 |
День исследования (3 сутки, 72 часа).
|
|
|
|
РАЗДЕЛ 2: частная микробиология
ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:
обучающие:
| · дать понятие о правилах забора, хранения, транспортировки и подготовки материала к исследованию; |
|
| · обучить методике микробиологической диагностики коклюша и паракоклюша |
.
ЗАДАНИЯ.
| 1. Произвести забор материала тампоном и посев материала на питательные среды. |
| 2. Изучить морфологий колоний на плотных питательных средах с помощью стереомикроскопа. |
| 3. Произвести посев культуры на скошенный КУА для выделения чистой культуры. |
| 4. Приготовить мазки из культуры с чашки на среде КУА, окрасить их по Граму, результаты микроскопирования зарисовать. |
| 5. Произвести учет проб для определения тирозиназы и уреазы. |
| 6. Определить серовариант культуры в реакции агглютинации на стекле со специфическими неадсорбированными коклюшными и паракоклюшными сыворотками и с адсорбированными монорецепторными сыворотками к факторам 1 и 14 и факторам 1. 2, 3. |
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ.
1. Какие представители рода Botdetella вызывают заболевания у человека?
2. Каковы культуральные особенности возбудителя бордетелл?
3. Каковы особенности доставки исследуемого материала в лабораторию?
4. Охарактеризуйте дифференциальные признаки коклюша и паракоклюша.
5. Какова антигенная структура бактерий рода Botdetella?
ТЕМА: «КОКЛЮШ. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ,
ЗАБОР, ПОСЕВ, МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ БОРДЕТЕЛЛ».
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: выявление возбудителя и дифференциация возбудителей коклюша от паракоклюша.
Возбудители – Bordetella pertussis, Botdetella parapertussis (род Bordetella семейства Brucellaceae)
|
|
|
Bordetella pertussis («палочка коклюша» или «коклюшная палочка») — мелкая, биполярно окрашенная, неподвижная, неспорообразующая, аэробная грамотрицательная коккобацилла, вызывающая специфическое поражение эпителия бронхов, называемое коклюшем.
Bordetella pertussis морфологически и генетически весьма сходна с Bordetella parapertussis («паракоклюшной палочкой», «палочкой паракоклюша»), также вызывающей коклюшеподобное, но более лёгкое заболевание дыхательных путей у человека, называемое паракоклюшем. Определённое генетическое и морфологическое сходство имеется также с Bordetella bronchiseptica, микробом, вызывающем коклюшеподобное заболевание у животных и иногда поражающим также и человека.
ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: отделяемое слизистой оболочки носоглотки.
СПОСОБЫ СБОРА МАТЕРИАЛА:
Материал забирают натощак или через 2-3 часа после еды.
1. Заднеглоточный способ.
Для взятия материала используют 2 вида тампонов, предварительно до его стерилизации изогнутых под тупым углом: сухой и увлажненный.
Материал, взятый сухим тампоном, засевают немедленно на одну из рекомендуемых питательных сред, а при взятии материала увлажненным тампоном (буферная смесь КН2РО4 и Na2NPO4, агар и активированный уголь) его доставляют для посева в лабораторию, но не позднее 2-4 часов после взятия материала.
Методика взятия материала сухим и увлажненным тампонами сводится к следующему. Медицинский работник левой рукой фиксирует с помощью шпателя корень языка, а правой вводит тампон в полость рта, продвигая его за корень языка. Тампон не должен касаться слизистой щек, языка и миндалин. Кончиком тампона и выпуклой его частью касаются задней стенки глотки, проводя по ней справа налево 2-3 раза. Затем также осторожно над шпателем извлекают тампон из полости рта. В обоих случаях желательно посев производить на 2 чашки Петри.
2. Метод кашлевых пластинок (Борде).
|
|
|
Сбор материала производят на 2 чашки с питательной средой. Во время приступа кашля левой рукой снимают крышку чашки, а правой подносят ее ко рту на расстоянии 10-12см так, чтобы капельки слизи из дыхательных путей попали на поверхность среды. Чашку в таком положении держат некоторое время (в течение 6-8 кашлевых толчков).
При транспортировке следует оберегать материал от прямых солнечных лучей, сохраняя его в температурных пределах от +410 до 370С.
Основной метод исследования – бактериологический.
День исследования.
Росту возбудителя коклюша препятствуют накапливающиеся в среде жирные кислоты, ингибирующие их рост. Поэтому в культуральные среды вносят адсорбенты — активированный уголь, крахмал, альбумин и др. Для подавления сопутствующей микрофлоры к средам добавляют антибиотики (пенициллин либо один из цефалоспоринов). В качестве питательной среды для посева исследуемого материала применяют среды, содержащие кровь: картофельно-глицериновый агар (среда Борде-Жангу) и молочно-кровяной агар или среды без крови: казеиново-угольный агар (КУА). Для получения изолированных колоний, посев материала производят путем тщательного втирания его тампоном вначале по периферии среды чашки Петри в виде 4-5 площадок, а затем Z-штрихом в центре чашки.
Стерильным шпателем растирают центральные части посева, не касаясь площадок.
день исследования (3 сутки, 72 часа).
Просматривают при помощи бинокулярного стереоскопического микроскопа посевы на чашках с питательной средой с целью отбора подозрительных колоний микробов рода бордетелла.
Колонии микробов рода бордетелла при росте на плотных питательных средах выпуклые, влажные, гладкие, блестящие с ровными краями, серовато-кремового цвета с голубоватым жемчужным или беловатым оттенком, напоминающие капельки ртути или жемчужины. При просмотре колоний в стереоскопическом микроскопе можно наблюдать узкий луч света («хвостик») отходящий от ее центра.
Сроки появления колоний различны: паракоклюшного микроба – ч/з 24-48 часов, коклюшного ч/з 48-72 часа. Это отражается на величине колоний при просмотре их через 72 часа.
Рост коклюшного микроба на питательной среде не сопровождается изменениями ее цвета. Паракоклюшные микробы на среде КУА вызывают диффузное окрашивание среды в буровато-коричневый цвет за счёт активности тирозиназы.
|
|
|
При наличии на среде выращивания подозрительных колоний производят выделение чистой культуры, путем отсева их на скошенный КУА, либо на чашку со средой КУА, разделенную на сектора.
После выделения чистой культуры, из оставшихся колоний делают мазки, определяют морфологию культуры при окраске по Граму.
|
|
|
