 |
Микробиологическая диагностика.
|
|
|
|
ГОУ ВПО Кировская ГМА Росздрава
Кафедра микробиологии с вирусологией и иммунологией
МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА ДЛЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЕЙ
Практическое занятие № 5 по частной микробиологии
для студентов 3 курса
лечебного, педиатрического факультетов
ТЕМА: Возбудители холеры. Синегнойная палочка. Протей.
ЦЕЛЬ: способствовать формированию умений по изучению основных свойств холерных вибрионов, их роли в патологии, по проведению микробиологической диагностики заболевания, лечения и профилактики; ознакомиться с характеристикой синегнойной палочки и протея, их участием в возникновении гнойно-воспалительных заболеваний, внутрибольничных инфекций, пищевых отравлений.
ЗАДАЧИ:
· Рассмотреть биологические свойства холерных вибрионов, синегнойной палочки, протея;
· Изучить эпидемиологию, патогенез, особенности клинического течения холеры, гнойно-воспалительных заболеваний, пищевых отравлений;
· Обучить методам лабораторной диагностики холеры, синегнойной и протейной инфекции;
· Усвоить специфическую профилактику и лечение холеры, заболеваний, вызываемых синегнойной палочкой и протеем.
Студент должен знать:
1. До изучения темы (базисные знания): особенности метаболизма аэробных бактерий, строение и функции жгутиков, классификацию и характеристику питательных сред, роль pH среды в культивировании бактерий.
2. После изучения темы: биологические свойства холерных вибрионов, синегнойной палочки, протея; эпидемиологию и патогенез холеры, синегнойной и протейной инфекции; профилактику и лечение, микробиологическую диагностику указанных заболеваний.
Студент должен уметь:
|
|
|
· отбирать материал для бактериологического исследования;
· осуществлять посев на питательные среды;
· микроскопировать фиксированные препараты;
· проводить профилактику и лечение холеры синегнойной и протейной инфекций.
Контрольные вопросы:
· Какие биовары и серовары холерных вибрионов вы знаете?
· Укажите время выдачи предварительного и окончательного ответа о наличии холерного вибриона в исследуемом материале.
· Какой характер движения вибрионов?
· Что означают препараты «висячая» и «раздавленная» капля?
· Чем отличаются НАГ вибрионы?
· Укажите особенности синегнойной и протейной инфекций на современном этапе.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
План практического занятия (135 мин)
1. Организационные вопросы ………………………………………... 5 мин
2. Теоретическая часть ………………………………………………. 45 мин
3. Практическая работа ……………………………………………….40 мин
4. Изучение демонстрационного материала …………………………10 мин
5. Оформление протокола …………………………………………….. 5 мин
6. Обсуждение задания на следующее занятие………………………..5 мин
7. Время на перерыв……………………………………………………10 мин
8. Проверка протоколов и подведение итогов………………………..10 мин
9. Уборка рабочего места………………………………………………. 5 мин
Содержание занятия:
1. Контроль исходного уровня знаний.
Способ – программированный тест-контроль.
2. Ориентировочные основы самостоятельной работы студентов:
· выполнение практической работы;
· разбор демонстрационного материала;
· оформление и защита протокола по занятию.
Разделы:
1.Биологические свойства возбудителя холеры.
2.Эпидемиология, патогенез, клиника, иммунитет, диагностика, специфическая профилактика и лечение холеры.
3. Биологические свойства синегнойной палочки, особенности эпидемиологии, роли в патологии, микробиологической диагностики, специфической профилактики и лечения синегнойных инфекций.
|
|
|
4. Характеристика бактерий рода Proteus, их значение в возникновении острых кишечных инфекций, гнойно-воспалительных заболеваний, пищевых отравлений и внутрибольничных инфекций.
5. Практическая работа.
Тезисы основного материала:
1. Возбудители холеры.
Холера – это острое инфекционное заболевание с тенденцией к эпидемическому и пандемическому распространению, протекающее по типу острого гастроэнтерита с резким нарушением водно-солевого и белкового обмена, сопровождающееся обезвоживанием и тяжелой интоксикацией.
1.1. История открытия:
Распространение холеры:
1 период: до 1817 года – заболеваемость холерой не выходила за пределы Индии с эпицентром в дельте рек Ганг и Брахмапутра;
2 период: 1817-1926 годы – с развитием торговли холера проникает за пределы Индии на другие страны и континенты, вызывая 6 пандемий. В России с 1823 по 1926 годы переболело 5,6 млн. человек, из них погибли более 2 млн. (около 40%).
3 период – с 1926 по 1961 годы, отмечается снижение заболеваемости холерой во всем мире.
4 период – 1961 год по настоящее время – 7 пандемия холеры,
особенности:
· берет свое начало не из Индии, а из Индонезии;
· распространяется в две волны: 1- до 1991 года (Индонезия); 2 – с 1991 года – охватывая страны Южной и Северной Америки, особенно США;
· высокая скорость распространения;
· более продолжительна;
· смена биовара V. choleras asiaticae. V. eltor;
· высокий процент формирования вибрионосительства;
· течение болезни в виде стертых, атипичных форм.
В 1854 году Ф. Пацини обнаружил возбудителя в испражнениях больных, в 1883 году Р. Кохом выделен в чистом виде и изучены биологические свойства классического холерного вибриона, в 1906 году супруги Готшлих открывают биовар V. eltor на карантинной станции Эльтор; в 1993 году во время вспышки холеры в нововосточной Азии обнаружили вибрион серовара 0139 (Бенгал).
Таксономия:
Семейство Vibrionaceae
Род Vibrio
Вид V. cholerae
Биовары; V. cholerae asiaticae (classicae)
V. eltor
Морфология: слегка изогнутая палочка, размеры 1,5 -4,0х 0,2-0,4 мкм, полиморфна (от зернистых форм до палочковидных в зависимости от возраста культуры и исследуемого материала), монотрих (жгутик в 2-3 раза длиннее тела, повышенная подвижность, напоминает ундулирующую мембрану). При лечении антибиотиками подвижность уменьшается и может превращаться в L- формы. Спор и капсул не образует.
|
|
|
Тинкториальные свойства: легко окрашивается анилиновыми красителями, гр. «отрицательные», в нативных препаратах виде «стайки рыб».
Культуральные свойства:
· хорошо растет на обычных питательных средах, но требователен к p H (галофил), оптимальная p H = 8,0-9,0. В 1% щелочной пептонной воде через 6-8 часов отмечается рост в виде нежной, тонкой, голубоватой пленки, в 0,5 -1% Na Cl – легкая мутность; на плотной среде через 10-12 часов вырастают гладкие, прозрачные, голубоватые колонии с ровным краем (S формы), при длительном культивировании колонии увеличиваются в размерах, возможны атипичные колонии: мутные, с плотным центром, пигментированные (коричневого или желтого цвета), мелкие, шероховатые (R-формы), бактерии из них не чувствительны к бактериофагам, антибиотикам и не агглютинируются О-антисывороткой. На щелочно-кровяном агоре V. cholerae asiatica не дает зон гемолиза, V. eltor - дает зону гемолиза; на агаре с тиосульфатом, цитратом, солями желчных кислот и сахарозой (ТС BS агар) образует желтые колонии
· строгий аэроб;
· оптимальная температура роста 37 °С;
· время культивирования (6-8-10-12-24 часа).
Биохимические свойства:
активны, расщепляют глюкозу, мальтозу, лактозу, гликоген, маннит с образованием кислоты без газа, разжижают желатин в виде воронки, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты (нитрозоиндоловая проба), разлагают мочевину, крахмал. По способности ферментировать сахарозу, арабинозу и маннозу все вибрионы по классификации Хейберга разделены на 6 групп. Холерные вибрионы принадлежат к 1 группе (триада Хейберга) – расщепляют сахарозу и маннозу и не расщепляют арабинозу.
Антигенная структура:
О-антиген – специфический, неоднороден: видовые и типовые антигены. В роду Vibrio 139 сероваров по О антигену. Вид определяется в реакции с 01 сывороткой, а тип с сыворотками Инаба и Огава, так как выделяют три серотипа: А, В, С; А – общий, АВ – Огава, АС – Инаба, АВС – Гикошима. Они являются эпидемиологическими маркерами.
|
|
|
Вибрионы, агглютинирующиеся сывороткой 0139, назвали биоваром Бенгал.
Rформы, слизистые М-формы с измененной структурой О-антигена не агглютинируются 01 антисывороткой, поэтому для идентификации OR и R диссоциантов используют OR- антисыворотки.
Н –антиген термолабильный, общий, неспецифической, белковой природы. Н- антигены общие для большой группы бактерий, их разделяют на А и В группы: А – холерный вибрион, В – холероподобные, 6 групп.
Вибрионы, не агглютинирующиеся сыворотками групп 01, называются неагглютинируемыми – НАГ вибрионами, вызывают холероподобные заболевания.
Также у холерного вибриона было выделено еще 2 антигена, которые стимулируют образование вибриоцидных и антитоксических антител.
Факторы патогенности:
1. токсины:
А) эндотоксин (ЛПС клеточной стенки, термостабильный, вызывает воспаление и индуцирует синтез вибриоцидных антител)
Б) экзотоксин= энтеротоксин= холероген (основная роль в патогенезе, термолабильный белок, его образование кодируют хромосомные и плазмидные гены, состоит из двух компонентов: А и В. Компонент А составляют субъединица А1 (активный центр) и субъединица А2 , связывающая А и В. Субъединица А1 активирует аденилатциклазу, приводя к увеличению внутриклеточного содержания цАМф и выходу жидкости и электролитов из клеток либеркюновых желез в просвет кишечника.
Компонент В – нетоксичный, обладает способностью соединяться с рецепторами эпителиальных клеток тонкого кишечника, облегчая проникновение в клетку компонента А.
Бактерии серовара 0139 также синтезируют экзотоксин с аналогичными свойствами, но в меньших количествах.
В) экзотоксины LT, ST, SLT
Г) фактор проницаемости – повышает проницаемость капилляров.
2. ферменты: нейраминидаза= сиалидаза (отщепляет от гликопротеинов эпителия сиаловую кислоту, создавая «посадочную» площадку для вибрионов, увеличивая количество рецепторов для холерогена путем модификации три - и дисиалогликозидов в моносиалогликозиды
Gm1); гиалуронидаза; муциназа (способствует разрушению муцина на эпителиальных клетках, что облегчает всасывание токсических продуктов), протеазы, лецитиназа, гемолизин V. eltor.
2. Структурные и химические компоненты клетки:
a) Жгутики, обусловливающие хемотаксисдля преодоления слизистого слоя и взаимодействие с эпителиальными клетками. У мутантов Сhe– - (утративших способность к хемотаксису) вирулентность снижена, а у мутантов Mot- – (утративших подвижность)вирулентность исчезает или снижается в 100-1000 раз.
|
|
|
Резистентность:
Выживаемость во внешней среде зависит от pH среды, вибрионы чувствительны к действию прямых солнечных лучей, высокой температуре (при 50° С погибают за 30 минут, 80° С – 5 минут, 100°С – через несколько секунд), высушиванию, в открытых водоемах сохраняются от нескольких дней до 2-3 недель- 3 месяцев, в морской воде до 47 суток, в почве от 8 дней до 3 месяцев, в сточных водах -1-2 суток, в выгребных ямах – до 3-4 месяцев. Устойчивы к действию низких температур (во льду могут сохраняться до 1-4 месяцев), сохраняются в молоке и молочных продуктах от 5 дней до 4 недель, на фруктах 1-2 дней, на сырых овощах -2-4 дня, в растворе сулемы1:100000 погибают через 5 минут, в хлорсодержащих веществах -10 минут; высокочувствительны к кислотам, к МnO4 – 15 минут, чувствительны к антагонистическому действию сапрофитов, к антибиотикам тетрациклинового ряда, V. eltor устойчив к полимиксину в отличие от V. cholerae asiaticae /
Установлено наличие 7 наборов бактериофагов, среди V. cholerae выделяют 16 фаготипов. ХДФ -3 избирательно лизирует холерные вибрионы классического типа, ХДФ-4 – вибрионы Эль- Тор, ХДФ- 5 лизирует только холерогенные (вирулентные) вибрионы обоих типов.
Дифференциальные признаки возбудителей холеры
| № п/п | Признаки | V. cholerae Биовар asiaticae | V. cholerae Биовар eltor | Серовар 0139 (Бенгал) |
| 1. | Реакция Фогес – Проскауэра | + - (чаще -) | + - (чаще +) | + - (чаще +) |
| 2. | Чувствительность к полимиксину В (50 ЕД) | + | - | - |
| 3. | Чувствительность к классическому монофагу (С или 4 группа по С. Мукерджи) | + | - | - |
| 4. | Чувствительность к монофагу 5 группы Эль- Тор | - | + | - |
| 5. | Гемолиз эритроцитов барана | - | + | - |
| 6. | Агглютинация куриных эритроцитов | - | + | + |
| 7. | Гексаминовый тест (культуру выращ. в б-не с глюкозой, гексамином (уротропином) и индикатором бромтимоловым синим (+ - через 6-8 часов зеленый цвет изменен на желтый) | - | + | - |
| 8. | Агглютинация с О сыв. | + | + | + |
| О1 | + | + | - | |
| Огава Инаба | + | + | ? |
Роль в патологии: вызывают холеру.
Эпидемиология:
Холера –антропонозное заболевание.
Источник инфекции – больной человек с первых дней заболевания, выделяет 100 млн.- 1 млрд. в 1 грамм кала. ДI = 1 млн. возбудителей; рековалесцей (в течение 7-10 дней); вибрионоситель (100- 100000 вибрионов 1 мл материала)
Механизм заражения: фекально-оральный, контактный.
Пути заражения: водный, алиментарный, контактно-бытовой,
Факторы передачи: вода, предметы окружающей среды, мухи (необходимо отметить, что в застойной воде, загрязненной органическими веществами, моющими средствами, холерный вибрион размножается; в экосистемах может существовать в виде некультивируемых форм, поэтому определяют ДНК-вибриона в полимеразой цепной реакции).
Патогенез: входные ворота – тонкий кишечник, основная роль принадлежит токсинам, особенно холерогену, вызывающему дегидратацию и обессоливание организма (адсорбируясь на рецепторах, активирует аденилатциклазу, что приводит к накоплению цАМФ, который усиливает секрецию электролитов Na+, HCO-3 , К+ , Cl – и воды из энтероцитов). Вибрион находится только в тонком кишечнике, размножается, не распространяясь по организму, вибрионемия отсутствует.
Клиника: инкубационный период от нескольких часов до 2-6 дней, чаще 2-3 дня. Выделяют 3 периода:
I. Холерный энтерит: на фоне нормальной температуры редкий жидкий стул, через 1-2 дня присоединяется рвота;
II. Острый гастроэнтерит: частая рвота, урчание в животе, испражнения приобретают вид «рисового отвара»- мутная жидкость с плавающими остатками слизи и клетками эпителия; акты дефекации учащаются, язык покрывается налетом, количество мочи уменьшается, выраженная жажда, обезвоживание;
III. Холерный алгид – t 35°C, кожные покровы серые, синюшные, морщинистые, лицо Гиппократа «facies hippocratica»: нос заострен, глаза запавшие, выступающие скулы; афония, гипотония. Смерть наступает от сердечно-сосудистой и почечной недостаточности в результате обезвоживания и интоксикации.
Иммунитет: постинфекционный, стойкий, продолжительный, антимикробный и антитоксический; поствакцинальный недлительный в течение 3 -5 месяцев.
Микробиологическая диагностика.
Основной метод исследования – бактериологический. Объектами исследования служат фекалии, рвотные массы, желчь, секционный материал, мухи, вода, ил, гидробионты, сточные воды. Транспортная среда: 1% пептонная вода с pH 8,2-8,6, правила транспортировки соответствуют особо опасным инфекциям.
Серологический метод
а) сероидентификация: ИФА, РИФ, РПГА с антительным эритроцитарным диагностикумом (РТПГА для подтверждения РПГА), РА с О, OR, 0139 антисыворотками
б) серодиагностика: РА, РПГА с эритроцитарным холерным диагностикумом РНАг, реакция лизиса, ИФА (для ретроспективной диагностики, выявления вибрионостителей, оценки поствакцинального и постинфекционного иммунитета).
Ускоренные методы: РИФ, ДНК-зонды, ПЦР, иммобилизация вибрионов О-холерной сывороткой и бактериофагом.
Необходимо идентифицировать и дифференцировать от V. parahaemolyticus, V.vulnificus, V.alginoluticus, V.mimicus, V.damsela, V.metschnigovii, V.proteus (finglepriori), V.albensis.
Предварительный положительный ответ при диагностике холеры выдается через 5-6 часов на основании обнаружения в посевах культур, агглютинирующихся на стекле холерной О-сывороткой, в разведении 1:100 и типовой сывороткой Огава или Инаба (1:50), и при положительном результате ускоренных методов исследования (ИФА, РИФ, микроагглютинации, РПГА, реакции иммобилизации).
Окончательный положительный ответ выдается через 18 -48 часов на основании выделенных культур, имеющих типичные морфологические признаки с учетом данных развернутой реакции агглютинации с холерными сыворотками О, OR, Огава, Инаба, пробы с холерными диагностическими фагами; принадлежности к 1 группе Хейберга.
Профилактика:
а) неспецифическая – раннее выявление больных и носителей;
- усиление санитарно-гигиенического надзора;
- санитарно-просветительская работа;
- введение карантинных мероприятий
б) специфическая – вакцинация по эпидемиологическим показаниям.
Используют вакцины:
- химическая вакцина из штаммов классического вибриона и V. eltor;
- холероген – анатоксин;
- холероген-анатоксин в сочетании с О-антигеном холерного вибриона Инаба и Огава (химическая энтеральная бивалентная вакцина)
- убитая вакцина из штаммов Огава и Инаба;
- убитая вакцина из штаммов вибриона Эль- Тор;
Лечение:
а) неспецифическое – восстановление водно- электролитного баланса;
- антибактериальные препараты: тетрациклин, левомицетин, ко-тримоксазал, фуразолидон и т.д.
б) специфическая – бактериофаги (существуют, но в практике не применяются).
Синегнойная палочка
История:
Открыта в 1862 году А. Люке, выделена и описана в 1872 году Дж. Шретером, чистую культуру выделил П. Жессар.
Таксономия:
Сем. Pseudomonadaceae
Род Pseudomonas
Вид P. aeruginosa
(Необходимо отметить, что P. mallei вызывает –caп, P. pseudomallei – мелиоидоз у животных; P. putida, P.fluorscens, P. cepacia и др. у человека).
Морфология.
Размеры 1-3 х 0,5 -1 мкм, подвижны (1 или 2 полярных жгутика), располагаются одиночно, попарно, в виде коротких цепочек, но чаще беспорядочно, могут формировать незавершенный фагоцитоз, много микроворсин образуют слизистое вещество, напоминающее капсулу «мукоидные штаммы»
Тинкториальные свойства: гр. –
Культуральные свойства:
1. Нетребовательная к питательным средам
а) в жидких средах образует серовато-серебристую пленку, старые культуры обр. мутность сверху вниз
б) на плотных средах формирует небольшие колонии 2-5 мм, выпуклые S- тип, иногда R-тип: плоские, неправильной формы с волнистыми краями и складчатой поверхностью в виде «маргаритки». Может быть феномен радужного лизиса - появление на поверхности колоний пленки, переливающейся всеми цветами радуги в отраженном свете (обусловлено действием б/фага и характерен только для P. aeruginosa)
в) на скошенном агаре – тонкий блестящий налет. Культура имеет специфический запах жасмина (ароматические вещества).
Характерным свойством является появление к концу первых суток сине-зеленого окрашивания колоний с последующим проникновением пигмента (пиоцианина) в питательную среду. Некоторые штаммы продуцируют красный (пиорубин) или коричнево-черный (пиомеланин), желтый (L- оксифеназин), зеленый (пиовердин или флюоресцен) пигмент.
2. Строгий аэроб.
3. t ° ф-р: 6-45 °С, оптимальная t ° - 37°С, но хорошо растет и при 42°С.
4. Время культивирования -24 часа.
Биохимические свойства:
1. Хемоорганотроф;
2. Образует триметиламин с запахом карамели или жасмина;
3. Каталаза положительный;
4. Синтезирует цитохромоксидазу (индолфенолоксидаза), т.е. оксидазный тест «+»;
5. Протеолит. активность высокая: разжижает желатин, свертывает сыворотку крови, гидролизует казеин; утилизируют гемоглобин, т.е. образуют на кровяном агаре зону B-гемолиза; расщепляет сок: валин, аланин, свертывает лакмусовое молоко и затем расщепляет сгусток, восстанавливают нитраты в нитраты и далее азота, но не образует индола и H2 S.
6. Сахаролитическая активность низкая – окисляют только глюкозу с образованием глюконовой кислоты, реакция Фогеса – Проскауэраотрицательная (для идентификации среды «пестрого ряда» готовят с малым содержанием пептона (до 0,1 %) и высокой концентрацией углеводов (до 2%). Тест Хью-Лейфсон «+» только с глюкозой в аэробных условиях.
Антигены: О-сом. Аг и Н-аг, М-а/г у некоторых штаммов О-антигенный комплекс: ЛПС + белки, групповой специфичностью обладает ЛПС – О1, О2 и т.д. до 20 серогрупп. Белковый компонент – общий для всех псевдомонад, т.е. родовой.
Н- антигенный комплекс – термолабильные белки низкой специфичности, обусловлен различиями в строении флагеллинов. Выявлено 15 серотипов: Н1, Н2 и т.д. (обнаружено только у живых подвижных штаммов, без воздействия дезинфицирующих и антимикробных средств).
Факторы патогенности:
1. Токсины:
а)эндотоксин - приводит к развитию пирогенной реакции, стимулирует воспаление;
б) энтеротоксин образуется редко, только при шанхайской или пятидневной лихорадке;
в) фактор проницаемости;
г) гистотоксин, лейкоцидин, гемотоксин у некоторых штаммов;
д) экзотоксин в виде комплекса:
· Экзотоксин А – термолабильный белок, высокотоксичный подавляет синтез белков через АТФ - рибозилирование и нарушением организации матрицы белкового синтеза, вызывает общий токсический эффект, отеки, некроз, артериальную гипотензию с последующим коллапсом, метабол. ацидоз, дыхательную недостаточность и т.д.
· Экзоэнзим S – термостабильный белок с АДФ-трансферазной активностью, в виде протоксина.
· Цитотоксин – действует на сегментоядерные нейтрофилы, повышает проницаемость клеточных мембран, происходит потеря белковых молекул, клетка набухает, нарушаются физиологические градиенты К+ , Na + , Са2+ и глюкоза, ультраструктурные изменения.
· Термолабильный гемолизин с лецитиназной. активностью (фосфолипаза С) и термостабильный гемолизин (фософлипаза), вызывают солюбилизацию и гидролиз фосфолипидов с образованием фосфорилхолинов – источник неорганических фосфатов.
Ферменты патогенности нейраминидаза; протеаза II (эластаза),действует на эластин, казеин, гемоглобин, фибрин, Ig (иммуноглобулулин), комплемент; протеаза III (щелочная протеаза) …на Y ИФН; коллагеназа (преимущественно действует на коллаген роговицы); лецитиназа.
Строение и химические компоненты
- жгутики;
-капсулоподобная слизь;
-бактериоцины (пиоцин, действует на гр + и гр- бактерии, обладает фунгицидным действием, проводят пиоцинотипирование в эпид. ситуациях)
Резистентность
Устойчивы, к УФЛ, антисептикам (фурацинол, риванол), в пыли сохраняются 2 недели, в кусочках ожоговых корочек – 8 недель; но погибают при 60°С в течение 15 минут, 55°С- 1 час; 2% фенол – мгновенно; обладают высокой резистентностью к антибиотикам, но чувствительны к бактериофагам.
Эпидемиология
Естественной средой обитания является кишечник человека и животных
Пути заражения: контактно-бытовой, алиментарный
Факторы: почва, вода, воздух.
Вызыв. ГВИ им ГСЗ в виде оппортунист шиф., т.е. у людей с низкой резистентностью и поврежденными анатомическими барьерами (Ожеговыми ранами). Отметить, что у ожоговых больных нейтрофилы теряют способность подавлять размножение синегнойной палочки.
Это внеклеточный паразит, БАВ защищает возбудителя.
М.б. эндогенная инфекция. Пищевые токстикоинфекция и ВБИ характеризуется высокой летальностью и устойчивостью к 6-8 антибиотикам из-за R плазмид. Клиника зависит от очага поражения.В 30% госпитализированных инфекций – синегнойная палочка в ассоциации с другими микробами: сафилококки, протей, кишечная палочка.
Иммунитет: постинфекционный (нестойкий, непродолжительный)
Лабораторная диагностика:
1. взятие материала. Из разных биотопов;
2. определение количественного содержания.
Профилактика:
а) неспецифическая: соблюдение санитарно-гигиенических норм;
б) специфическая: поливалентная корпускулярная инактивированная жидкая синегнойная вакцина; анатоксин синегнойной палочки; стафило-протейно-синегнойная адсорбированная жидкая химическая вакцина
- бактериофаг псевдомонадный в виде моно-, интести - ….комбинированного пиобактериофага.
Лечение:
а) неспецифическое - антибиотики, необходимо учитывать резист к антибиотикам, обусловленную блокадой транспорта препарата к внутриклеточной мишени и его инактив ферментами: β-лактамазы, ацетилтрансферазы, нуклеотидазы;
б) специфическое:
-бактериофаг;
-сыворотка, иммуноглобулин, плазма доноров;
- аутовакция
3. Протеи
История: в 1885 году Хаузер выделил P. mirabilis из гниющего мяса. Из-за способности проявлять различный рост на плотных средах подобно Богу Протею, меняющую свой облик, назван Proteus.
Таксономия:
Сем.Enterobacteriaceae
Триба, Proteae
Род Proteus
Виды: Р. vulgaris, Р.mirabilis, Р.penneri,
Р. Muxofaciens
(необходимо отметить, что Р. Morganii введен в род Morcanella Р. rettgeri и Р.stuartii в род Providencia)
Морфология: палочки, склонные к полиморфизму, размерами 1-3х0,4-0,8 мкм, имеют жгутики (перитрих), капсулу не образуют (некоторые штаммы - микрокапсулу), неспорообразующий.
Тинкториальные свойства: грам «-»
Культуральные. свойства:
1. Растут на простых питательных средах:
а) в жидкой среде – диффузное помутнение с последующим образованием осадка;
б) колонии протеев в О-форме на МПА (без жгутиков) круглые, выпуклые, полупрозрачные. Н-формы дают ползучий рост. Причем на агаре меньшей плотности при t° 20-22° C характерен «феномен роения» образование концентрических колец роста по периферии центральной колонии или однородная пленка по влажной поверхности питательной среды. Рост сопровождается гнилостным запахом. На среде Плоскирева формируют желтовато-розовые колонии (в зоне роста среда подщелачивается и желтеет); на висмут-сульфитном агаре через 48 часов образуют серо-коричневые колонии с черно-коричневой редукционной зоной, на Эндо и Мак Конки – бесцветные колонии; pH 7.2 – 7.4; при посеве в конденсационную воду скошенного агара по Шукевичу дают ползучий рост.
2. Факультативные анаэробы.
3. Температурный фактор от 10-43° С, оптим 35-37°С.
4. Время роста – 24 часа.
Биохимические свойства: D-глюкозу и некоторые углеводы: ксилозу, мальтозу сбраживают до кислоты и, обычно, газа в зависимости от вида, оксидаза – отрицательны, каталаза – положительны, не синтезируют лизиндекарбоксилазу и аргининдигидролазу, дезаминируют фенилаланин и триптофан, гидролизуют мочевину, расщепляют тирозин, восстанавливают нитраты.
Антигенная структура: О -, Н -, К - антигены, различают несколько десятков сероваров, некоторые сероварыпротея: ОХ - штаммы, имеют перекрестнореагирующие антигены с риккетсиями.
Факторы патогенности:
1. Токсины:
- эндотоксин – ЛПС клеточной стенки;
- гемолизины обнаруживаются при инкубации более 48 часов, различают гемолизины двух типов:
1 типа (у 94-100% изолятов Р. mirabilis и 84-96% Р. vulgaris) образуется в начальный и средний периоды логарифмической фазы роста, проявляет цитотоксическое действие на эпителий мочевого пузыря, моноциты человека, культуру клеток Vero;
2 типа (у 98% изолятов Р. penneri и 8% Р. vulgaris) образуются в присутствии ионов Са2+,синтез детерминирован плазмидами, разрушают эритроциты, нейтрофилы, фибробласты человека с образованием пор и каналов в липидном бислое клеточных мембран.
2. ферменты: протеазы (повреждают IgА, IgG, повышают проницаемость сосудов, дезаминируют аминокислоты и действуют как сидерофоры), уреазы (бактерии разлагают мочевину в качестве источника энергии до хлорида аммония, который вызывает местное воспаление и повышает рН до значений, способствующих образованию кристаллов (струвитов), камней и застою мочи.
3. Структурные и химические компоненты клетки
- фимбрии (у Р. mirabilis выделены 2 типа пилей по отношению к маннозе: маннозозависимые и маннозонезависимые, вызывающие агглютинацию эритроцитов различных животных и человека);
- микрокапсула; белки наружной мембраны.
- способность к «роению» у вытянутых форм протея, дает возможность прилипать к паренхиме почечной ткани и эпителию мочевого пузыря; а палочковидные «плавающие клетки» выделяются из гнойных и серозно-гнойных экссудатов.
Резистентность: более устойчивы, чем Е. coli, участвуют в процессах гниения, размножаясь в органических субстратах; погибают при 60°С через 60 минут, 80° С – 5 минут, 1% р-р фенола – 30 мин.
Эпидемиология:
Источник: кишечник животных и человека, относится к условно-патогенным м/о. Механизм заражения - фекально-оральный, контактный.
Входные ворота: ЖКТ, ожоговые и другие раны.
Роль в патологии: пищевые токсикоинфекции, гнойно-воспалительные заболевания (особенно мочевыводящие пути), внутрибольничные инфекции, экзогенные и эндогенные (аутоинфция) инфекции при иммунодефицитных состояниях.
Патогенез: адгезия обеспечивает прямую колонизацию и опосредованное действие: при взаимодействии пилей с клеточными рецепторамиактивизируются цитокины (ИЛ-6, ИЛ-8), развивается воспаление, при попадании ИЛ-6, Ил-8 в кровь развивается генерализация процесса.
Иммунитет: постинфекционный нестойкий, непродолжительный, видоспецифичны.
Лабораторная диагностика: применяются среды с тирозином и триптофаном, на которых м/о вызывают просветление за счет разрушения кристаллов тирозина и побурение среды, в присутствии триптофана; для идентификации прочих энтеробактерий используют способность дезаминировать фениналанин, который разлагается до фенилпировиноградной кислоты в присутствии с Fe Cl 2 с окрашиванием среды в зеленый цвет; в отличие от бактерий родов Morganella и Providencia при росте протея на лизино-железном агаре происходит окрашивание среды в оранжево-красный цвет в присутствии хлорида железа из-за дезаминирования лизина и образования кетокислот.
Профилактика:
неспецифическая: соблюдение санитарно-гигиенических норм.
Специфическая: бактериофаг в виде моно- и комбинированного (интести –бактериофаг, пиобактериофага, коли-протейногобактериофага).
Лечение
неспецифическое: антибиотики_ ампициллин, цефалоспорин, фтор-хинолоны; специфич. – бактериофаги.
Практические задания для студентов:
Провести бактериологическое исследование крови при подозрении на тифо-паратифозное заболевание (метод гомокультуры).
III этап.
1. Учет ферментации углеводов на среде Ресселя и среде с маннитом.
2. приготовить мазок со скошенного агара, окраска по Граму, микроскопия.
3. Постановка РА с поливалентной сальмонеллезной сывороткой, монорецепторными сыворотками: 09; 02; 04; Hd.
4. Заключение.
Выполнить. Серологическое исследование крови больного при подозрении на тифо - паратифозное заболевание (реакция Видаля). 2 этап.
1. Учет реакции Видаля (см. протокол занятия № 4).
Определить холерный вибрион при иммерсионной микроскопии демонстрационного фиксированного мазка.
Изучить вакцины холерные (демонстрационные препараты).
Рекомендуемая литература:
Основная:
1. Борисов Л.Б. с соавт. Мед. Микробиология, вирусология, иммунология: Учебник/ Под ред. Л.Б. Борисова. А.М. Смирновой. – М.: Медицина. -1994.-с.322-325;с.293-296; 285-286.
2. Борисов Л.Б. Мед. Микробиология, вирусология, иммунология- М.: ООО «Мед. Информ. Агентство»-2002.- с.398-400; 409-412; 418-420.
3. Зыков М.П. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. М.: Медицина.-1977.-с.211-215.
4. Борисов Л.Б. Козьмин-Соколов Б.Н., Фрейндлин И.С. Руководство к лабораторным занятиям по мед. микробиологии, вирусологии и иммунологии. Учебное пособие.- М.: Медицина, 1993-240с.
Дополнительная:
1. Воробьев А.А., Быков А.С. Микробиология: Учебник. – М.: Медицина-1994.-с. 183-186.
2. Поздеев О.К. Медицинская микробиология/ Под ред. Акад. РАМН В.И. Покровского.- М.: ГЭОТАР - МЕД.- 2001.- с.375-380; 343-348; 373-374.
3. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Мед. микробиология, иммунология и вирусология. Учебник.- СПб «Спец. Литература», 1998.-с.394-401; 348-353.
Методические рекомендации рассмотрены и утверждены на кафедральном совещании от «_______»_________________2007 г. протокол № _________
Зав кафедрой микробиологии
с вирусологией и иммунологией,
д.м.н, профессор ____________________ А. И. Смирнова.
|
|
|
