Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!

апекса побега картофеля и введение его in vitro»

Материалы и оборудование. Ламинар-бокс, колбы с питательными средами, стерильные препарировальные иглы, пинцеты, скальпели, флакон с 96 % спиртом, спиртовка, вата, 6 % раствор NaClO₂, колбы с автоклавированной дистиллированной водой, чашки Петри, побеги картофеля.

Ход работы.

1. Взять клубни картофеля с растущими «глазками». Отделить растущий побег провести его стерилизацию.

2. Стерилизованный побег (на стерильной чашке Петри) в ламинар-боксе поместить в поле зрения бинокулярного микроскопа.

3. При малом увеличении в центральной части разреза почки найти удлиненный конус нарастания с верхушкой округлой формы. Над конусом нарастания виден как бы свод, образованный зачаточными листьями (примордии), идущими от основания почки.

4. Препаровальной иглой (режущие иглы от шприца) изолировать апикальную меристему (конус) на 12-13 пластохроне (промежуток времени между инициациями двух листовых бугорков) и перенести на стерильную среду.

Изолированные меристемы культивируют в асептических условиях на питательных средах с богатым содержанием макро- и микросолей, с повышенной концентрацией цитокининов (6-БАП 2 мг/л). В культуральной комнате с кондиционированным воздухом поддерживают температуру 25±2^оС, влажность воздуха 70 %, освещенность 5 кLx и фотопериод 16 часов.

В среднем от посадки меристемы на среду до формирования проростков с 5-6 листочками проходит 30-45 дней, в некоторых случаях от 2 до 8 месяцев. Среды по мере истощения обновляют, и проростки периодически пересаживают на новые среды в стерильных условиях.

Задание 2. «Клонирование отдельных тканей растений моркови»

Материалы и оборудование. Ламинар-бокс, колбы с питательной средой, скальпели, пинцеты, ножницы, препарировальные иглы, спиртовка, флакон с 96 % спиртом, стерильная пленка, чашки Петри.

Ход работы.

1. Подготовить ламинар-бокс и инструменты к работе.

2. Тщательно отмыть морковь под струей воды.

3. Нарезать морковь по 100мм в длину в стакан и залить стерильным раствором на 30 минут.

4. Перенести в ламинар-бокс.

5. Отрезать от моркови с обоих концов кусочки размером 20мм и затеп перенести их в чашку Петри.

6. Скальпелем порезать объект на диски толщиной 1мм и размером 4мм х 4 мм.

7. Поместить экспланты на питательную среду и убрать на темные стеллажи.

8. Проводить наблюдение каждые 7 дней, результаты зарисовать.

Задание 3. «Микрочеренкование стерильных проростков»

Материалы и оборудование. Ламинар-бокс, колбы с проростками, колбы с питательной средой, скальпели, пинцеты, ножницы, препарировальные иглы, спиртовка, флакон с 96 % спиртом, стерильная пленка.

Ход работы.

1. Подготовить ламинар-бокс и инструменты к работе.

2. В ламинаре извлечь стерильные проростки из колб.

3. Побеги разделить на микрочеренки (междоузлие с почкой) и посадить в питательную среду на глубину междоузлия.

4. Колбу закрыть пленкой и перенести в культуральную комнату.

5. Результаты зарисовать через 2-4 недели. Сделать выводы о степени пролиферации почек различных сельскохозяйственных культур.

Контрольные вопросы к теме

1. Какие стерилизующие растворы используются для растительных экс-плантов?

2. Какие вещества входят в состав питательных сред, и какую функцию они выполняют в культуре клеток и тканей in vitro?

3. Как получают стерильные проростки и для чего их используют?

4. Из каких областей экспланта образуется каллус?

⇐ Предыдущая 1 2 34