 |
С. Требования к вакцинам и диагностическим биологическим препаратам.
|
|
|
|
С. ТРЕБОВАНИЯ К ВАКЦИНАМ И ДИАГНОСТИЧЕСКИМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ.
В настоящее время единственной доступной вакциной против инфекций M. bovis является вакцина бацилла Кальметта — Герена (БЦЖ), которая представляет собой живой аттенуированный штамм M. bovis. Была доказана ее переменная эффективность при проведении опытов на КРС, что связывали с разными факторами, включая состав вакцины, способ ее введения и степень подверженности воздействию микобактерий окружающей среды (Skinner et al., 2001). Проводились тестирования ряда других вакцин, но было выявлено, что ни одна из них не могла вызвать защиту лучше, чем БЦЖ. Доказано, что эффективность БЦЖ варьируется также как и у людей. В настоящее время проводится тестирование ряда новых кандидатных вакцин.
В настоящее время подробно изучаются генетические характеристики организма, вызывающего туберкулез, уже опубликованы полные последовательности генома M. tuberculosis, M. bovis и БЦЖ (Пастер) (Brosch et al., 2002; Cole et al., 1998; Garnier et al., 2003). Данная информация может представлять особую ценность при идентификации генов, связанных с вирулентностью, а также при разработке субъединичной вакцины. В пораженных странах, не имеющих программ контроля тестирования и убоя, можно применять вакцинацию БЦЖ с целью сокращения распространения инфекции среди КРС, однако нет прочной уверенности в долгосрочном снижении превалентности болезни и в
обеспечении безопасности для людей и окружающей среды. Перед началом программы вакцинации, необходимо оптимизировать схему вакцинации в соответствии с местными условиями. Типичная дозировка должна составлять от 104 до 106 колониеобразующих единиц, вводимых подкожно. Вакцина должна быть произведена из стандартного референтного штамма, БЦЖ Пастер или Датский (ВОЗ\ФАО\МЭБ, 1994).
|
|
|
Важно признать, что использование вакцины затруднит проведение внутрикожных туберкулиновых проб или других иммунологических тестов, основанных на использовании туберкулина в качестве диагностического антигена. Следовательно, вакцинацию КРС не следует проводить в тех странах, где для контроля и для безопасной торговли используются меры, основанные на таком тестировании. Однако удалось достичь существенных успехов в разработке так называемых антигенов DIVA, которые позволяют дифференцировать БЦЖ вакцинированных животных от тех, что заражены M. bovis, особенно когда их используют в гамма-интерферонном анализе (Buddle et al., 1999; Cockle et al., 2006; Sidders et al., 2008; Vordermeier et al., 2001). Такие антигены основаны на использовании антигенов, закодированных на участках гена M. bovis, удаленных в БЦЖ (как то ESAT-6 и CFP-10 [Buddle et al., 1999; Vordermeier et al., 2001]), недостаточно экспрессированных в некоторых штаммах БЦЖ (как то MPB83) или не секретированных в БЦЖ (как то Rv3615c [Sidders et al., 2008]). Следовательно, можно рассмотреть вариант БЦЖ вакцинации в сочетании с такими DIVA тестами, как только реагенты будут полностью валидированы и будут внесены соответствующие поправки в нормативную базу. БЦЖ вакцины могут также использоваться с целью сокращения распространения M. bovis в резервуарах инфекции среди диких животных. До начала такой вакцинации необходимо валидировать систему доставки для отдельных видов диких животных. Необходимо также учитывать влияние вакцины на другие виды животных при ее попадании в окружающую среду.
Руководства для производства ветеринарных вакцин даны в Главе 1. 1. 8. Принципы производства ветеринарных вакцин. Руководства, указанные здесь и в Главе 1. 1. 8 считаются общими по содержанию, и их можно дополнить в соответствии с национальными или региональными требованиями. Туберкулиновые препараты изначально были приготовлены из термически-обработанных продуктов роста и лизиса M. tuberculosis или M. bovis (известных, как туберкулин для КРС и туберкулин человека, соответственно), выращенных в бульоне с глицерином.
|
|
|
В 1940-х годах туберкулины, термоконцентрированные в синтетической среде, или HCSM туберкулины, приготовленные из культур в синтетической жидкой среде, заменили «старые» туберкулины. Старые туберкулины и HCSM туберкулины были замены почти по
всему миру очищенными белковыми дериватами или ППД. ППД для КРС, приготовленные из производственного штамма M. bovis AN5, более специфичны для выявления туберкулеза КРС, чем ППД, приготовленные из M. tuberculosis.
C1 Производство туберкулина
1. Работа с посевным материалом 1. 1. Характеристика посевного материала
1. 2. Метод культивирования
1. 3. Валидация
Штаммы M. bovis, используемые для приготовления посевных культур, должны быть идентифицированы по видам при помощи соответствующих тестов. Необходимо вести отчетность, в которой указано их происхождение и последующая история. Посевные культуры нельзя пассировать более 5 раз. Чаще всего используются производственные штаммы M. bovis AN5 или Vallee.
Если исходная культура была выращена на твердой среде, необходимо адаптировать организм к росту в качестве плавающей культуры (например, поместить стерильный кусок картофеля в колбы для культивирования клеток, в которых находится жидкая среда, например, среда Watson или среда Reid).
Когда культуру адаптируют к жидкой среде, ее можно использовать для продуцирования партии основного посевного материала, которую хранят в лиофилизированном виде. Его используют для высева на среду с целью производства партий вторичного посевного материала, который нельзя подвергать более чем четырем пассажам от основного посевного материала. Вторичный посевной материал используется для инокуляции производственных культур (Angus, 1978; Haagsma & Angus, 1994).
Необходимо показать, что субстрат производственной культуры пригоден для производства продукта, который соответствует признанным международным стандартам (ВОЗ, Европейская фармакопея, или другие признанные контрольные организации). Продукты должны быть свободными от ингредиентов, вызывающих токсические или аллергические реакции.
Необходимо подтвердить, что штаммы M. bovis, которые используются в качестве посевных культур, свободны от контаминирующих организмов.
Должно быть доказано, что партии посевного материала эффективны при выработке туберкулина с достаточной иммуногенностью. Необходимые тесты описаны в Разделе С. 4. ниже.
|
|
|
