Построение калибровочного графика

ТЕСТ НА ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ГЛЮКОЗЕ.

ПОСТРОЕНИЕ САХАРНЫХ КРИВЫХ

 

Содержание глюкозы в сыворотке крови в норме 3,3-5,5 ммоль/л (до 6,1 ммоль/л). Повышение(гипергликемия) наблюдается после приема пищи (алиментарная), шоковых состояниях, при сахарном и стероидном диабете, при стрессах, тиреотоксикозе и др. Снижение (гипогликемия) отмечается при голодании, длительной физической нагрузке, беременности, опухолях островкового аппарата поджелудочной железы, избыточном введении инсулина.

У здорового человека однократный прием 50–100 г глюкозы вызывает временное повышение сахара в крови (пищевую или алиментарную гипергликемию), обусловленное тем, что при введении сразу большого количества глюкозы печень не успевает превратить ее в гликоген и часть ее переходит в кровь. Повышение содержания сахара в крови вызывает усиленное выделение инсулина, который нормализует концентрацию глюкозы в крови уже через 2–2,5 часа. Если степень гипергликемии после нагрузки сахарами превосходит обычную и сохраняется дольше, чем у здоровых лиц, то говорят о нарушенной толерантности к углеводам. Чаще всего причиной нарушения толерантности является инсулярная недостаточность, поэтому тест на толерантность к глюкозе, как правило, используется для выявления сахарного диабета.

Анализ сахарных кривых

1. Первый подъем уровня сахара в крови (через 30 мин) отражает силу рефлекторного раздражения симпатических нервов в ответ на введение глюкозы в пищеварительный тракт.

2. Дальнейшее увеличение концентрации сахара в крови связано с быстротой всасывания углеводов, функцией печени и всех остальных периферических органов. У здорового человека приблизительно через 60 мин после сахарной нагрузки уровень глюкозы возрастает на 50–70% по сравнению с уровнем глюкозы натощак.

3. Нисходящий участок гликемической кривой (через 90 мин) отражает продукцию инсулина и зависит от состояния парасимпатической нервной системы, функции поджелудочной железы, печени и др.

4. Последняя точка на гликемической кривой (через 2–2,5 часа) обусловлена равновесием всех систем организма и в норме должна совпадать с цифрой содержания сахара натощак или быть немного ниже.

 

 

 

 

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСАДОЧНЫХ ПРОБ

 

В норме белки плазмы крови находятся в коллоидном состоянии и отличаются высокой устойчивостью. При постановке осадочных проб, которые сопровождаются химическим и физическим вмешательством, наступает преципитация белков, приводящая к помутнению или образованию хлопьев. Степень помутнения и время образования хлопьев отражает изменения устойчивости белков плазмы крови, характерные для отдельных заболеваний.

Тимоловая проба

 

При взаимодействии сыворотки крови с тимоловым реактивом появляется помутнение вследствие образования глобулиново–тимолово–липидного комплекса, интенсивность которого изменяется турбидиметрически

Проба имеет наибольшее диагностическое значение при заболеваниях печени. В норме показатели пробы находятся в пределах 0–4 ед. Положительная проба наблюдается при эпидемическом гепатите, циррозах печени, в постгепатитном периоде. Длительное значительное повышение показателей тимоловой пробы дает основание подозревать переход острого гепатита в хронический, т.е. указывает на активность процесса.

 

 

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА БЕЛКА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ.

ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОГО ГРАФИКА

Диагностическое значение: содержание белка в сыворотке крови составляет 65-85 г/л. Повышение его концентрации в сыворотке крови (гиперпротеинемия) наблюдается при обезвоживании или инфекционных заболеваниях. Снижение содержания белка (гипопротеинемия) отмечается при голодании, заболеваниях печени и почек, при потере крови.

Принцип метода: основан на способности белков, как полипептидов, вступать во взаимодействие с гидратом окиси меди и давать продукт, окрашенный в сине-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию белка в исследуемом образце.

 

Основные принципы и правила построения калибровочного графика:

1. По справочной таблице находят интервал возможных значений концентрации (максимум и минимум) определяемого вещества у здоровых лиц. Учитывают также возможные изменения концентрации этого вещества при патологии (диапазон колебаний). Например, со­держание белка в сыворотке крови составляет 65-85 г/л. При патологии содержание белка в сыворотке крови может снижаться до 40 г/л или увеличиваться до 120 г/л. Поэтому готовят стандартные растворы белка с концентрацией 40-120 г/л.

2. Выбирают рациональный интервал концентраций стандартных растворов исследуемого вещества для колориметрирования (40, 60, 80, 100, 120 г/л). На основе биуретовой реакции с этим раствором белка получают значения оптической плотности для каждого стандартного раствора.

3. По данным, полученным после колориметрирования стандартных растворов исследуемого белка, строят калибровочный график рационального масштаба. Для этого на миллиметровой бумаге по оси абсцисс откладывают значения концентрации стандартных растворов, а по оси ординат - соответствующие значения оптической плотности. По полученным точкам строят график зависимости оптической плотности от концентрации.

Ход работы:

Приготовление стандартных растворов белка проводят путем разведения стандартного 10 % раствора альбумина согласно таблице:

 

№ пробирки	10% раствор альбумина, мл	0,9% раствор NaCl, мл	Концентрация белка, г/л	Экстинкция (E)
1. 2. 3. 4. 5.	0,2 0,4 0,6 0,8 1,0	0,8 0,6 0,4 0,2 0,0		0,15 0,35 0,5 0,6 0,65

 

Выполнение биуретовой реакции: В 5 пробирок помещают по 0,1 мл каждого стандартного раствора белка; в шестую – 0,1 мл 0,9% раствора NaCl (контрольный раствор); в 7, 8, и 9-ую пробирки вносят по 0,1 мл сыворотки крови из пробирок «Задача 1», «Задача 2», «Задача 3» (опытный раствор). Далее во все пробирки добавляют по 5 мл биуретового реактива, пере­мешивают, оставляют на 30 минут. Интенсивность окраски (экстинкцию) определяют фотометрически при длине волны 540 - 560 нм против контрольного раствора. Калибровочный график (зависимость экстинкции от концентрации) строится по данным, измеренным для стандартных растворов. Концентрацию белка в исследуемой жидкости (задачи 1,2,3) определяют графически по калибровочному графику.

Без построения калибровочного графика возможен упрощенный способ определения содержания белка в исследуемых жидкостях. Для этого параллельно с опытными пробами колориметрируется только один стандартный раствор, а результат измерения используется для расчета неизвестной концентрации белка в опытных пробах (Сх) по формуле:

 

Ех * Сст Ех – экстинкция опытной пробы

Сх = ––––––––––––, где Ест – экстинкция стандартной пробы

Ест Сст – концентрация белка в стандартной пробе

 

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: