 |
Ксантопротеиновая реакция Мульдера – качественная реакция на ароматические аминокислоты.
|
|
|
|
ФГАОУ ВПО «Уральский федеральный университет
Имени первого Президента России Б.Н. Ельцина»
Кафедра иммунохимии
Методические указания к лабораторному занятию по дисциплине
«Методы выделения и анализа биополимеров»
Для магистров 1 курса ХТИ, обучающихся по направлению «Биотехнология»
(магистерская программа «Иммунобиотехнология».
Лабораторная работа № 1
Тема: Качественный анализ аминокислот и белков
В состав природных белков входит 20 α-аминокислот, отличающихся строением бокового радикала. Набор и последовательность расположения аминокислот в белке – первичная структура – определяет возможность формирования высших структур белка и его функциональные свойства. Качественные реакции, характерные для различных аминокислот, позволяют исследовать состав белка, обнаружить его следы в биологическом материале или лекарственных препаратах белкового происхождения. Многие качественные реакции положены в основу методов количественного определения аминокислот и белков.
В работе использованы аминокислоты с различной природой бокового радикала (Arg, Trp, Cys) и белки, отличающиеся по аминокислотному составу. Приведенные ниже качественные реакции проводят с каждой аминокислотой и каждым белком. Желатин представляет собой смесь полипептидов – продуктов гидролиза коллагена – основного структурного белка соединительной ткани, экстрагированного из хрящей, костей и кожи скота. Бычий сывороточный альбумин – главный транспортный белок плазмы крови, широко применяется в биохимических исследованиях и биотехнологии. Яичный альбумин – резервный белок, обеспечивающий аминокислотами развивающийся куриный эмбрион, по строению близок к альбумину крови человека и альбуминам молока. Инсулин – гормон белковой природы, секретируемый β-клетками поджелудочной железы. В медицине используются препараты инсулина человека, получаемые методами генной инженерии. Иммуноглобулины – белки донорской крови, применяются как лекарственные препараты, в комплексной терапии бактериальных инфекций. Казеин – сложный белок, образующийся из предшественника казеина – казеиногена – при створаживании молока. По структуре казеин относится к фосфопротеинам, он содержит все незаменимые аминокислоты, и поэтому является важным пищевым белком.
|
|
|
Опыт № 1. Изучение аминокислотного состава различных белков.
Качественные реакции на аминокислоты в составе белков
Биуретовая реакция – качественная реакция на пептидную связь.
Принцип метода: пептиды и белки образуют с гидроксидом меди (II) в щелочной среде комплексное соединение фиолетового цвета.
Ход работы: к 1 мл раствора белка добавляют 1 мл 10% раствора NaOH и 2 капли 1% раствора CuSO4. Наблюдают за изменением цвета раствора.
Нингидриновая реакция - качественная реакция на α-аминогруппу аминокислот .
Принцип метода: α-аминогруппа аминокислот, пептидов и белков образует с нингидрином комплекс сине-фиолетового цвета.
Ход работы: к 1 мл раствора белка добавляют 1 мл раствора нингидрина, нагревают до кипения и через 1-3 мин наблюдают появление окрашивания.
Ксантопротеиновая реакция Мульдера – качественная реакция на ароматические аминокислоты.
Принцип метода: входящие в состав белка остатки ароматических аминокислот при взаимодействии с концентрированной азотной кислотой образуют динитропроизводные желтого цвета (от древнегреческого «ксантос» - желтый), переходящие в щелочной среде в ацинитроформу оранжевого цвета. Фенилаланин трудно нитруется и, поэтому, не обусловливает ксантопротеиновой реакции.
|
|
|
Ход работы: к 1 мл раствора белка добавляют 10 капель конц. азотной кислоты, осторожно нагревают до кипения и наблюдают за появлением окрашивания. Затем содержимое пробирки охлаждают и по каплям добавляют раствор NaOH до изменения окраски.
Нитропруссидная реакция – качественная реакция на серусодержащие аминокислоты.
Принцип метода: при щелочном гидролизе белка из серусодержащих аминокислот образуется сульфид натрия, дающий с нитропруссидом натрия комплексное соединение красно-фиолетового цвета.
Ход работы: к 1 мл раствора белка добавляют 0,5 мл раствора NaOH, кипятят 3 мин и охлаждают. В охлажденные пробирки по каплям добавляют раствор нитропруссида натрия и наблюдают за появлением окраски.
|
|
|
