 |
Оценка координации движений
|
|
|
|
Координацию движений крыс оценивали в тесте вращающегося стержня. Крыс помещали на горизонтальный стержень диаметром 4 см, вращающийся со скоростью 3 об/мин. Неспособность животных удерживать равновесие на стержне в течение трёх минут рассматривали как проявление нарушения координации движений [192, 202].
2.6 Методика условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ)
Данная модель предназначена для изучения процессов связанных с воспроизведением памятного следа. Оценку антиамнестического эффекта проводили по измерению латентного периода захода животного в тёмный отсек при воспроизведении навыка УРПИ. Выработку условной реакции пассивного избегания затемнённого отсека производили в экспериментальной камере, которая состояла из двух смежных отсеков, большого освещенного 60 на 60 см, и малого затемнённого (15х15см), снабжённого электродным полом.
Отсеки сообщались между собой с помощью четырёхугольного отверстия (8х8см). Крысу помещали на середину площадки светлого отсека, хвостом к тёмному отсеку и в течение трёх минут регистрировали латентный период первого захода в тёмный отсек. Животных, не заходивших в тёмную камеру, по истечение трёх минут из опыта исключали.
В тёмном отсеке животное получало через электрический пол однократное электроболевое раздражение электрическим током (40 в), состоящее из трёх импульсов длительностью 1 сек, следующих с интервалом 0,5 сек. Крыса считалась обученной, если в течение 30 сек после сеанса обучения она не заходила в тёмный отсек экспериментальной камеры. Тест на воспроизведение УРПИ осуществляли через 24 часа после обучения при повторном помещении животных в светлый отсек камеры и регистрации в течение трёх минут латентного периода первого захода в тёмный отсек, количества заходов и общего времени пребывания в тёмном отсеке. В модификации Буреш, Бурешова выработку условной реакции пассивного избегания затемнённого отсека также производили однократным электроболевым раздражением электрическим током (40 в), состоящим из 12 импульсов длительностью 1 сек, следующих с интервалом 5 сек. в течение минуты. Модификация Буреш, Бурешова позволяет судить о влияния исследуемых соединений на процесс фиксации обучения и консолидацию памяти (переход кратковременной памяти в долговременную) поскольку обучение проводили после ишемии, а также о степени неврологических нарушений, животных перенесших тотальную ишемию мозга, т.к. способ обучения не требует абсолютной выработки рефлекса избегания [192, 203].
|
|
|
2.7 Методы изучения противогипоксической активности
Для создания патологического фона, на котором изучалась эффективность исследуемых соединений, использовались различные модели циркуляторных гипоксий.
Нормобарическая гипоксия с гиперкапнией (т.н. «баночная гипоксия») является наиболее простым методом оценки антигипоксической активности. Животных одинакового веса (разброс не более 2 г на группу) помещали в герметически закрытые (крышки смазывали вазелином) банки 750 см3. Во всех случаях регистрировали время выживания (смерти) животных [202].
Циркуляторную гипоксию воспроизводили путём перевязки двух передних общих сонных артерий. Операция проводилась в асептических условиях с использованием наркоза хлоралгидрат, внутрибрюшинно, 300 мг/кг массы тела. За оперированными животными наблюдали в течение 3 суток с регистрацией числа выживших животных в опыте и контроле [192].
Следующую модель ишемии мозга создавали критическими гравитационными перегрузками в кранио-каудальном положении животных. Известно, что продольные гравитационные перегрузки, создаваемые центрифугой, вызывают нарушения кровоснабжения головного мозга, степень и характер которых зависит от величины и вектора ускорения.
|
|
|
Крысы помещались в отдельные продольные ячейки, объём ячеек соответствовал размеру животных и не давал возможности самопроизвольно отклоняться от заданного вектора ускорения.
Центрифуга представляет собой мотор с приводом установленный на станине. К приводу сверху крепится коромысло длиной 2,0 м, по краям которого расположены камеры для животных. Также имеется пульт управления, позволяющий контролировать число оборотов, градиент нарастания и спада перегрузок [204].
2.8 Методика воспроизведения постишемических цереброваскулярных феноменов
Для оценки действия исследуемых препаратов на динамику развития постишемических цереброваскулярных феноменов воспроизводили ишемию мозга путем двухсторонней окклюзии сонных артерий в течение 10-12 мин. при снижении САД до 40 мм рт.ст. После ишемии и реинфузии крови в артериальную систему животного осуществляли регистрацию скорости МК методом клиренса водорода [10, 30, 59, 194, 195].
2.9 Условия экспериментальных исследований
Экспериментальные исследования проведены на 236 крысах массой 200 -250 г обоего пола и 154 белых мышах массой 20-25г обоего пола. Исследовали неорганические производные селена: селенит натрия, селенит цинка.
В связи с тем, что селенит натрия и селенит цинка легкорастворим в воде в экспериментах использовали водные растворы. Растворы веществ готовили добавлением при перемешивании физиологического раствора (0,9% раствор натрия хлорида).
2.10 Статистическая обработка данных
В таблицах диссертации данные представлены в виде средних арифметических и ошибки среднеквадратичного отклонения. Исходные данные приведены в абсолютных значениях, а изменения, которые произошли после введения препаратов, приведены в процентном отношении к исходным показателям. Статистическую обработку полученных результатов производили по критерию Стьюдента [192]. Различия считались достоверными при уровне значимости р<0,05, р<0,01 для парных выборок по критерию Стьюдента.
|
|
|
ГЛАВА 3 ВЛИЯНИЕ СЕЛЕНИТА НАТРИЯ И СЕЛЕНИТА ЦИНКА НА ЦЕРЕБРАЛЬНУЮ ГЕМОДИНАМИКУ, СИСТЕМНОЕ АРТЕРИАЛЬНОЕ ДАВЛЕНИЕ И ЧАСТОТУ СЕРДЕЧНЫХ СОКРАЩЕНИЙ УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ НОРМЫ
Острые опыты проведены на 90 мышах массой 20 – 22 г и 48 крысах массой 200 – 250 г. Регистрацию объёмной скорости мозгового кровотока осуществляли методом водородного клиренса. Системное артериальное давление и частоту сердечных сокращений у бодрствующих животных проводили с использованием одноразовых датчиков SP-01 (США) и компьютерной программы Bioshell. Исследуемые вещества вводили в дозах 30, 50, 100 мкг/кг внутрибрюшинно.
3.1 Изучение острой токсичности исследуемых соединений
Определение острой токсичности селенита натрия, селенита цинка и расчёты LD50 проводили по методу Кербера. Белым мышам (90 особей) массой 20-22 г, обоего пола селенит натрия и селенит цинка вводили в 0,5 мл изотонического раствора внутрибрюшинно в дозах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 мг/кг. Наблюдение за поведением и состоянием подопытных животных проводилось в течение 7 суток, при этом отмечали изменение внешнего вида, поведенческих реакций и количество погибших животных. Контрольной группе животных (10 особей) вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме.
LD50 рассчитывали по формуле:
LD50 = LD100 – Σ (Z*D)/m, где
Σ – сумма.
Z – половина суммы числа животных павших от двух последующих доз;
D – интервал между каждыми двумя последующими дозами;
m – число животных на каждую дозу;
За время наблюдения в контрольной группе не погибло ни одного животного, а также не наблюдалось особых изменений во внешнем виде и поведении мышей.
В опытных группах количество погибших животных в зависимости от дозы приведено в таблицах 1 и 2.
Таблица 1 – Влияние различных доз селенита натрия на выживаемость животных
| Доза селенита натрия мг/кг | Общее число животных в группе | Число павших животных | Z | D | Z*D |
| 1 | 6 | 0 | - | - | - |
| 2 | 6 | 0 | 0 | 1 | 0 |
| 3 | 6 | 2 | 1 | 1 | 1 |
| 4 | 6 | 3 | 3.5 | 1 | 3.5 |
| 5 | 6 | 3 | 4.5 | 1 | 4.5 |
| 6 | 6 | 5 | 5.5 | 1 | 5.5 |
| 7 | 6 | 5 | 7.5 | 1 | 7.5 |
| 8 | 6 | 6 | 8 | 1 | 8 |
|
|
|
Отсюда LD50 составила:
LD50 = 8 – (1,0+3,5+4,5+5,5+7,5+8,0) / 6 = 3 мг/кг
Результаты проведённых исследований показали, что согласно требованиям табуляции классов токсичности селенит натрия относится ко второму классу токсичности. LD50 составила 3 мг/кг.
Таблица 2 - Влияние различных доз селенита цинка на выживаемость животных
| Доза селенита натрия мг/кг | Общее число животных в группе | Число павших животных | Z | D | Z*D |
| 1 | 6 | 0 | - | - | - |
| 2 | 6 | 0 | 0 | 1 | 0 |
| 3 | 6 | 0 | 0 | 1 | 0 |
| 4 | 6 | 2 | 1 | 1 | 1 |
| 5 | 6 | 4 | 4 | 1 | 4 |
| 6 | 6 | 4 | 6 | 1 | 6 |
| 7 | 6 | 5 | 6.5 | 1 | 6.5 |
| 8 | 6 | 6 | 8 | 1 | 8 |
Отсюда LD50 составила:
LD50 = 8 – (1,0+4,0+6,0+6,5+8,0) / 6 = 3,75 мг/кг
Результаты проведённых исследований показали, что согласно требованиям табуляции классов токсичности селенит цинка относится ко второму классу токсичности. LD50 составила 3,75мг/кг.
3.2 Влияние селенита натрия и селенита цинка на мозговой кровоток
Эксперименты проведены на 40 белых беспородных крысах, выращенных в стандартных условиях вивария, массой 200,0-230,0 г. В качестве наркоза использовали хлоралгидрат в дозе 300 мг/кг. Вещества вводили внутрибрюшинно, однократно, в виде изотонического раствора в дозах 100, 50 и 30 мкг/кг. МК регистрировали методом водородного клиренса. Полученные результаты сравнивали с исходными значениями МК.
Внутрибрюшинное введение селенита натрия в дозе 30 мкг/кг (6 опытов) вызывало достоверное снижение МК с первых минут эксперимента. Так, на 5 минуте наблюдения степень снижение МК составила 25%, а на 15 минуте - 41,2% по отношению к исходному уровню. В дальнейшем МК продолжал снижаться и на 60 минуте был ниже исходного уровня на 53,7±15,8% (таблица 3).
Таблица 3 - Динамика изменения скорости мозгового кровотока (МК) у белых крыс при введении селенита натрия в дозе 30 мкг/кг, (M±m, n=6, D%)
| Исходные данные | МК мл/100г/мин 153,0±66,3 |
| Время после введения физиологического раствора | % от исходных данных |
| Через 5 мин | -25,0±19,4* |
| 15 мин | -41,2±17,1* |
| 30 мин | -46,0±10,6* |
| 45 мин | -52,1±13,7* |
| 60 мин | -53,7±15,8* |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * р≤0,05
Аналогично изменялся МК после введения селенита натрия в дозе 50 мкг/кг (6 опытов), однако степень его снижения была менее выраженной. На 5 минуте наблюдения МК был ниже исходного уровня на 28,1±13,1%, а к концу наблюдения – на 41,3±10,5% (таблица 4).
Таблица 4 - Динамика изменения скорости мозгового кровотока (МК) у белых крыс при введении селенита натрия в дозе 50 мкг/кг, (M±m, n=6, D%)
| Исходные данные | МК мл/100г/мин 114,4±30,4 |
| Время после введения физиологического раствора | % от исходных данных |
| Через 5 мин | -28,1±13,1* |
| 15 мин | -28,4±13,7 |
| 30 мин | -25,3±24,6 |
| 45 мин | -32,0±8,1* |
| 60 мин | -41,3±10,5* |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * р≤0,05
|
|
|
При введении селенита натрия в дозе 100 мкг/кг (8 опытов) эффект также наступал с первых минут наблюдения, при этом снижение МК было достоверно ниже чем при введении селенита натрия в дозах 30 и 50 мкг/кг. Так, в ранние сроки наблюдения мозговой кровоток уменьшался незначительно (на 6-14%). К концу экспериментов на 60 минуте МК был меньше исходного уровня на 20,5±12,7% (таблица 5).
Таблица 5 - Динамика изменения скорости мозгового кровотока (МК) у белых крыс при введении селенита натрия в дозе 100 мкг/кг, (M±m, n=8, D%)
| Исходные данные | МК мл/100г/мин 184,6±59,6 |
| Время после введения физиологического раствора | % от исходных данных |
| Через 5 мин | -6,6±4,6* |
| 15 мин | -13,4±6,6* |
| 30 мин | -16,2±15,9 |
| 45 мин | -22,0±11,1* |
| 60 мин | -20,5±12,7* |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * р≤0,05
Суммарные результаты опытов представлены на рисунке 1.
Рисунок 1 - Динамика изменения МК у белых крыс при введении селенита натрия в дозах 30 мкг/кг, 50 мкг/кг, 100 мкг/кг
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * р≤0,05
По оси абсцисс – время наблюдения в минутах; по оси ординат – изменение мозгового кровотока в процентах от исходного уровня
Внутрибрюшинное введение селенита цинка в дозе 30 мкг/кг (6 опытов) вызывало достоверное снижение МК с первых минут эксперимента. Так, на 5 минуте наблюдения степень снижения МК составила 18,3%, по отношению к исходному уровню. В дальнейшем МК также сохранял тенденцию к снижению. К 30 минуте наблюдения МК был ниже исходного уровня в среднем на 39,8%. К 45 минуте МК опытных животных стабилизировался. Снижение по отношению к исходному уровню составило 38,6%. На 60 минуте наблюдения МК остался ниже исходного уровня на 39,9% (таблица 6).
Таблица 6 - Динамика изменения скорости мозгового кровотока (МК) у белых крыс при введении селенита цинка в дозе 30 мкг/кг, (M±m, n=6, D%)
| Исходные данные | МК мл/100г/мин 149,9±27,1 |
| Время после введения физиологического раствора | % от исходных данных |
| Через 5 мин | -18,3±17,3* |
| 15 мин | -24,3±10,9* |
| 30 мин | -39,8±9,8* |
| 45 мин | -38,6±15,3* |
| 60 мин | -39,9±22,2* |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * р≤0,05
В опытах с внутрибрюшинным введением селенита цинка в дозе 50 мкг/кг также отмечалась тенденция к снижению МК. Однако достоверно МК снижался только на 45 минуте, степень его снижения составила в среднем 38,2% (таблица 7).
Таблица 7 - Динамика изменения скорости мозгового кровотока (МК) у белых крыс при введении селенита цинка в дозе 50 мкг/кг, (M±m, n=6, D%)
| Исходные данные | МК мл/100г/мин 86,7±19,1 |
| Время после введения физиологического раствора | % от исходных данных |
| Через 5 мин | -14,6±22,4 |
| 15 мин | -29,5±21,2 |
| 30 мин | -32,1±27,2 |
| 45 мин | -38,2±21,5* |
| 60 мин | -39,8±27,5 |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * р≤0,05
При введении селенита цинка в дозе 100 мкг/кг (8 опытов) выраженный вазоконстрикторный эффект наступал с первых минут наблюдения, при этом степень снижения МК к концу наблюдения была ниже, чем при введении селенита цинка в дозах 30 и 50 мкг/кг. Так, на 5 минуте наблюдения отмечалось достоверное снижение МК на 24,0±18,3%. Наиболее выраженная вазоконстрикторная реакция наблюдалась на 15 минуте, когда МК был в среднем на 30,7% ниже исходного уровня. В дальнейшем величина МК не изменялась (таблица 8).
Таблица 8 - Динамика изменения скорости мозгового кровотока (МК) у белых крыс при введении селенита цинка в дозе 100 мкг/кг, (M±m, n=8, D%)
| Исходные данные | МК мл/100г/мин 101,2±22,3 |
| Время после введения физиологического раствора | % от исходных данных |
| Через 5 мин | -24,0±18,3* |
| 15 мин | -30,7±17,1* |
| 30 мин | -29,1±13,2* |
| 45 мин | -25,4±17,3* |
| 60 мин | -27,4±15,0* |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * р≤0,05
Данные о влиянии различных доз селенита цинка на мозговой кровоток представлены на рисунке 2.
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * - р≤0,05
По оси абсцисс – время наблюдения в минутах; по оси ординат – изменение мозгового кровотока в процентах от исходного уровня
Рисунок 2 - Динамика изменения МК у белых крыс при введении селенита цинка в дозах 30мкг/кг, 50 мкг/кг, 100 мкг/кг
3.3 Влияние селенита натрия и селенита цинка на артериальное давление и частоту сердечных сокращений у бодрствующих крыс
Известно, что снижение уровня артериального давления, а следовательно, и перфузионнного давления у больных с ишемическим инсультом, вызывает дальнейшее ухудшение ишемизированных областей мозга. Поэтому нейропротекторы не должны обладать выраженным гипотензивным эффектом и не вызывать существенного изменения ЧСС. В связи с этим следующим этапом нашей работы было изучение влияния исследуемых веществ на САД и ЧСС.
Эксперименты проведены на 12 бодрствующих нормотензивных крысах обоего пола, массой 220 - 250г. Предварительно за 24 - 48 часов до начала эксперимента под хлоралгидратным наркозом (300 мг/кг, внутрибрюшинно) имплантировали полиэтиленовый катетер в сонную артерию. Регистрацию данных у бодрствующих крыс производили с использованием одноразовых датчиков SP-01 (США) и компьютерной программы “Bioshell 1.00” в реальном масштабе времени на базе персонального компьютера IBM AT 486 [202]. Длительность регистрации показателей составляла 60 минут с момента введения исследуемого вещества. Исследуемые соединения вводили внутрибрюшинно, однократно в дозе 100 мкг/кг, поскольку в этой дозе в меньшей степени снижался мозговой кровоток.
Внутрибрюшинное введение селенита натрия и селенита цинка в дозе 100 мкг/кг (6 опытов) не вызывало достоверного изменения АД по сравнению с исходным уровнем у бодрствующих животных в течение всего срока наблюдения. Однако необходимо отметить, что при введении селенита натрия отмечалась некоторая тенденция к снижению АД на 6%, а при введении селенита цинка - незначительное увеличение АД в среднем на 6%.
Результаты экспериментов представлены на рисунке 3 и в таблицах 9, 10.
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * - р≤0,05
По оси абсцисс – время наблюдения в минутах; по оси ординат – артериального давления в процентах от исходного уровня
Рисунок 3 – Влияние селенита натрия и селенита цинка (100 мкг/кг) на системное АД у бодрствующих крыс (M±m, n=6, D%)
Таблица 9 - Динамика изменения АД у белых крыс при введении селенита натрия в дозе 100 мкг/кг, (M±m, n=6, D%) в бодрствующем состоянии
| Исходные данные мм. рт. ст. | 108,7±13,6 | |
| Время после введения вещества | % от исходных данных | Абсолютные значения |
| Через 5 мин | 1,2±6,7 | 110,0±18,6 |
| 10 мин | 0,0±5,7 | 108,7±24,1 |
| 15 мин | -1,1±5,9 | 107,5±27,6 |
| 20 мин | -2,3±7,1 | 106,2±21,1 |
| 25 мин | -4,2±6,9 | 104,2±20,7 |
| 30 мин | -4,0±7,3 | 104,3±24,2 |
| 35 мин | -2,8±7,6 | 105,7±30,1 |
| 40 мин | -3,4±9,5 | 105,0±26,8 |
| 45 мин | -5,1±10,8 | 103,2±20,1 |
| 50 мин | -6,0±11,6 | 102,2±22,9 |
| 55 мин | -7,1±11,6 | 101,0±18,1 |
| 60 мин | -6,0±13,8 | 102,2±18,5 |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, *- р≤0,05
Таблица 10 - Динамика изменения АД у белых крыс при введении селенита цинка в дозе 100 мкг/кг, (M±m, n=6, D%) в бодрствующем состоянии
| Исходные данные мм. рт. ст. | 92,0±20,8 | |
| Время после введения вещества | % от исходных данных | Абсолютные значения |
| Через 5 мин | 6,0±19,1 | 97,5±18,6 |
| 10 мин | 3,8±25,2 | 95,5±24,1 |
| 15 мин | 4,0±28,9 | 95,7±27,6 |
| 20 мин | 5,4±21,7 | 97,0±21,1 |
| 25 мин | 7,2±20,9 | 98,7±20,7 |
| 30 мин | 0,4±26,2 | 92,3±24,2 |
| 35 мин | 0,5±32,6 | 92,5±30,1 |
| 40 мин | -4,2±30,4 | 88,2±26,8 |
| 45 мин | 4,0±21,0 | 95,7±20,1 |
| 50 мин | 1,3±24,6 | 93,2±22,9 |
| 55 мин | 8,9±18,0 | 100,2±18,1 |
| 60 мин | 6,3±19,0 | 97,8±18,5 |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * - р≤0,05
Внутрибрюшинное введение селенита натрия и селенита цинка в дозе 100 мкг/кг (6 опытов) не вызывало достоверного изменения ЧСС по сравнению с исходным уровнем у бодрствующих животных в течение всего срока наблюдения. Однако необходимо отметить, что при введении селенитов отмечалась тенденция к некоторому увеличению ЧСС в среднем на 6%.
Результаты экспериментов представлены в таблицах 11, 12.
Таблица 11 - Динамика изменения ЧСС у белых бодрствующих крыс при введении селенита натрия в дозе 100 мкг/кг, (M±m, n=6, D%)
| Исходные данные уд/мин | 392,3±39,5 | |
| Время после введения вещества | % от исходных данных | Абсолютные значения |
| Через 5 мин | 2,1±11,2 | 400,5±45,0 |
| 10 мин | 2,6±11,0 | 402,3±44,1 |
| 15 мин | 1,3±10,6 | 397,5±42,1 |
| 20 мин | 5,7±10,3 | 414,7±42,8 |
| 25 мин | 4,6±9,8 | 410,5±40,4 |
| 30 мин | 6,1±11,1 | 416,2±46,0 |
| 35 мин | 5,1±10,9 | 412,3±44,9 |
| 40 мин | 3,3±10,4 | 405,2±42,2 |
| 45 мин | 4,3±9,9 | 409,0±40,4 |
| 50 мин | 4,0±10,2 | 408,2±41,7 |
| 55 мин | 5,0±9,2 | 411,8±37,8 |
| 60 мин | 2,8±10,6 | 403,3±42,7 |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * - р≤0,05
Таблица 12 - Динамика изменения ЧСС у белых бодрствующих крыс при введении селенита цинка в дозе 100 мкг/кг, (M±m, n=6, D%)
| Исходные данные уд/мин | 363,0±52,3 | |
| Время после введения вещества | % от исходных данных | Абсолютные значения |
| Через 5 мин | 4,5±11,9 | 379,5±45,1 |
| 10 мин | 6,9±12,6 | 388,0±49,1 |
| 15 мин | 8,2±10,1 | 392,8±39,7 |
| 20 мин | 5,7±6,6 | 383,8±25,3 |
| 25 мин | 11,0±12,6 | 402,8±50,8 |
| 30 мин | 5,6±15,9 | 383,3±60,9 |
| 35 мин | 0,4±18,7 | 364,5±68,2 |
| 40 мин | 2,2±15,2 | 370,8±56,2 |
| 45 мин | 5,9±13,4 | 384,3±51,3 |
| 50 мин | 4,0±11,8 | 377,7±44,4 |
| 55 мин | 3,9±5,7 | 377,2±21,5 |
| 60 мин | 6,1±7,4 | 385,0±28,7 |
Примечание - достоверно относительно исходных данных, * - р≤0,05
Выводы по главе 3:
1. Результаты изучения острой токсичности показали, что селенит натрия при введении в брюшную полость по К.К. Сидорову относится ко второму классу токсичности.
2. Селенит цинка по классификации токсичности веществ при введении в брюшную полость по К.К. Сидорову относится ко второму классу токсичности.
3. Селенит натрия и селенит цинка в дозах 30 мкг/кг, 50 мкг/кг и 100 мкг/кг достоверно снижают уровень МК у наркотизированных интактных крыс. С увеличением дозы исследуемых соединений степень снижения МК уменьшается.
4. Селенит натрия и селенит цинка не оказывают существенного влияния на АД и ЧСС бодрствующих белых крыс в дозе 100 мкг/кг.
ГЛАВА 4 ВЛИЯНИЕ СЕЛЕНИТА НАТРИЯ И СЕЛЕНИТА ЦИНКА НА ПСИХОНЕВРОЛОГИЧЕСКИЙ СТАТУС ЖИВОТНЫХ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ НОРМЫ
Одним из проявлений сосудистой патологии мозга является нарушение психоневрологического статуса. Для его восстановления используют ноотропные препараты. Однако вещества применяемые в настоящее время для лечения неврологического дефицита, имеют ряд ограничений и недостатков. Поэтому весьма актуальным представляется изучить вопрос о возможности коррекции нарушений поведения, памяти, эмоционального статуса, тревожных расстройств с помощью селенита натрия и селенита цинка. На первом этапе исследования изучали ориентировочно-исследовательскую, двигательную и эмоциональную активность, мнестические функции и координацию движений у интактных животных.
4.1 Изучение влияния селенита натрия и селенита цинка на познавательную, двигательную и эмоциональную активность
Опыты выполнены на 18 белых крысах обоего пола массой 200 – 250 г. Селенит натрия и селенит цинка вводили в виде изотонического раствора внутрибрюшинно за 50 - 60 минут до проведения эксперимента в дозе 100 мкг/кг. В контрольных опытах, в тех же условиях, вводили физиологический раствор. В каждой группе животных проводилось тестирование психоневрологического статуса. В течение 3-х минут пребывания крысы в «открытом поле» регистрировали двигательную активность (число пересечённых секторов), ориентировочно-исследовательскую активность (вставание на задние лапы) и эмоциональный статус (количество стереотипных движений – груминг, фекальных болюсов).
Исследование проводили на 2, 4 и затем на 7 сутки после первой инъекции исследуемых веществ. Это позволило следить за динамикой изменений психоневрологического статуса ишемизированных животных. Эсперименталь-ные данные статически обработаны и представлены в таблицах 13 – 15.
Таблица 13 – Показатели психоневрологического статуса животных в контрольной серии опытов
| Время эксперимента (сутки) | Исследуемые вещества | Кол-во пройденных секторов | Кол-во стоек | Дефекация | Число уринаций | Груминг | Кол-во пройденных центральных секторов |
| 2 день | контроль | 16,0 ± 1,6 | 6,8 ± 1,2 | 3,7 ± 1,4 | 0,3 ± 0,3 | 0,5 ± 0,5 | 0,7 ± 0,3 |
| 4 день | контроль | 13,5 ± 2,4 | 4,3 ± 1,0 | 2,0 ± 1,4 | 0,5 ± 0,3 | 1,8 ± 0,5 | 0,3 ± 0,3 |
| 7 день | контроль | 15,7 ± 2,0 | 6,8 ± 1,1 | 1,5 ± 1,0 | 0,0 ± 0,0 | 1,7 ± 0,6 | 0,7 ± 0,2 |
Таблица 14 – Показатели психоневрологического статуса в группе животных с предварительным введением селенита натрия в дозе 100 мкг/кг
| Время эксперимента (сутки) | Исследуемые вещества | Кол-во пройденных секторов | Кол-во стоек | Дефекация | Число уринаций | Груминг | Кол-во пройденных центральных секторов |
| 2 день | Селенит натрия | 15,7 ± 1,2 | 5,2 ± 0,6 | 2,7 ± 0,6 | 0,5 ± 0,3 | 1,0 ± 0,4 | 0,3 ± 0,2 |
| 4 день | Селенит натрия | 14,8 ± 1,2 | 4,7 ± 1,1 | 2,5 ± 0,8 | 0,3 ± 0,2 | 0,8 ± 0,4 | 0,5 ± 0,3 |
| 7 день | Селенит натрия | 16,2 ± 1,1 | 5,7 ± 0,9 | 1,8 ± 0,7 | 0,3 ± 0,2 | 1,3 ± 0,6 | 0,3 ± 0,2 |
Примечание - достоверно относительно контрольных данных, * р≤0,05
Таблица 15 – Показатели психоневрологического статуса животных с предварительным введением селенита цинка в дозе 100 мкг/кг
| Время эксперимента (сутки) | Исследуемые вещества | Кол-во пройденных секторов | Кол-во стоек | Дефекация | Число уринаций | Груминг | Кол-во пройденных центральных секторов |
| 2 день | Селенит цинка | 15,8 ± 1,6 | 7,0 ± 0,9 | 3,3 ± 0,6 | 0,8 ± 0,3 | 1,5 ± 0,6 | 0,7 ± 0,4 |
| 4 день | Селенит цинка | 15,0 ± 1,9 | 4,5 ± 1,0 | 2,3 ± 0,8 | 0,5 ± 0,3 | 1,2 ± 0,5 | 0,7 ± 0,3 |
| 7 день | Селенит цинка | 16,0 ± 2,1 | 6,3 ± 0,8 | 2,0 ± 0,6 | 0,2 ± 0,2 | 0,8 ± 0,3 | 0,7 ± 0,3 |
Примечание - достоверно относительно контрольных данных, * р≤0,05
Результаты проведённых исследований не выявили существенных отличий между данными контрольной серии опытов и в тестах с предварительным введением селенита натрия и селенита цинка. В динамике изменений во всех экспериментальных группах отмечается тенденция к снижению уровня эмоциональной тревожности, при этом уровень двигательной и познавательной активности варьировал незначительно, однако также несколько снижался. Данный эффект по-видимому связан с привыканием животных к обстановке эксперимента.
4.2 Изучение влияния исследуемых соединений на процессы памяти и обучения
Опыты проведены на 18 белых крысах обоего пола массой 200 – 250 г. Селенит натрия и селенит цинка вводили внутрибрюшинно за 50 - 60 минут до проведения эксперимента в дозе 100 мкг/кг. В контрольных опытах в тех же условиях вводили физиологический раствор. Обучение животных проводили за 24 часа до первой инъекции исследуемых веществ. В каждой группе из 6 животных проводили тест на воспроизведение УРПИ. При помещении животных в экспериментальную установку регистрировали латентный период захода (ЛПЗ) крысы в тёмную камеру и время пребывания в этой камере в течение 3 минут. Для изучения влияния селенита натрия и селенита цинка на мнестические функции в динамике исследование проводили на 2, 4 и затем на 7 сутки после первой инъекции исследуемых веществ. Полученные экспериментальные данные статически обработаны и представлены в таблицах 16 и 17.
Таблица 16 – Оценка ЛПЗ у белых крыс
| Исследуемые вещества | Дозы, мкг/кг | Кол-во животных | Латентный период первого захода крыс в тёмный отсек в сек. | ||
| 2 день | 4 день | 7 день | |||
| Физ. раствор | 6 | 128,3±21,7 | 115,0±18,3 | 120,8±15,8 | |
| Селенит натрия | 100 | 6 | 122,5±20,0 | 117,5±28,3 | 124,2±37,2 |
| Селенит цинка | 100 | 6 | 119,2±22,8 | 120,2±17,5 | 117,5±25,8 |
Примечание - достоверно относительно контрольных данных, * р≤0,05
Таблица 17 – Оценка времени пребывания белых крыс в тёмном отсеке
| Исследуемые вещества | Дозы, мкг/кг | Кол-во животных | Время пребывания крыс в тёмном отсеке в сек. | ||
| 2 день | 4 день | 7 день | |||
| Физ. раствор | 6 | 19,2±7,5 | 20,8±7,8 | 16,7±8,3 | |
| Селенит натрия | 100 | 6 | 18,3±8,3 | 20,0±11,7 | 15,0±11,7 |
| Селенит цинка | 100 | 6 | 20,0±11,7 | 20,8±11,1 | 17,5±10,0 |
Примечание - достоверно относительно контрольных данных, * р≤0,05
Полученные результаты свидетельствуют о том, что исследуемые соединения в условиях экспериментальной нормы не оказывают существенного влияния на процессы памяти и обучения белых крыс.
4.3 Влияние селенита натрия и селенита цинка на координацию движений
В эксперименте были использованы белые крысы обоего пола массой 200 – 250 г. Селенит натрия и селенит цинка вводили внутрибрюшинно в дозе 100 мкг/кг за 60 минут до проведения эксперимента. В контрольных опытах в тех же условиях вводили физиологический раствор. В каждой группе животных проводилась оценка координации движений.
Крыс помещали на горизонтальный стержень диаметром 4 см, вращающийся со скоростью 3 об/мин. Неспособность животных удерживать равновесие на стержне в течение трёх минут рассматривали как проявление нарушения координации движений. Для изучения координации движений в динамике исследование проводили на 2, 4 и затем на 7 сутки после первой инъекции исследуемых веществ.
Полученные экспериментальные данные статически обработаны и представлены в таблице 18.
Таблица 18 – Влияние селенита натрия и селенита цинка (100 мкг/кг) на координацию движений белых крыс
| Исследуемые вещества | Дозы, мкг/кг | Кол-во животных | Кол-во животных оставшихся на стержне | |||||
| 2 день | 4 день | 7 день | ||||||
| Абс. | % | Абс. | % | Абс. | % | |||
| Физ. раствор | 8 | 4 | 50,0 | 5 | 62,5 | 5 | 62,5 | |
| Селенит натрия | 100 | 8 | 5 | 62,5 | 6 | 75,0 | 6 | 75,0 |
| Селенит цинка | 100 | 8 | 4 | 50,0 | 5 | 62,5 | 5 | 62,5 |
Примечание - достоверно относительно контрольных данных, * р≤0,05
|
|
|
