Окраска по методу Романовского - Гимза.

Маточный раствор краски Романовского - Гимза разбавляют фосфатно-буферным раствором (рН 7,2), для получения которого готовят: раствор А - 9,5 г двузамещенного Na₂ HРО4 растворяют в 1 л дистиллированной воды; раствор Б - 9,2 г однозамещенного NaН₂РО₄ растворяют в 1 л дистиллированной воды.

Для приготовления буферного раствора с рН 7,2 смешивают 72 мл раствора А с 28 мл раствора Б и добавляют 900 мл дистиллированной воды. На каждый миллилитр буферного раствора вносят 2-4 капли маточного раствора краски. Фиксированные мазки окрашивают в специальных кюветах вертикально при комнатной температуре в течение 20-24 ч, промывают дистиллированной водой и дифференцируют около 10 с подкисленным эталоном (3-5 капель ледяной уксусной кислоты на 15-20 мл спирта), вновь промывают, высушивают и исследуют в световом микроскопе.

Элементарные тельца хламидий красно-фиолетовые, промежуточной формы - сине-фиолетового цвета.

Для выявления хламидий, расположенных внутри клеток, используют модифицированный метод Романовского - Гимза. Фиксированные мазки покрывают маточным раствором красителя на 10 мин. Краску не сливают, добавляют 3-5 капель дистиллированной воды (рН 7,0) и окрашивают при комнатной температуре 16- 18 ч. После промывки дистиллированной водой дифференцируют этанолом 45-60 с, вновь промывают дистиллированной водой и повторно дифференцируют этанолом 30 с. Промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе.

Элементарные тельца хламидий, расположенные в цитоплазме клеток, красно-фиолетового цвета, тельца-включения - сине-фиолетовые.

Окраска по модифицированному методу Гименеж (Набли Б., Таризо М., 1967). Мазки готовят из стенок желточных мешков куриных эмбрионов, в которых культивировали хламидий, затем фиксируют над пламенем. Препараты окрашивают 0,25%-ным водным раствором основного фуксина в течение 5 мин, промывают водой, окрашивают 0,8%-ным водным раствором малахитового зеленого 30 с и промывают водой. Затем обесцвечивают 0,5%-ным раствором лимонной кислоты в течение 2 мин, промывают и повторно окрашивают малахитовым зеленым 30 с. Обесцвечивают 1%-ным раствором хлорангид-рида в течение 1 мин, промывают водой, высушивают. Элементарные тельца и тельца-включения хламидий - красного цвета, фон зеленый.

Окраска по модифицированному методу Стемпа. Препараты фиксируют над пламенем и окрашивают карболовым фуксином Циля, разведенным дистиллированной водой 1:5 (рH - 7,4) в течение 15 минут. Маточный раствор готовят по прописи: 1 г основного фуксина растворяют в 10 мл этилового спирта, 5 г карболовой кислоты (фенола) - в 100 мл дистиллированной воды. Оба раствора смешивают, фильтруют через 4-5 слоев фильтровальной бумаги. Хранится продолжительное время. Перед употреблением нужное количество разводят 1:5.

Препараты промывают дистиллированной водой, дифференцируют 0,5%-ным раствором уксусной кислоты или 0,05%-ным раствором серной кислоты в течение 1 мин (модификация Гаффарова X. 3.), промывают водой, окрашивают 1%-ным раствором малахитовой зелени 30 с, снова промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой.

Элементарные тельца хламидий красные на сине-зеленом фоне. Инициальные тельца в одних случаях окрашиваются в красный, в других - в зеленоватый цвет. Метод рекомендуется для исследования патологическом материала, в частности плаценты.

Окраска по Маккиавелло. Готовят три раствора: раствор А - 250 мг фуксина основного растворяют в 100 мл бидистиллированной воды (хранится 10 дней при температуре 4°С); раствор В - 10 г лимонной кислоты растворяют в 100 мл бидистиллированной воды; раствор С - 1 г метиленовой сини растворяют в 100 мл бидистиллированной воды.

Техника окраски: мазки фиксируют над пламенем; раствор А фильтруют через фильтровальную бумагу и наносят на мазок, покрытый фильтровальной бумагой, на 5-10 мин; промывают дистиллированной водой; дифференцируют в растворе В, состоящем из 5 мл раствора В и 100 мл бидистиллированной воды, в течение 20-30 с; промывают водопроводной водой; докрашивают раствором С в течение 30 с; промывают водой, высушивают на воздухе. Хламидий окрашиваются в ярко-красный цвет, клетки патологического материала - в светло-синий, ядра клеток - в темно-синий цвет.

Окраска по Маккиавелло в модификации Здродовского. Готовят три раствора: раствор А (сохраняется в холодильнике в течение нескольких дней) - основной фуксин - 1 г, карболовая кислота - 5 г, этиловый спирт - 10 мл, дистиллированная вода - 100 мл; раствор Б - 0,5%-ный водный раствор метиленовой сини; раствор В - 0,5%-ный раствор лимонной или 0,15%-ный раствор уксусной кислоты.

Техника окраски. Препараты быстро фиксируют над пламенем и покрывают на 5 мин свежеприготовленной смесью: раствор А - 10-25 капель, бидистиллированной воды или фосфатный буфер (рН 7,4) - 10 мл; промывают дистиллированной водой; около 3 с дифференцируют в растворе В; промывают продолжительно дистиллированной водой; быстро окрашивают (10 с) раствором Б; промывают проточной водой, высушивают, исследуют с использованием иммерсионных систем. Хламидий рубиново-красного цвета на светло-голубом фоне. Метод дает хорошие результаты только при окрашивании свежих препаратов.

Окраска акридиновым оранжевым для люминесцентной микроскопии. Готовят жидкость Корнуа - шесть объемов 96-100%-ного этилового спирта, три объема хлороформа, один объем ледяной уксусной кислоты. Фосфатно-цитратный буфер (рН 3,8): лимонная кислота - 10 г, Nа₂НРО₄-7Н₂О - 15 г, дистиллированная вода - 1 л. При наличии Nа₂НРО₄- 12Н₂О проводят перерасчет:а₂НРО₄´7Н₂О НЬ 268,157а₂НР0₄´12Н₂0 НЬ 358,157

г - 268,157 Х = 15 ´ 358,157/268,157 = 20,034

х - 358,157

Маточный раствор акридинового оранжевого: акридиновый оранжевый - 0,1 г, фосфатно-цитратный буфер - 100 мл (может храниться в холодильнике). Рабочий раствор акридинового оранжевого готовят в концентрации 1: 10 тыс. - 1: 30 тыс. на основе указанного буфера.