1. Методы культивирования вирусов. Понятие о первичных и перевиваемых культурах клеток.

Билет № 28

1. Методы культивирования вирусов. Понятие о первичных и перевиваемых культурах клеток.

На первом этапе развития вирусологии единственным методом, доказывающим наличие фильтрующихся инфекционных агентов в исследуемом материале, служило заражение лабораторных животных. В 1931 г. в вирусологической практике стали использоваться куриные эмбрионы для репродукции вирусов с диагностическими целями, а также для производства вирусных вакцин. Позднее были разработаны культуры клеток, приготовленные из неперевиваемых, перевиваемых и полуперевиваемых линий нормальных или злокачественных клеток людей и животных. Они нашли Общая вирусология 83 широкое применение для диагностических, научных и производственных целей. Неперевиваемые— первичные клетки не способны размножаться in vitro, вследствие чего они годятся только для однократного использования. Полуперевиваемые культуры представляют собой диплоидные клетки человека, способные к размножению in vitro в течение 50 пассажей (до 1 года). Они, как правило, не претерпевают злокачественного перерождения. Перевиваемые культуры Злокачественных или нормальных клеток длительно размножаются in vitro. Они могут сохраняться в течение длительных сроков (десятилетиями), например культура клеток Hela и др. Недостаток клеточных культур состоит в возможности их контаминации неизвестными вирусами и микоплазмами. О репродукции вирусов в культурах клеток судят по их цито- и э т и ч е с к о м у д ейс т в и ю (ЦПД), которое носит разный характер в зависимости от вида вируса (рис. 5. 10), по бляшкообра- юванию на клеточном монослое, покрытом тонким агаровым слоем (рис. 5. 11), гемадсорбции эритроцитов и другим тестам. __

Таким образом, индикация вирусов производится микроскопически по наличию ЦПД, бляшкообразованию на клеточном монослое, ге- мадсорбции эритроцитов, добавленных к клеточной культуре вируса, а также в реакции гемагглютинации с исследуемым вируссодержащим материалом. Реакцию гемагглютинации вызывают вирусы, содержащие в составе своего капсида или суперкапсида гемагглютинин.

2. Гиперчувствительность замедленного типа. Механизм ее проявления. Практическое использование в диагностике инфекционных заболеваний.

Аллергические заболевания широко распространены, что связано с рядом отягощающих факторов - ухудшением экологической обстановки и широким распространением аллергенов, усилением антигенного давления на организм (в том числе- вакцинация), искусственным вскармливанием, наследственной предрасположенностью.

Аллергия - состояние патологически повышенной чувствительности организма к повторному введению антигена. Антигены, вызывающие аллергические состояния, называют аллергенами. Аллергическими свойствами обладают различные чужеродные растительные и животные белки, а также гаптены в комплексе с белковым носителем.

Аллергические реакции - иммунопатологические реакции, связанные с высокой активностью клеточных и гуморальных факторов иммунной системы (иммунологической гиперреактивностью). Иммунные механизмы, обеспечивающие защиту организма, могут приводить к повреждению тканей, реализуясь в виде реакций гиперчувствительности.

Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ ) - клеточно- опосредованная гиперчувствительность или гиперчувствительность типа 4, связанная с наличием сенсибилизированных лимфоцитов

МЕханизм. 1 стадия иммунологическая в эту стадию антиген впервые попавший в организм реагирует с неиммунными Т- лимфоцитами. В результате пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов в организме накапливается клон сенсибилизированных Т-лимфоцитов. при повторной встрече с антителом взаимодействует с ним с помощью своих рецепторов(СиДи 4)

2 стадия Пато-химическая. В это время активированные антигеном Т- лимфоциты прдуцируют и выделяют клеточные медиаторы-лимфокины. К ним относятся факторы угнетающие миграцию. С помощью этого фактора лимфоциты дают сигнал макрофагам остановиться около клеток мишеней и воволекают их в процесс разрушения клеток, несущих антиген с помощью др. факторов лимфоциты, происходитпревращение несенсибилизированных лимфоцитов в кл. эффекторы. иммунитете без предварительного контакта с антигеном. Это мобилизует большое количество новых кл.

3стадия пато-физиологическая. Выражается в развитии воспаления под влиянием веществ, выделенных Т- кл. При введении антигена через кожу Т-лимф. Мигрируют в кожу. Там вступают в реакцию с кл. и межклеточным веществом., де содержится антиген. Возникает воспаление. Хаактер. плотный клеточеый имфильтрат. С макрофагами, лимфоцит..

Исторически ГЗТ выявлялась в кожных аллергических пробах (с туберкулином- туберкулиновая проба), выявляемых через 24 - 48 часов после внутрикожного введения антигена. Развитием ГЗТ на вводимый антиген отвечают только организмы с предшествующей сенсибилизацией этим антигеном.

Классический пример инфекционной ГЗТ - образование инфекционной гранулемы (при бруцеллезе, туберкулезе, брюшном тифе и др. ). Гистологически ГЗТ характеризуется инфильтрацией очага вначале нейтрофилами, затем лимфоцитами и макрофагами. Сенсибилизированные Т- клетки ГЗТ распознают гомологичные эпитопы, представленные на мембране дендритных клеток, а также секретируют медиаторы, активирующие макрофаги и привлекающие в очаг другие клетки воспаления. Активированные макрофаги и другие участвующие в ГЗТ клетки выделяют ряд биологически активных веществ, вызывающих воспаление и уничтожающих бактерии, опухолевые и другие чужеродные клетки - цитокины , активные метаболиты кислорода, протеазы, лизоцим и лактоферрин.

ГЗТ широко применяют в диагностики инфекционных заболеваний.. С этой целью использую соответств. Аллергены, которые вводят подкожно и смотрят реакцию.

Методы лабораторной диагностики аллергии: выявление уровня сывороточных IgE, фиксированных на базофилах и тучных клетках антител класса Е (реагинов), циркулирующих и фиксированных (тканевых) иммунных комплесов, провокационные и кожные пробы с предполагаемыми аллергенами, выявление сенсибилизированных клеток тестами in vitro - реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ), реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ), цитотоксические тесты.