Методы оценки качества спермы

Понятие об оценке качества спермы включает в себя определение его биологической полноценности, т.е. способ­ности оплодотворить яйцеклетку и дать начало новому жизнеспособному по­томству. Методы определения оплодотворяющей способности спермы делят­ся на прямые и косвенные. К первой группе относится определение по ре­зультатам осеменения (отел, ректальное исследование через 2,5-3 месяца по­сле отела, отсутствие полового цикла). Как видно, для оценки спермы этими методами требуется длительное время. Поэтому в практике, наряду с прямы­ми, применяются косвенные методы. Эти методы позволяют быстро, в тече­ние 10-30 мин определять качество и количество спермиев, полученных в эя­куляте и назначить для осеменения такую дозу спермы, которая обеспечива­ла бы плодотворное осеменение, но не допускала ненужного перерасхода спермы. Ибо одним из необходимых условий получения максимального ко­личества приплода от ценных производителей - это рациональное использо­вание их спермы.

Ценность того или иного косвенного или предварительного метода оценки качества спермы определяется степенью его корреляции с показате­лем оплодотворяющей способности спермы.

Для прогнозирования оплодотворяющей способности спермы предло­жены физические, биохимические, биологические методы исследования. В их число входят органолептическая оценка по объему, запаху, цвету, конси­стенции, однородности, определение рН, осмотического давления, подвиж­ности, выживаемости спермиев, процента их с аномальной морфологией, ос­мотической резистентностью, устойчивости к холодовому удару, содержание аденозинтрифосфата, активности дегидрогеназ.

В практике искусственного осеменения наибольшее применение полу­чила оценка спермы по органолептическим признакам, концентрации, под­вижности и переживаемости.

Для определения качества спермы на чистое предметное стекло сте­рильной палочкой или пипеткой наносят каплю спермы, накрывают покров­ным стеклом и микроскопируют при увеличении 140-300 раз. Исследования проводят при температуре 38-40°С, для чего применяют специальные термо­статы или обогревательные столики (водяные, электрические).

Сперма может быть густой (средней густоты) - Г, редкой - Р, и без спер­миев - А - азоспермия.

Сперма густая - все поле зрения микроскопа густо заполнено спермия-ми. Соответствует приблизительно концентрации более 1 млрд. спермиев.

Сперма средняя - между спермиями имеются промежутки примерно равные длине спермия. Концентрация такой спермы от 600 млн. до 1 млрд. спермиев.

Сперма редкая - в поле зрения микроскопа промежутки между спер­миями превышают их длину. В 1 мл такой спермы содержится менее 600 млн. спермиев.

Для более точного определения концентрации спермиев применяют счетные камеры (Томма, Горяева и др.), фотоэлектрические колориметры или электрогемометры в соответствии с имеющимися наставлениями к этим приборам.

Активность (подвижность) спермы определяют по десятибалльной шкале. Чем она подвижнее, тем лучше качество спермы. Высшую оценку -10 баллов ставят, когда более 95% спермиев имеют прямолинейно-поступательное движение, 9 баллов соответственно - 90%, 8 баллов - 80% и т.д.

Если в поле зрения микроскопа видны спермии с манежным движением (при попадании в сперму воды), то такую сперму обозначают буквой М, с колебательным - К, а неподвижность их - Н. Окончательно оценивают каче­ство спермы с учетом густоты и активности, например: Г - 9 сперма густая, содержит 90% спермиев с прямолинейно-поступательным движением.

Микроскопическое исследование эякулята показывает, что среди нор­мальных спермиев всегда встречаются патологические формы в виде изоли­рованных головок и хвостиков, гигантских и карликовых спермиев, спермиев с двумя головками, с двумя хвостиками, с головками неправильной формы, с закрученными и ненормально искривленными хвостиками.

Присутствие в сперме большого количества спермиев с ненормальной формой называется тератоспермией. В качестве конкретных причин образо­вания уродливых форм спермиев отмечаются:

1. Поражение семенника и придатка (гигантские и карликовые спермия).

2. Длительные промежутки между коитусами (обуславливающие старе­ние и распад спермиев в придатке), отдельные головки, изолированные хво­стики.

3. Половое истощение производителя вследствие большой половой на­грузки или недостаточного кормления (спермии с протоплазматической кап­лей в области шейки, тела и хвоста, т.е. незрелые спермии).

Быки, дающие сперму с содержанием более 18% уродливых спермиев, должны рассматриваться как бесплодные.

Определение выживаемости (живучести) спермиев вне организма. Из­вестно, что чем дольше сохраняется жизнь спермиев, тем выше их оплодо­творяющая способность. В.К. Милованов (1962) предложил определять абсо­лютный показатель живучести спермы. Делается это так. Образец спермы, после разбавления эякулята, оставляют в холодильнике при 2-5 ⁰ С и ежеднев­но определяют активность спермиев при температуре 38-40 ⁰ С до полной их гибели. Суммировав все произведения времени (в часах), в течение которого наблюдалась та или иная активность, на активность спермиев (в баллах), получают абсолютный показатель живучести. Для спермы быка он должен быть не ниже 1400. Максимальная продолжительность жизни спермиев (в ча­сах) должна быть для спермиев быка - не менее 200.

Для определения выживаемости спермиев после оттаивания применяют экспресс-метод. Сперму после оттаивания ставят на инкубацию в водяную баню при температуре 38°С. Фиксируют время оттаивания и одновременно определяют исходную подвижность спермиев. Через 5 часов оценку повто­ряют. Пригодной для осеменения считают сперму быка, исходная подвиж­ность которой не менее 4 баллов и выживаемость 5 ч.

Согласно действующим в настоящее время ГОСТам, свежеполученная сперма быка считается пригодной для разбавления, если она соответствует следующим требованиям:

Объем эякулята не менее 3,0 мл;

Цвет - молочно-белый или кремовый;

Консистенция сливкообразная;

Запах - нормальная сперма быка запаха не имеет;

Концентрация спермиев - не менее 0,4 млрд/мл;

Подвижность - не менее 8,0 баллов;

Выживаемость спермиев при 2-5°С после разбавления ГЦЖ средой:

Относительная - не ниже 249 ч;

Абсолютная - не ниже 1400 ч.

Количество спермиев с аномальной морфологией - не более 18%;

Количество патогенных микробов в 1 мл - не более 5000.

 

Определение концентрации спермиев в счетной камере.

Материал и оборудование: сперма, микроскопы, счетные камеры (с

сеткой Горяева), смесители (меланжеры) для эритроцитов и лейкоцитов, покровные стек-ла, 3%-ный раствор натрия хлорида, 96%--ный спирт, эфир, марлевые салфетки, ват-ные тампоны.

Концентрация спермиев в сперме — это степень насыщенности спермы сперматозоидами. Она выражается количеством спермиев в 1 мл в миллиардах.

Определение концентрации спермиев в сперме складывается из: раз-бавления спермы в смесителе; подготовки счетной камеры; зарядки счетной камеры; подсчета спермиев; вычисления концентрации исследуемой спермы.

Разбавление спермы в меланже. Для определения концентрации спермиев необходимо разбавить сперму в строго определенное количество раз. Для спермы быка и барана применяют эритроцитарный смеситель (с красным шариком), а для спермы хряка и жеребца - лейкоцитарный (с белым шариком) (рисунок 4).

В меланжер набирают сперму до метки 0,5, а затем 3-ный раствор натрия хлорида до верхней метки. Эту работу необходимо выполнить очень точно. Зажимают большим и указательным пальцами оба конца меланжера и встряхивают его в течение 2-3 минут до полного перемешивания спермы с раствором.

Подготовка счетной камеры. Счетная камера с сеткой Горяева — это

толстое предметное стекло, поверхность которого бороздками разделена на три части. На среднем, окруженном бороздками поле, находится счетная сет-ка, площадь которой равна 9 мм². Это поле разделено на 225 больших квадратов, из них 25 в свою очередь разделены на 16 малых квадратиков. Пло-щадь каждого малого квадратика составляет 1/400 мм².

Счетную камеру и покровное стекло протирают тампоном, смочен-ным в смеси спирта и эфира (поровну). Вытирают насухо марлевой салфеткой. Покрывают камеру покровным стеклом и притирают стекло к крайним пластинкам до появления радужных колец.

Зарядка счетной камеры. Из капилляра меланжера удаляют на сухой тампон первые 2-3 капли разбавленной спермы, 4-5-ую капли наносят на среднюю часть камеры у самого края притертого покровного стекла.

Подсчет спермиев. Камеру помещают на предметный столик микроскопа. Под малым увеличением находят сетку камеры, а затем переводят увеличение в 200-300 раз. Подсчет спермиев производят в 5-ти больших квадратах, которые разделены на маленькие. Считают в квадратах расположенных по диагонали или по углам и в центре. Считают головки спермиев, расположенные внутри маленьких квадратов, и на верхней и левой линиях.

Для точности определения концентрации спермиев рекомендуется заправлять обе сетки и при подсчете брать средний показатель. Расхождение результатов не должно превышать 10%. Если разница больше 10%, подсчет повторяют третий раз и берут среднее из двух подсчетов, расходящихся не более чем на 10%.

 

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: