) и населением.

44.
АГ-антиген
АТ-антитело
Аллергия-это состояние повышенной чувствительности ор-зма к повторной синсибиляции (повторное внедрение АГ)
Аллерген-это АГ на которые в ор-зме возникает аллергическая р-ция. Аллерген может быть различного происхождения:
1.бытовой
2.лекарственный
3.животного происхождения
4.ростительными
5.пищевыми
6.инфекционными
Любая форма аллергена это защитная р-ция ор-зма,но она может нести патогенный хар-р, т.к гибель АГ осуществляется за счет гибели собственных клеток и тканей ор-зма
По механизму и клиническим выявлениям выделяют 4 типа аллергии:
1.Анафилактический-образование АГ-АТ, которые фиксированы на различных клетках мешенях, тучных клетках, базофилах, синсибилизируя их к соответственному аллергену, при повторном попадании аллергена в ор-зм происходит выделение мидеаторов аллергии, которые вызывают соответственную картину(анафилактический шок)
2.цитотоксический-при повторной синсибилизации АГ атсарбируеться на мембране соответственных клеток, поэтому вырабатываются АТ являются АТ тканевым АГ,образует комплекс АГ-АТ видет к цитолизу или гибели в собственных клетках
3.иммуннокмплексный- при повторном введении АГ избыток комплекса АГ-АТ приводит к мощьной активации комплемента, он оказывает повреждение действием на клетки и ткани ор-зма
4.клеточный-в его основе приобладает клеточный иммуннитет за развитие р-ции ответов Т-киллеров развиваеться ГЗТ, лежит в основе инфекционной аллергии (И.А)
И.А-это слабый аллерген
При ряде инфекций используют аллергический метод диагностики, который заключается в постановке кожноаллергических проб:
1.при тубике-проба Манту с туберкумена
2.при гонореи-проба с Гонов вакций
3.при бруцелёзе –проба бюрне с бруцилин
4.при туляремии-проба с туляреминоем
5.при сибирской язве- проба с антраксином

45.1.микроскопический — позволяет обнаружить возбудителя непосредственно в материале, взятом от больного. Для этого мазок окрашивают различными способами. Этот метод играет решающую роль при диагностике многих инфекционных заболеваний: туберкулеза, малярии, гонореи и др.;

2) бактериологический — заключается в посеве исследуемого материала на питательные среды.
Этот метод позволяет выделить возбудителя в чистом виде и изучить его морфологические признаки, ферментативную активность и идентифицировать его;

3) биологический метод — осуществляют путем выделения возбудителя при заражении лабораторных животных, которые восприимчивы к данному заболеванию. Этот метод дорогостоящий, поэтому применяется ограниченно;

4) серологические методы исследования — основаны на выявлении специфических иммунных антител в сыворотке крови больного.
Для этого используют различные иммунологические реакции: реакция Видаля (используется для выявления брюшного тифа);

5) аллергический метод — ставятся кожно-аллергические пробы, введение аллергена накожно или внутрикожно; используются для диагностики туберкулеза, туляремии, лепры и т. д.

46.Специфика микробиологических работ требует, чтобы помещение, отведённое под лабораторию, было изолировано от больничных палат, жилых комнат, пищевых блоков. В состав бактериологической лаборатории входят: лабораторные комнаты для бактериологических исследований и подсобные помещения; автоклавная или стерилизационная для обеззараживания отработанного материала и заражённой посуды; моечная, оборудованная для мытья посуды; средоварочная для приготовления, розлива, стерилизации и хранения питательных сред; виварий для содержания подопытных животных; материальная для хранения запасных реактивов, посуды, аппаратуры и хозяйственного инвентаря.
Перечисленные подсобные помещения как самостоятельные структурные единицы входят в состав крупных бактериологических лабораторий. В небольших лабораториях средоварочную и стерилизационную объединяют в одной комнате; специальное помещение для содержания подопытных животных отсутствует.
Под лабораторные комнаты, в которых производят все бактериологические исследование, отводят наиболее светлые, просторные помещения. Стены в этих комнатах на высоту 170 см от пола окрашивают в светлые тона масляной краской. Пол покрывают релином или линолеумом. Такого рода отделка позволяет пользоваться при уборке помещения дезинфицирующими растворами.
В каждой комнате должна быть раковина с водопроводной подводкой и полкой для бутыли с дезинфицирующим раствором.
В одной из комнат оборудуют застеклённый бокс с предбоксником для выполнения работ в асептических условиях. В боксе ставят стол для произведения посевов, табурет, над рабочим местом монтируют бактерицидные лампы. В предбоксник помещают шкаф для хранения стерильного материала. Лабораторное помещение оборудуется столами лабораторного типа, шкафами и полками для хранения необходимой при работе аппаратуры, посуды, красок, реактивов.
Очень большое значение для работы имеет правильная организация рабочего места врача-бактериолога и лаборанта. Лабораторные столы устанавливают около окон. При размещении их нужно стремиться к тому, чтобы свет падал спереди или сбоку от работающего, лучше с левой стороны, но ни в коем случае не сзади. Желательно, чтобы комнаты для проведения анализов, особенно для микроскопирования, имели ориентацию окон на север или северо-запад, так как для работы необходим равный рассеянный свет. Освещённость поверхности столов для работы должна быть 500 лк. Для удобства дезинфекции поверхность лабораторных столов покрывают пластиком, а каждое рабочее место на нём — зеркальным стеклом.
За каждым сотрудником лаборатории закрепляют отдельное рабочее место площадью 150×60 см. Все рабочие места оборудуют предметами, необходимыми для повседневной работы. Особенностью бактериологических работ является постоянное соприкосновение сотрудников лаборатории с заразным материалом, культурами патогенных микробов, заражёнными животными, кровью и выделениями больного. Поэтому все сотрудники бактериологической лаборатории обязаны соблюдать следующие правила работы, которые обеспечивают стерильность в работе и предупреждают возможность возникновения внутрилабораторных заражений:
В помещения бактериологической лаборатории нельзя входить без специальной одежды — халата и белой шапочки или косынки.
Нельзя вносить в лабораторию посторонние вещи.
Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнее платье на халат.
В помещении бактериологической лаборатории категорически запрещается курить, принимать пищу, хранить продукты питания.
Весь материал, поступающий в лабораторию, должен рассматриваться как инфицированный.
При распаковке присланного заразного материала необходимо соблюдать осторожность: банки, содержащие материал для исследования, при получении обтирают снаружи дезинфицирующим раствором и ставят не прямо на стол, а на подносы или в кюветы.
Переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, наполненным дезинфицирующим раствором.
О случаях аварии с посудой, содержащей заразный материал, или проливания жидкого заразного материала надо немедленно сообщать заведующему лабораторией или его заместителю. Мероприятия по обеззараживанию загрязнённых патогенным материалом платья частей тела, предметов рабочего места и поверхностей осуществляют немедленно.
При исследовании заразного материала и работе с патогенными культурами микробов необходимо строго соблюдать общепринятые в бактериологической практике технические приёмы, исключающие возможность соприкосновения рук с заразным материалом.
Заражённый материал и ненужные культуры подлежат обязательному уничтожению, по возможности в тот же день. Инструменты, использованные в работе с заразным материалом, тотчас посте их употребления дезинфицируют, как и поверхность рабочего места.
При выполнении бактериологических работ нужно строго следить за чистотой рук: по окончании работы с заразным материалом их дезинфицируют. Рабочее место в конце дня приводят в порядок и тщательно дезинфицируют, а заразный материал и культуры микробов, необходимые для дальнейшей работы, ставят на хранение в запирающийся рефрижератор или сейф.
Работники бактериологической лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, возбудители которых могут встретиться в исследуемых объектах.