Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.
Нормальная микрофлора организма человека (продолжение). Дисбиозы Цель занятия: 1.Изучить микрофлору организма человека. 2.Функции нормальной микрофлоры. 3. Причины и условия формирования дисбактериозов. 4. Коррекция дисбактериозов.
Студент должен знать: 1. Нормальную микрофлору организма человека, ее функции. 2. Факторы, оказывающие влияние на количественный и качественный состав нормальной микрофлоры организма человека. 3. Методы изучения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры, критерии оценки. 4. Причины и условия возникновения дисбактериозов, их коррекция.
Студент должен уметь: · проводить взятие материала для исследования микрофлоры организма человека; · проводить оценку качественного и количественного состава микрофлоры.
Студент должен иметь представление: об особенностях взаимоотношений между отдельными микроорганизмами в различных биотопах организма человека (синергизм, антагонизм и др.).
Работа № 1. Микрофлора желудочно-кишечного тракта Цель: изучить микрофлору желудочно-кишечного тракта. Самостоятельная работа: оценить по готовым посевам и препаратам-мазкам результат исследования кала на дисбактериоз. Зарисовать, описать. Рекомендовать препараты для коррекции дисбактериоза. Сделать вывод. Задача: В бактериологическую лабораторию доставили материал (кал) для исследования на дисбактериоз. Сделаны посевы на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Калины, Блаурокка.
а) Описать культуральные свойства колоний. Среда Блаурокка (для бифидумбактерий)
Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Среда Эндо (ДДС для лак+ бактерий)
Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Среда Калины (для энтерококков)
Результат:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
б) По готовым мазкам, приготовленным из выросших колоний описать морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов. Окраска по Граму.
Со среды Блаурокка Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Со среды Эндо Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Со среды Калины Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Результаты микробиологического исследования кала: ГБОУ ВПО ТюмГМА, Многопрофильная клиника Бактериологическая лаборатория Микробиологическое исследование фекалий на дисбактериоз (ост 91500. 11. 0004-2003)
№ пробы_____________ первичный, повторный (подчеркнуть) от «_____»_________________20_____г. Ф.И.О. пациента____Петров П.П.________________________________ возраст___24 года_____________________________________________ Диагноз______________________________________________________ Откуда направлен______________________________________________
Заключение:
____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________
«____»_____________20____г. Врач _________________
Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
в) Объяснить назначение и механизм действия пробиотиков с учетом изменений качественного и количественного состава микрофлоры, классифицировать предложенные препараты. Результаты внести в таблицу.
Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Теоретическая справка Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы. Микрофлора тонкого кишечника также не многочисленна (благодаря действию ферментов), в этом биотопе обнаруживаются лактобактерии, дрожжевые и дрожжеподобные грибы. Микрофлора толстого кишечника: в толстом кишечнике находится самая разнообразная по составу микрофлора. Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.
Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть - аэробы. Вся микрофлора кишечника подразделяется на: 1) облигатную её часть - это микроорганизмы, постоянно входящие в состав нормальной микрофлоры и играющие очень важную позитивную роль в макроорганизме; 2) факультативная часть, к которой относятся микроорганизмы, достаточно часто встречающиеся у здоровых людей, но иногда, в случаях снижения общей резистентности организма человека, эти микробы могут быть условно-патогенными и выступать в качестве этиологических факторов заболеваний; 3) транзиторная часть микрофлоры, которая носит случайный характер, представители этой микрофлоры неспособны к длительному пребыванию, персистированию в кишечнике. В этой группе могут быть, в небольших количествах, и возбудители инфекционных заболеваний. К резидентной микрофлоре относятся как условно-патогенные микроорганизмы, такие как представители семейства энтеробактерии (протеи, серрации, клебсиеллы и др.), стафилококки, простейшие (псевдомонада, кишечная амеба), энтеровирусы, так и патогенные микроорганизмы, такие как, атипичные эшерихии (лак-), гемолитические стафилококки, вирулентные дрожжеподобные грибы. Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника, показания для него разнообразны - предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др. Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника. Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа. Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов. Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С
Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа. Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника. Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев. Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах. Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.
Характеристика культуральных и морфологических свойств представителей нормальной микрофлоры кишечника человека. 1. Бифидобактерии (род Bifidobacterium). Строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек - бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блаурокка, в пробирках в анаэробных условиях. Среда Блаурокка готовится следующим образом - к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут. Культуральные свойства бифидобактерии. На среде Блаурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост - в виде "точек с хвостиками" или маленьких комочков. Морфологические свойства бифидобактерии. В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.
2. Кишечные палочки (Escherihia coli). Факультативные анаэробы. Прямые Гр- палочки с закругленными концами. ДДС - среда Эндо (питательный агар, 1% лактоза и индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте кишечной палочки (лактозоположительных бактерий) их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бледно-розовые колонии.
3. Энтерококки (род Enterococcus). Аэробы. В настоящее время определяют 2 вида энтерококков - 1) Ent. fecalis и 2) Ent. faecium. Культивирование энтерококков проводится на среде Калины. Среда Калины - это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой гидролизат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор). На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культурным свойствам - первый вид даёт мелкие или средних размеров колонии яркие, красно-вишнёвые, второй вид - розовые, розовато-серые колонии. Морфологические свойства энтерококков - в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.
Воспользуйтесь поиском по сайту: ©2015 - 2024 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...
|