 |
18) Идентификация бактерий посевом на триаду Хейберга
|
|
|
|
18) Идентификация бактерий посевом на триаду Хейберга
Определение у культур ферментативной группы Хейберга-Смита по результатам разложения сахарозы, маннозы, арабинозы.
По отношению к трем углеводам- сахарозе, маннозе и арабинозе все вибрионы делятся на 8 групп (по Хейбергу). Биовары cholerae и eltor относятся к I группе Хейберга: расщепляют до кислоты без газа сахарозу и маннозу и не расщепляют арабинозу.
19)принципы определения каталазной и плазмокоагулазной активности
Ферменты, относящиеся к факторам патогенности
А)Тест на каталазную активность
Каталазная активность свойственна большинству патогенных аэробных микроорганизмов. Облигатные анаэробы и многие микроаэрофилы каталазу не образуют.
Каталаза разлагает перекись водорода с образованием кислорода:
Для выявления каталазной активности наносят каплю 10%-ного раствора
пероксида на колонию или суспензию клеток. Выделение O, хорошо заметное по
2
образованию пузырьков газа, свидетельствует о продукции штаммами каталазы.
Определение плазмокоагулазной активности
Б)Плазмокоагулазную активность изучают, используя сухую цитратную кроличью плазму или плазму крови, взятую из сердца. Перед исследованием сухую плазму разводят 1: 5 0, 9%-ным раствором хлорида натрия, затем 0, 5 мл разведенной плазмы вносят в стерильную пробирку и в ней суспендируют одну петлю 18 - 20-часовой агаровой культуры. Пробирки помещают в термостат при (37 +/- 1) °С и через 1, 2, 3, 18 и 24 ч проверяют наличие свертывания плазмы. Реакция считается положительной независимо от степени свертывания плазмы. В качестве контроля ставят реакцию со стафилококком, обладающим и не обладающим плазмокоагулазой. Одновременно у испытуемого штамма можно установить наличие фибринолитической активности.
|
|
|
20) методы изучения протеолитич. Акт. Бактерий(р. На индол, сероводород и др. )
Протеолитическая активность – это способность микроорганизмов расщеплять белки с образованием различных продуктов (H2S, NH3, индола и т. д. ). Изучение этих свойств применяется для идентификации бактерий.
2. Протеолитические свойства бактерий изучают:
а) по способности разжижать желатин: делают посев изучаемой культуры бактерий уколом в столбик мясопептонного желатина (МПБ + 10-20 % желатина) и оставляют при комнатной температуре (20-22° С) на несколько дней. Через 3-5-10 дней просматривают посевы и отмечают форму разжижения желатина, характерную для различных видов микробов. Разжижать желатин способны микробы, выделяющие фермент типа коллагеназы;
б) по конечным продуктам распада белков: делают посев на МПБ и выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 2-3 дней; для определения продуктов распада белков (индола, аммиака, сероводорода) используют специальные индикаторные бумажки, которые помещают между горлышком и ватной пробкой в пробирку с МПБ.
Индол обнаруживают по способу Мореля, для чего используют индикаторную бумажку, смоченную насыщенным раствором щавелевой кислоты, которая розовеет при образовании индола. Для обнаружения аммиака используют лакмусовую бумажку, в присутствии которого она синеет. Для обнаружения H2S используют полоску фильтровальной бумаги, смоченную уксуснокислым свинцом, которая чернеет в присутствии H2S.
18) Заражение куриного эмбриона(вирусологич. Метод)
Куриный эмбрион используется для культивирования вирусов, микоплазм. Используют эмбрионы в возрасте 8-14 дней в зависимости от вида вируса и способа заражения: на хорион-аллантоисную оболочку, в аллантоисную и амниотическую полость, в желточный мешок. Перед заражением определяют жизнеспособность эмбриона в овоскопе и отмечают карандашом на скорлупе границы воздушного мешка. Заражение куриных эмбрионов производят в боксе в строго асептических условиях, пользуясь инструментом, стерилизованным кипячением.
|
|
|
1этап
Скорлупу над воздушным пространством протирают спиртом, обжигают в пламени, смазывают 2% раствором йода, снова протирают спиртом и обжигают. Вирусный материал в количестве 0, 05 - 0, 2 мл наносят на хорион-аллантоисную оболочку туберкулиновым шприцом или пастеровской пипеткой.
II этап
Вскрытие эмбрионов проводят через 48-72 часа инкубации в термостате. Наличие вируса в хорион-аллантоисной оболочке определяют:
1. по белесоватым непрозрачным пятнам разной формы;
2. в реакции гемагглютинации.
19)РГА
Реакция гемагглютинации- это один из методов индикации вирусов. Ставится двумя методами:
1) капельным на стекле;
2) в пробирках - развернутая реакция.
Компоненты:
1) исследуемый материал: аллантоисная жидкость, суспензия
хорионаллантоисной оболочки куриного эмбриона, экстракт из
культуры клеток, зараженных вирусом;
2) 5% взвесь куриных эритроцитов;
3) физиологический раствор.
На чистое обезжиренное стекло наносят 1 каплю взвеси эритроцитов и 1 каплю исследуемого материала.
При «+» результате - хлопья агглютинации эритроцитов.
|
|
|
