Больной Б., поступил в стационар со следующими клиническими признаками: температура тела нормальная, стул водянистый без запаха, напоминающий рисовый отвар, рвота, обезвоживание организма.

Билет № 7

1. Дать определение антибиотикам. Спектр действия антибиотиков.
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом дисков. Выполните данную методику (на ч. Петри № 9)
Ответ: антибиотики- это химические вещества, образуемые микроорганизмами, которые обладают способностью подавлять рост или даже разрушать бактерии и другие микроорганизмы.
-По спектру действия антибиотики разделяют на:
1.антибактериальные,
2.противогрибковые,
3.противоопухолевые.
Для каждого антибиотика характерен спектр действия:
1)широкий спектр действия- угнетают размножение как грамположительных так и грамотрицательных бактерий.
2)узкий спектр действия-угнетают размножение или грамположителых или грамотрицательных.

2. Фактор патогенности характерный для гонококков. Отличительные биохимические признаки гонококков. Объяснить на предложенном материале.
Ответ: факторы патогенностихарактерный для гонококков-Экзотоксины у гонококков не обнаружены. Основными факторами патогенности являются пили, с помощью которых гонококки осуществляют адгезию и колонизацию эпителиальных клеток слизистой оболочки мочеполовых путей, и освобождающийся при разрушении гонококков эндотоксин (липополисахарид).

3. Больной М., возраст 10 лет. Поступил в стационар со следующими клиническими симптомами: температура тела – 40 С, рвота, боли в животе, частый стул с примесью крови и слизи,тенезмы.
Назовите предполагаемую инфекцию и элективную среду для выращивания данного
возбудителя.
Ответ: Дизентерия-Вызывается заболевание бактериями из рода шигелл. Они представляют собой неподвижные грамотрицательные микроорганизмы, имеющие форму палочек.
Среда для выращивания- Эндо и Плоскирева.

 

Билет № 8

1. Классификация антибиотиков. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам. Оцените предложенную антибиограмму (ч. Петри №10).
Ответ:Классификация антибиотиков может быть основана на различных принципах: по источнику получения,механизму и спектру действия,способу получения
-по способу получения их делят на:
природные
синтетические
полусинтетические
- По направленности действия:
антибактериальные;
противогрибковые;
-противоопухолевые.
- По спектру действия:
препараты широкого спектра действия
препараты узкого спектра действия
чувствительность микроорганизмов к антибиотикам-По степени чувствительности к основным антибиотикам микробы подразделяются на чувствительные, умеренно чувствительные и устойчивые.

2. Понятие антигена, антитела. Реакция преципитации, ее применение. Постановка реакции. Вывод.
Ответ: Понятие антигена-Антигены – это сложные по структуре вещества (белки, полипептиды, сложные полисахариды), генетически чужеродные для организма, которые при попадании в организм вызывают активацию иммунной системы, так называемый иммунный ответ. Антигены находятся в тканях человека, животных и растений, а также в микробах и называются соответственно тканевыми и микробными антигенами. Понятие антигенность обозначает генетическую чужеродность.Микробные антигены используются как основа для приготовления вакцин.

-антитела называются сывороточные белки, образующиеся в ответ на действие антигена. Они относятся к сывороточным глобулинам, поэтому называются иммуноглобулины (Ig). Через них реализуется гуморальный тип иммунного ответа.
Реакция преципитации (РП) - это формирова­ние и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количес­твах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.
РП ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое рас­пространение получили разновидности РП в полужидком геле агара или агарозы: двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.
Механизм. Проводится с прозрачными коллоид­ными растворимыми антигенами, экстрагированными из патоло­гического материала, объектов внешней среды или чистых культур бактерий. В реакции используют прозрачные диагности­ческие преципитирующие сыворотки с высокими титрами анти­тел. За титр преципитирующей сыворотки принимают то наибольшее разведение антигена, которое при взаимодействии с иммун­ной сывороткой вызывает образование видимого преципитата — помутнение.

3. В микробиологическую лабораторию поступил материал -проба крови больного. При посеве на одну из сред была обнаружена культура гемофилов через сутки после инкубирования. Среда для выделения чистой культуры гемофилов. Поясните ответ. Условия необходимые для культивирования посевов для выделения гемофилов.
Ответ: среды- кровяной агар,шоколадный агар.
пояснение: Лучше всего гемофилы растут на средах с нагретой кровью (шоколадном агаре и кровяной агар), так как при нагревании из крови высвобождаются необходимые им ростовые факторы.

Билет №3

1.Гемолитические свойства бактерий (понятие гемолиза). Из предложенных материалов выберите колонии с гемолизом, определите морфологические свойства предложенной гемолитической культуры.
Ответ: Способность гемолизировать кровь, т.е. вызывать гемолиз (разрушение) эритроцитов.
Гемолиз- разрушение эритроцитов с выходом гемоглобина в окружающую эритроциты среду..

2.Дать определение «чистая культура». Используемые методики для выделения чистой культуры. Определить чистоту предложенной культуры (ч. Петри №4).
Ответ: Чистая культура-совокупность микробов одного вида или варианта, полученная из одного образца материала и содержащаяся в определенном объеме среды (напр., в пробирке).
Из существующих способов выделения чистых культур наибольшее признание получил классический метод Коха. Он заключается в том, что посевной материал наносят на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри. Клетки микроорганизмов прикрепляются к определенному участку поверхности и при размножении образуют видимые глазом скопления-колонии. Из отдельных изолированных колоний микробов проводят пересев на жидкую питательную среду и через определенный промежуток времени (характерный для каждого вида микроорганизмов) получают чистую культуру в достаточном объеме

3.Для биологической пробы на наличие туберкулезной палочки в патологическом материале взята морская свинка. Предварительно ей ввели в/к 0,1 мл туберкулина. На месте введения появилась гиперемия, инфильтрат. Возможно ли дальнейшее использование этого животного для пробы.
Ответ: Так как появился инфильтрат и гиперемия, то можно предположить положительную реакцию на туберкулез

Билет №4

1.Классификация питательных сред. Приготовить среду Гиса с глюкозой 50 мл. Цель использования этой среды.
Ответ:

1. По исходным компонентам:

-натуральные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения(мясо, костная и рыбная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др.)

-синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде.

2. По консистенции(степени плотности):

-жидкие

-полужидкие

-плотные

Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым прибавляют агар-агар или желатин. Кроме того, в качестве плотных сред применяют свёрнутую сыворотку крови, свёрнутые яйца, картофель, среды с селикагелем.Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.

3. По составу:

-простые: мясопептонный бульон(МПБ), мясопептонный агар(МПА),, питательный желатин,

-сложные — готовят прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества.

4. По назначению:

-основные — служат для культивирования большинства патогенных микробов. МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода.

-специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.

-элективные(избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся элективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH.Жидкие элективные среды называют средами накопления.

-дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности.

-консервирующие — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.

2. Оценить предложенный биохимический ряд и для определения вида семейства энтеробактерий (№1).

3. В микробиологическую лабораторию поступил материал- проба крови больного.
При посеве на среду видимого роста не было выявлено даже на 4 сутки. Количество крови более 10 мл для, обосновать. Время инкубирования в термостате посевов крови, если видимого роста не выявлено даже на 4 –сутки.
Ответ: Время инкубирование посевов крови в термостате должно составлять 7 дней. 4 дня мало, поэтому и нет видимого роста колоний.

Билет 5

1. Реакция преципитации, ее применение. Постановка реакции преципитации в агаре (используемые ингредиенты).

Ответ: Реакция преципитации (РП) - это формирова­ние и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количес­твах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса. Широкое рас­пространение получили разновидности РП в полужидком геле агара или агарозы: двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.
Механизм. Проводится с прозрачными коллоид­ными растворимыми антигенами, экстрагированными из патоло­гического материала, объектов внешней среды или чистых культур бактерий. В реакции используют прозрачные диагности­ческие преципитирующие сыворотки с высокими титрами анти­тел. За титр преципитирующей сыворотки принимают то наибольшее разведение антигена, которое при взаимодействии с иммун­ной сывороткой вызывает образование видимого преципитата — помутнение.

2. Фактор патогенности микроорганизмов определяющийся на кровяном агаре. Дайте его характеристику и укажите на предложенном материале.

Ответ:

Род УПЭ	Факторы и признаки патогенности
энтеротоксины	гемоли-зины	ДНК-аза	протеаза	лецитиназа	тест с конго рот	фосфатаза	адгезин
Escherichia	+	+	-	-	-	+	+	+
Klebsiella	+	х	+	х	х	+	+	+
Proteus	+	х	-	+	+	.	.	+
Citrobacter	+	-	+	-	-	+	+	+
Enterobacter	+	х	+	-	-	+	+	+
Serratia	+	+	+	-	-	+	х

3.Больная Иванова Т. жалуется на воспаление ушей, методика взятия материал из пораженного органа и подготовка его к исследованию

Ответ: материал из ушей - обнаружение возбудителей воспалительных заболеваний наружного, среднего и внутреннего уха. При поражении наружного уха, кожу уха обрабатывают 70 % спиртом, промывают физиологическим раствором, собирают отделяемое из очага на стерильный ватный тампон, помещают в пробирки. При поражении среднего и внутреннего уха исследуют пунктаты и материал, полученный во время оперативных вмешательств, собранный в стерильную посуду. Хранение материала в холодильнике не более 2-3 часов.

Про подготовку не знаю.

Билет 6

1.Культуральные свойства микроорганизмов. Понятие S и R форм колоний. Описать культуральные свойства 2-х предложенных колоний микроорганизмов
Ответ: Культуральные свойства бактерий
питательные потребности, условия роста и характер роста бактерий на бактериол. средах. В питательные потребности включают источники углерода, азота и ростовых факторов, способность бактерий расти на определенных питательных средах, в условия роста -рН,Eh, концентрацию О₂ плотность, осмотическое давление среды, температуру роста; в характер роста -скорость роста (быстрый, медленный), внешний вид к-ры на жидких, плотных и полужидких средах, изменения, к-рые наступают в среде или отдельных ее компонентах в процессе роста микробов.
Своеобразной формой изменчивости является R-S-диссоциация бактерий. Она возникает спонтанно вследствие образования двух форм бактериальных клеток, которые отличаются друг от друга по характеру образуемых ими колоний на твердой питательной среде.
Один тип - R-ко лонии (англ. rough - неровный) - характеризуется неровными краями и шероховатой поверхностью,
второй тип - S-колоний (англ. smooth- гладкий)- имеет круглую форму, гладкую поверхность. Процесс диссоциации, т.е. расщепления бактериальных клеток, формирующих оба типа колоний, обычно протекает в одном направлении: от S- к R-форме, иногда через промежуточные стадии образования слизистых колоний.
Обратный переход R- в S-форму наблюдается реже. Для большинства вирулентных бактерий характерен рост в виде S-формы колоний. Исключение составляют микобактерии туберкулеза, иерсинии чумы, сибиреязвенные бактерии и некоторые другие, которые растут в R-форме.

 

2.Классификация сред. Провести посев первичного материала шпателем на плотную питательную среду
Ответ: Искусственные питательные среды для бактерий. Искусственные среды разделяют на животные [например, мясопептонный агар (МПА) или мясопептонный бульон (МПБ)] и растительные (например, настои сена и соломы, отвары злаков, дрожжей или фруктов, пивное сусло и др.). Естественные среды для выращивания бактерий. Естественные питательные среды могут содержать компоненты животного (например, кровь, сыворотка, жёлчь) или растительного (например, кусочки овощей и фруктов) происхождения. По назначению выделяют консервирующие среды (для первичного посева и транспортировки), среды обогащения (для накопления определённой группы бактерий), среды для культивирования {универсальные простые, сложные специальные и для токсинообразования), среды дм выделения и накопления (консервирующие, обогащения и элективные) и среды для идентификации (дифференциальные и элективно-дифференциальные).

 

3.В микробиологическую лабораторию поступил материал – биоптат со слизистой желудка с клиническим диагнозом: яэвенный гастродуоденит. При посеве исследуемого материала была выделен - H. PYLORI.
Методы микробиологического исследования используемые для анализа данной пробы.
Методика взятия биоптата со слизистой желудка и 12 – перстной кишки.
Ответ:Методика - ЭГДС (Эзофагогастродуоденоскопия)
проводят в амбулаторных условиях. Перед исследованием пациент не должен принимать пищу и пить. Обычно осмотр длится 10-15 минут. Для того, чтобы пациента не тошнило при введении инструмента, перед процедурой его горло обрабатывают местным анестетиком. Во время ЭГДС пациент лежит на левом боку, врач обычно стоит напротив. Эзофагогастродуоденоскопы бывают разных размеров, они приспособлены и для осмотра детей.
ЭГДС - осмотр верхнего отдела желудочно-кишечного тракта с помощью эндоскопа - длинной тонкой гибкой трубки с объективом на конце. Врач тщательно исследует пищевод, желудок и двенадцатиперстную кишку. При необходимости он берет мазок или кусочек ткани (биопсия) для дальнейшего исследования.
Методы тоже не знаюL

Билет №15

1. Понятие «чистая культура», штамм, серовариант, фаговариант, хемовариант, биовариант. Методика выделения чистой культуры по Дригальскому.
Ответ: Чистая культура — совокупность микроорганизмов одного вида, имеющие одинаковые морфологические, биохимические и культуральные свойства.

Штамм — чистая культура вирусов, бактерий, других микроорганизмов или культура клеток, изолированная в определённое время и в определённом месте.

Серовариант — группа микроорганизмов одного вида, объединяемые общей антигенной структурой, определяемой серологическими методами диагностики.

Фаговариант — вариант определенного вида (подвида) бактерий, отличающийся отдругих вариантов этого же вида по спектру чувствительности к типовым фагам.

Хемовариант — инфраподвидовая систематическая категория для обозначенияштамма или группы штаммов бактерий, представители которой отличаются от типового штамма повышенным образованием какого-либо специфического химического вещества.

Биовариант - внутривидовая систематическая категория, вариант, отличающийся от др. вариантов этого вида какими-либо существенными биол. св-вами.
Метод Дригальского основан на механическом разобщение на поверхности плотной питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуе­мого материала.
I этап.
1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовле­ние мазка, окраска по Граму).
2. Посев в чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового мате­риала, засевают вторую и третью чашки.
3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С.
II этап.
1. Микроскопическое изучение колонки по величине, форме, окраске, ха­рактеру поверхности, краев, консистенции колонии.
2. Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовле­ние мазка, окраска по Граму).
3. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным ога-ром.
4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37° С. III этап.
Проверка культуры на чистоту (макроскопическим — однородный рост, микроскопическим- однородные по морфологическим признакам и тинкториальным признакам клетки). Идентификация проводится по:
- ферментативным свойствам.
- антигенным свойствам фагочувствительности токсигенности и другим признакам

2. Санитарно-показательные микроорганизмы.
Рассказать методику и произвести обор проб из распределительной сети системы городского водопровода.
Ответ:

3. В бактериологическую лабораторию поступил анализ – содержимое рвотных масс в пробирке с физиологическим раствором, при посеве на среду Эндо, выросли малиново – красные колонии с металлическим блеском. Скажите, достаточно описания культуральных свойств для определения вида микроорганизмов.
Ответ: Предположительно на среде Эндо выросли бактерии E. Coli. Если на среде Эндо вырастают колонии малиново-красного цвета с металлическим блеском, необходимо поставить пробную реакцию агглютинации на стекле для дифференциации ЭПКП от других разновидностей эшерихий. Только после РА даётся ответ.

Билет № 16

1. Особенности культивирования спирохет, риккетсий, вирусов.
Методика посева: петлей на скошенный агар, шпателем на ч.Петри.
Ответ: Спирохеты всех видов выращивают на искусственных питательных средах. Основой питательной среды является сыворотка крови кролика или лошади, как цельная, так и разведенная изотоническим раствором хлорида натрия в различных соотношениях. Иногда к сыворотке добавляют кусочки свернутого белка куриного яйца, почки или печени кролика, печени крупного рогатого скота, свежую цитратную кровь. Выращивание производят под слоем жидкого парафина или вазелина при рН среды 7,8—8,4. Оптимальная температура выращивания для трепонем 35°С, для лептоспир и боррелий 28—29°С.
Риккетсии культивируются в желточных мешках куриных эмбрионов, перевиваемых культурах клеток, легких белых мышей.

Для культивирования вирусов в лабораторных условиях используются следующие живые объекты:

1) культуры клеток (тканей, органов);

2) куриные эмбрионы;

3) лабораторные животные.

2. Реакция агглютинации ее использование. Произвести учет результатов реакции агглютинации объемным способом.
Ответ: Реакция агглютинации основана на специфическом взаимодействии антител (агглютининов) с целыми микробными или другими клетками. В результате такого взаимодействия образуются частицы-агломераты, выпадающие в осадок (агглютинат). В реакции агглютинации могут участвовать бактерии, простейшие, грибы, дрожжи, риккетсии, эритроциты и другие клетки, как живые, так и убитые. Протекает реакция в две фазы: первая — специфическое соединение антигена и антитела, вторая — кеспецифическая, т. е. образование видимого агглютината. Выпадение агглютината происходит в присутствии электролитов, например хлорида натрия. Находящиеся в агглютинате микроорганизмы остаются живыми, но теряют подвижность.
Реакцию агглютинации широко применяют для серо-логической диагностики инфекционных заболеваний и определения антигенной структуры выделенных микробов.

Учет начинают с контролей: контроль с-ки должен быть прозрачным, Аг - равномерно мутным (после встряхивания пробирки). Если контроли хорошие, устанавливают наличие и степень агглютинации во всех опытных пробирках, к-рую обозначают плюсами: большой осадок и полное просветление жидкости - 4 плюса; большой осадок и неполное просветление жидкости -3 плюса; заметный осадок и заметное просветление жидкости- 2 плюса. После этого определяют титр: наибольшее разведение с агглютинацией интенсивностью не менее 2 плюсов. Титр иссл. с-ки сравнивают с диагностическим титром для этого заболевания. Если титр иссл. с-ки в 2 раза ниже диагностического, реакцию оценивают как сомнительную; если титр равен диагностическому -как слабоположительную; если в 2-4 раза выше его- как положительную, если в 8 и более раз выше - как резко положительную

3. В микробиологическую лабораторию поступил исследуемый материал – мокрота от двух больных. Мокрота одного больного – кровянисто - тягучая, при микроскопии из нее нельзя было сделать вывод о характере возбудителя. Мокрота от другого больного гнойная, кровянистая. Опишите микроскопическую картину, по которой можно определить возбудителя пневмонии.
Ответ: Возбудителем пневмонии является пневмококк. Пневмококки – это диплококки, имеют ланцетовидную форму, размер – 0,75-0,5*0,5-1 мкм. Часто образуют короткие цепочки. Не подвижны, не имеют спор, образуют капсулу. Грамположительны.

 

Билет №19

1.Основные методы окраски препаратов. Цель, используемые красители, этапы окраски.
Методика приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде.
Окрасить препарат метиленовой синью, промикроскопировать, сделать вывод (с чашки Петри №1).
Ответ:

1. простой метод окраски: используют какой-либо один краситель анилинового ряда (основный, кислый).

Кислые – эозин, кислый фуксин(2 мин)

Основные – генцианвиолет, метиленовый синий(5-7мин), основный фуксин(2 мин), щелочной синий Леффлер(3-5мин).

2. по Грамму (распознать структуру бактериальной клетки, генциан-виолет(1мин), люголь(1мин), спирт(30сек), фуксин(2мин);

3. по Нейсеру (обнаружение зерен валютина, ацетат метилового синего Нейсера 5 мин, люголь 30сек, везувин 5мин, результат цитоплазма желтая, зерна валютина темно-синие);

4. метод Ошемлянского (зерна валютина, карболовый фуксин Циля 1мин, серная кислота 20-30сек, метиленовый синий 15-20сек, результат цитоплазма синяя, зерна красные);

5. окраска йодом(для обнаружения гранул углеводов: гликоген(красно-бурый цвет), крахмал(голубой);

6. для обнаружения полисахаридов (смесь эфира со спиртом пока не испарится, крепкий раствор йода в йодистом калии, микроскопия);

7. Судан III (капли жира, 1 кап формалина 40% на 5 мин, 1 кап Судана, 1 кап метиленового синего 5 мин, микроскопия, результат цитоплазма синяя, капли жира оранжевые);

8. Циля-Нильсона (на кислото-устойчевые, карболовый фуксин Циля 5 мин подогревая, 5% серная кислота 5 сек, метил синий 1-2 мин, м/с с иммерсией, результат к/у бак рубиново-красные, не устой - синие);

9. Ожешко (выявление спор, 0,5% НСI 2-3мин, окрасить по цилю –нильсона, результат цитоплазма голубая, споры-рубиного-красные);

10. Пешкова (выявление спор, метил син Леффлер 10-15 мин, 0,5% нейтр красного, м/с с иммерсией, результат клетки красные, споры синие);

11. Бури (капсула, взвесь микробов с тушью мазок как на кровь, м/с с иммерсией, результат на темном фоне микробы с капсулой в виде светлой зоны);

12. Бури-Гинса (капсула, мазок по Бури, фуксин 1-2 мин, м/с с иммерсией, результат на темном фоне видны красные бактерии, окруженные светлой зоной);

13. водный раствор фуксина (капсула, фуксин 1-2мин, результат на розовом фоне красные бактерии вокруг них светлая зона);

14. Клетта (капсула, метиленовый синий 1 мин, фуксин 5сек, м/с с иммерсией, результат клетки синие, капсулы розовые);

 

Методика приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде.

1. подготов предмет стекло;

2. нанести каплю NaCl;

3. обжечь петлю;

4. перенести культуры с чашки или пробирки в каплю физ р-ра;

5. обжечь петлю;

6. зафиксироать мазок.

 

Окрасить препарат метиленовой синью, промикроскопировать, сделать вывод (с чашки Петри №1).

1. препарат положить на поверхность исследуемым материалом вверх;

2. пипеткой нанести на препарат р-р красителя на 5-7 мин;

3. краску слить, промыть водой;

4. просушить;

5. м/с с иммерсией.

 

2.Отобрать культуры, выросшие на двухсахарном агаре, характерные для шигелл. Охарактеризовать их биохимические свойства.
Ответ:

1. обжечь петлю;

2. подозрительные колонии(полупрозрачные) пересевают еа среду Рассела, манит. Посев производится штрихами по скошенной поверхности и уколом в агаровый столбик;

3. параллельно делают посев на селинитовый бульон;

4. колонии не расщеп лактозу красят по Грамму;

5. пестрый ряд с инд бумажкой и на лакмусовое молоко;

6. серодиагностика;

Биохимические свойства: расщепляют углеводы без образования газа, рамнозу, ксилозу; не расщепляют лактазу, сахаразу; молоко свертывается, желатин не разжижает.

 

3.В пробирку №1 с МПБ внесена культура микробов и фаг, в №2 внесена культура микробов. Через 24 часа инкубации в термостате, в пробирке №1 и №2 прозрачное содержимое. Произведите учет.
Ответ: Учет результатов проводят только при наличии роста микробов в контроле (№2) – помутнение среды. Отсутствие видимого роста или последующее просветление среды в пробирке с исследуемым материалом свидетельствует о присутствии фага.

 

Билет №20

1.Методика окраски по Граму. Цель, используемые красители, этапы окраски. Методика приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде. Окрасить и промикроскопировать препарат, сделать вывод (с ч. Петри №2)
Ответ:

1. приготовить фиксированный мазок;

2. на мазок налить Генциан-Виолет на 1-2 мин;

3. слить окраску, препарат не промывать водой;

4. налить р-р Люголя на 1 мин;

5. слить окраску, препарат не промывать водой;

6. нанести на препарат спирт на 0,5-1 мин;

7. препарат промыть водой;

8. окрасить препарат разведенным фуксином на 1-2 мин;

9. промыть водой, просушить, м/с с иммерсией;

Результат: Гр(-) красные бактерии, Гр(+) синие бактерии.

Цель: структура бактериальной клетки.

Методика приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде.

7. подготов предмет стекло;

8. нанести каплю NaCl;

9. обжечь петлю;

10. перенести культуры с чашки или пробирки в каплю физ р-ра;

11. обжечь петлю;

12. зафиксироать мазок.

2. Отобрать из выросших на трехсахарном агаре культуры, характерные для ЭПКП. Назвать дифференциально-диагностические признаки. Ответ поясните.
Ответ: Материал из изолированных колоний засевают по поверхности скошенной части и путем прокалывания столбика среды. Посевы инкубируют при температуре 37 С в пробирках с неплотно закрытыми пробками 24 часа.
ИНТЕРПРИТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ В случае ферментации только глюкозы скошенная часть среды становится красной (щелочной), среда в столбике – желтой (кислой).
Желтый цвет скошенного агара и столбика означает, что тестируемый организм ферментирует все три сахара.
Красный цвет скоса и столбика указывает на то, что микроорганизм не является ферментером.
В случае образования сероводорода: наблюдается почернение в столбике среды.
На образование газа указывает появление пузырьков или трещин в среде.
Для итоговой идентификации проведите биохимические или другие тесты с чистой культурой организма.
После проверки рН, цвета, глубины, и стерильности, следующие организмы используют для определения качества приготовленной среды. Инокулировать свежими культурами и выдерживать при 35 ± 2 ºС 18 – 24 часа.

 

организм	рост	Скос	Столбик	Газ	Н2S
Escherichia coli	Хорошо	к	к	+	_
Pseudomonas aeruginosa	Хорошо	щ	щ	_	_
Salmonella choleraesuis, Subsp. Choleraesuis serotype Enteritidis	Хорошо	щ	к	+	+
Shigella flexneri	Хорошо	щ	к	_	_

к - Кислота; щ – Щелочь

3.При проведении микробиологического исследования на брюшной тиф на ч. Петри со средой Эндо после посева испражнений выросли колонии красного цвета с металлическим блеском. Назовите методы исследования для подтверждения данного возбудителя.
Ответ: Если бы был выявлен возбудитель брюшного тифа (Salmonella typhy), то на ЭНДО выросли бы бесцветные колонии.
Методы: исследовать сахаралитические свойства, определение антигенной структуры (Vi-антиген).

Билет 21

1.Этапы приготовления питательных сред. Классификация питательных сред. Приготовить 50 мл МПА.

1. Этапы приготовления сред:

· Варка – варят среды на открытом огне, водяной бани, в автоклавах, или в варочных котлах.

· Установление pH – ориентировочно производят с помощью индикаторных бумажек, а для точного определения pH пользуются потенциометром.

· Осветление – производят с помощью Куринного яйца. Среду подогреть до 50ºС, вливают белок куриного яйца, который предварительно взбит с двойным количеством воды, перемешивают и кипятят. Свертываясь белок увлекает в осадок взвешенные в среде частицы.

· Фильтрация – если среда жидкая, то проводят через бумажный фильтр. Если среда агаровая, то её просто отстаивают.

· Розлик – разливают среду в пробирки, флаконы, колбы, не более чем на 2/3 объема. Среды которые стерилизуют при температуре выше 100ºС разливают в чистую сухую посуду. Среды, которые стерилизуют при более низкой температуре, разливают в стерильную посуду. Посуду со средой закрывают ватно-марлевыми пробками и обязательно прикрепляют этикетку, где указывают название среды и дату приготовления.

· Стерилизация – она зависит от состава среды: прокаливание на огне, кипячение, стерилизация сухим жаром, стерилизация насыщенным паром под давлением, стерилизация текущим паром, тиндализация, пастеризация, стерилизация с помощью ультрофиалета.

· Контроль

- Контроль стерильности – среды ставят в термостат на 2 суток после чего просматривают, если на них не появилось роста м/о то среду считают стерильной.

- Химический контроль – его проводят в лабораториях, при этом проверяют pH и количество основных ингредиентов.

- Биологический контроль – среды засевают специально подобранными м/о (музейными) и по их росту судят о питательных свойствах среды.

Классификация питательных сред:

По исходным компонентам:

· Натуральные - их готовят из продуктов животного происхождения и растительного происхождения. Например, костная мука, дрожжи, сгустки крови, кусочки мяса.

· Синтетические – их готовят из определённых химически чистых органических и не органических соединений взятых в точно указанной концентрации и растворенных в дистиллированной воде. Важное преимущество этих сред в том что их состав постоянный.

По консистенциям:

· Жидкие питательные среды

· Плотные питательные среды

· Полужидкие питательные среды

Плотные и полужидкие среды готовят из жидких к которым добавляют агар-агар, желатин.

По составу:

· Простые – к ним относят мясопептонный бульон, мясопептонный агар, питательный желатин, пептонная вода.

· Сложные – их готовят прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы, и др.

По назначению:

· Основные – это среды, которые служат для культивирования большинства микробов (МПА, МПБ).

· Специальные – они служат для выделения и выращивания м/о не растущих на простых средах (добавляют сахар, бульон, среды с кровью).

· Элективные среды – служат для выделения определённого вида м/о, задерживая или подавляя рост других м/о. Среды становятся элективными если к ним добавляют определённые антибиотики, соли, или изменяют pH. Жидкие элективные среды называют средами накопления.

· Дифференциально-диагностические – они позволяют отличать 1 вид микробов от другого по ферментативной активности. (Пример ряд Гисса).

· Консервирующие среды – они предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала. (Пример глицериновая смесь, предотвращает отмирание патогенных микробов и развитие сапрофитов.)

Приготовить 50 мл МПА.
Приготовление обычных питательных сред. МПБ. К мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5% химическо чистого NaCl, кипятят на слабом огне 10-15 мин, для растворения веществ. Устанавливают рН среды 7,6—7,8, и снова кипятят 30-40 мин до выпадения осадка. Фильтруют через бумажный фильтр, доливают до первоначального объема водой и стерилизуют при 120 С в течение 20 мин.
МПА. В готовый МПБ добавляют 3% нарезанного агара, агар расплавляют в текучем паре в аппарате Коха, устанавливают рН 7,6, осветляют яичным белком, фильтруют через бумажный фильтр, стерилизуют 30 мин при 120.

2.Произвести посев бактериальной петлей с плотной питательной среды на сектор и с плотной питательной среды в пробирку с жидкой питательной средой. Методика приготовления микробной взвеси.
Ответ: Произвести посев бактериальной петлей с плотной питательной среды на сектора.
Чашку со стороны дна расчерчивают на секторы, посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру. Необходимо следить, чтобы штрихи не заходили на соседние сектора.
Посев плотной питательной среды в пробирку с жидкой питательной средой.
Чашку с посевным материалом ставят перед собой крышкой вверх, левой рукой приоткрывают крышку и вводят под неё обожженную петлю. Остудив петлю, набирают посевной материал с отмеченного участка. Вынимают петлю, закрывают крышку и в левую руку берут пробирку со средой, снимают крышку, обжигают кроя пробирки над спиртовкой, погружают петлю с материалом в среду, и 3-5 сек ополаскивают в ней. Методика приготовления микробной взвеси.
Микробную взвесь готовят путем суспендирования в физиологическом растворе изолированных колоний из 24-часовой культуры, выращенной на неселективных средах до определённой концентрации по Мак-Фарланду.

3.При заборе материала у ребенка 6 лет, медсестра вынимая ватный тампон из зева, задела небные миндалины и корень языка.
Расскажите о заборе материала при коклюше ватным тампоном.
Для взятия материала пользуются двумя тампонами. Один сухой, второй смоченный питательной средой КУА. Перед взятием материала томпон вынимают из пробирки, сгибают его под углом 120º. Ребёнку предлагают открыть рот, стерильным шпателем надавливают на корень языка и вводят тампоном в полость рта до тех пор, пока конец его не прикоснется к задней стенке глотки. При этом у ребёнка появляется кашлевой рефлекс, который сопровождается выделением слизи. Затем помпон осторожно вынимают и делают посев на поверхность среды КУА в чашки Петри: сначала несколько штрихов на одном месте, а затем растирают по всей поверхности среды. Засеянные чашки ставят в термостат. Второй тампон дважды смачивают средой КУА (KH2PO4 и Na2NPO4, агар и активированный уголь). Эту смесь разливают во флаконы, перед смачиванием её растапливают на водяной бане. Материал собирают так же, как и сухим тампоном, но после взятия материала тампон помещают обратно в пробирку и доставляют в лабораторию, где производят посев.

 

Билет 22

1.Дать характеристику тинкториальным свойствам, на какие группы делятся микроорганизмы по этим свойствам.Определить тинкториальные свойства предложенной культуры микроорганизмов. Сделать вывод (с ч. Петри №4).
Ответ: Тинкториальные свойства - свойства бактерий, грибов и простейших, характеризующие их способность вступать в реакцию с красителями и окрашиваться определенным образом.

Грамположительные бактерии хорошо удерживают комплекс генцианового фиолетового с йодом и устойчивы к обесцвечиванию спиртом. После обработки фуксином они окрашиваются в фиолетово-пурпурный цвет.

Грамотрицательные бактерии обесцвечиваются спиртом, то есть теряют комплекс генциа-нового фиолетового с йодом, и хорошо поглощают фуксин. В мазках они окрашиваются в малиново-красный цвет.

Кислотоустойчивые бактерии. Клеточная стенка некоторых бактерий содержит большое количество липидов и восков, делающих их устойчивыми к последующему после окрашивания обесцвечиванию кислотами, щелочами или этанолом (например, виды Mycobacterium или Nocardia). Подобные бактерии называют кислотоустойчивыми, их трудно окрашивать по Граму (хотя кислотоустойчивые бактерии рассматривают как грамположительные). Для их окраски применяют метод Циля-Нильсена.

 

2.Дать характеристику санитарно-показательным микроорганизмам. Методика смыва с рабочего места – стола. (цель, последовательность, используемые материалы). Произвести отбор проб, посев исследуемого материала.
Ответ: Санитарно- показательные микроорганизмами – являются постоянными обитателями поверхностей и полостей тела человека и животных, выделяющихся из организма теми же путями что и патогенные микробы. Поэтому чем больше выделено СПМ, тем большая вероятность попадания патогенных микробов в окружающую среду. Методика смыва с рабочего места – стола.
Цель: Исследование смывов с предметов проводится для оценки санитарно-гигиенического состояния предметов.
Смывы со стола: Делают из нескольких мест. Исследованные участки ограничивают рамкой трафарета с площадью 50 на 50 или 100 на 100 см². Трафарет изготавливают из проволки и перед употреблением прижигают под пламенем горелки.
Исследование на БГКП. 1 день: Смывы засевают на среду Кода. При росте кишечной палочки среда меняет цвет. При изменении среды материал пересевают на среду Эндо. 2 день: Изучают колонии на среде Эндо. Из подозрительных колоний делают мазки и м/с. Выявление S. aureus. Получение смывы засевают на ЖСА в ч Петри и параллельно на 6,5% солевого бульона (среда накопления). На ЖСА можно сделать посев тампоном. Бульон предварительно разливают в пробирки по 5 мл и в каждую засевают 0,2-0,3 мл смыва. Посевы инкубируют при 37ºС в течение 24 ч.
Определение ОМЧ: 1 день: К 2 мл взятых смывов прибавляют 8 мл NaCl. Получить разведение 1:5. Тампоны тщательно отмывают встряхиванием. 1 мл засевают в ч Петри и заливают 12 мл расплавленного и остуженного до 45ºС агара. Чашки инкубируют в термостате при температуре 37ºС в течение 24 ч. 2 день: посевы вынимают, подсчитывают количество выросших колоний и делают пересчет на 1 см² исследуемой поверхности.

 

3.При посеве исследуемого материала на среду КУА колонии выросли через сутки, в мазке обнаружены ГР- палочки овоидной формы.
Расскажите необходимые исследования для идентификации выделенного возбудителя.

Ответ: Для идентификации выделенного возбудителя ставят пробную реакцию агглютинации с моноспецифической родовой сывороткой (7). Положительная реакция агглютинации свидетельствует о пренадлежности выделенной культуры к роду Bordetella. Для определения вида бордетелл ставят реакцию агглютинации с моноспецифическими видовыми сыворотки 1 и 14. Результаты агглютинации дают возможность отдифференцировать B. pertussis от B. Parapertussis, и если это B. Pertussis, то определить серовар. Для окончательной идентификации выделенной культуры ставят пробу на наличие уреазы и производят посев на скошенный агар, содержащий 0,1% тирозина.

Проба на уреазу: В маленькую пробирку наливают 0,3-0,4 мл 2% раствора мочевины, вносят петлю культуры и добавляют 2-3 капли фенолфталеина. Пробирку встряхивают, и ставят в термостат. Учитывают реакцию через 2 и 24 часа. Бактерии коклюша не изменяют цветсреды. Бактерии паракоклюша обладают ферментом уреазой, который расщепляет мочевину с образованием аммиака. Аммиак изменяет индикатор, и среда окрашивается в красный цвет.
Проба с тирозином. На скошенный МПА в пробирках с 0,1% тирозином засевают выделенную культуру и ставят в термостат. На следующий день вынимают пробирку из термостата и просматривают её. Наличие роста в пробирке и окрашивание среды в коричневый цвет свидетельствует о росте возбудителей паракоклюша. Возбудители коклюша на этой среде не растут.

 

Билет №13

1. Методика приготовления препарата «раздавленная капля» (цель, последовательность, используемые материалы). Приготовить препарат, промикроскопировать, сделать вывод (из пробирки №3).
Ответ: Для изучения формы и выявления подвижности бактерии изучают в живом состоянии в препаратах раздавленной капли.
на предметное стекло наносят каплю бульонной культуры. При обильном росте микробов культуру предварительно разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Нанесенную на предметное стекло каплю раздавливают. Для этого покровное стекло ставят на ребро у края капли и опускают, постепенно вытесняя воздух, находящийся между предметным и покровным стеклами, чтобы избежать образования в ней пузырьков воздуха. В правильно приготовленном препарате раздавленной капли стекла плотно склеиваются и жидкость тончайшим слоем заполняет пространство между ними, не выступая за края покровного стекла.

2. Рассказать последовательность взятия проб методом смыва с рук (используемый материал). Произвести отбор смыва с рук.
Ответ: Изучение бактериальной загрязненности рук и различных предметов инвентаря производится в целях:

· Оценки нитарно-гигиенического состояния исследуемого объекта

· Установление путей распространения инфекции при эпидемиологических обследованиях

· Лабораторного контроля эффективности обработки кожи рук(главным образом хирургов)

В зависимости от цели проводимого исследования и характера контролируемых объектов в полученных смывах определяют:

· Общую микробную обсемененность обычно с пересчетом на 1 см2 исследуемой поверхности

· Наличие бактерий группы кишечной палочки как показатель фекального загрязнения, свидетельствующих о нарушении санитарного режима

· Наличие патогенных бактерий кишечной группы, обнаружение которых является безусловным показателем эпидемического неблагополучия

· Наличие стафилококков и других микроорганизмов

Для получения смывов пользуются стерильными ватными тампонами или марлевыми салфетками. В день взятия смыва в каждую пробирку с тампоном наливают по 2 мл стерильной воды или изотонического раствора хлорида натрия так, чтобы ватный тампон находился над уровнем жидкости. Марлевые салфетки размером 5х5 см завертывают по одной в бумажные пакеты. К каждой салфетке готовят заранее пробирку с 2 мл стерильной воды для смачивания. Непосредственно перед взятием смыва пробирку наклоняют, увлажняя находящийся в ней тампон. В случае применения салфеток их захватывают кончиком стерильного пинцета, прокаленного над пламенем горелки, и увлажняют стерильной водой из пробирки.
Увлажненный водой тампон или салфетку дают в руки обследуемому, предлагая протереть им сначала кожу левой, а затем правой руки в такой последовательности(от участков с меньшей к участкам с большей загрязненностью): тыл, кисти, ладонную поверхность, межпальцевые пространств, ногтевые ложа. По окончании процедуры салфетки или тампоны помещают в пробирку, в которой они находились.

3. Группа студентов отправляется в район эндемичный по клещевому энцефалиту. Назвать необходимые профилактические мероприятия для студентов.

Ответ: Профилактика заболевания заключается в проведении противоклещевой защиты человека и повышении устойчивости его организма к возбудителю.
Противоклещевые пути защиты разделяются на индивидуальные и коллективные.

Индивидуальные средства защиты. Защитная одежда. При посещении лесных угодий, вызванном определенными нуждами, надлежит строго соблюдать условия, которые препятствовали бы нападению клещей на человека и проникновению их под одежду.
В этих целях обычная одежда может быть превращена в защитную, если плотно застегнуть ворот, манжеты, рубашку заправить в брюки, а брюки - в сапоги или носки. Ткань не должна быть ворсистой, так как последняя облегчает прикрепление клещей и способствует лучшему удерживанию их на одежде. Наилучшей обувью в лесу следует считать сапоги, гладкая поверхность которых затрудняет прикрепление клещей. Лучшим нательным бельем является трикотажное, так как оно плотно прилегает к телу и затрудняет присасывание клещей.
Отпугивающие клещей вещества. Защитное действие одежды усиливает обработка репеллентами (отпугивающими веществами). К ним относятся репудин, диметилфталат, диэтилфталат, дибутилфталат и др. Их наносят с помощью пульверизатора. Для обработки одежды требуется 30 мл вещества на 1 м². Действие репеллентов сохраняется в течение двух месяцев. Используют также 10% пасту "ДЭТА-34". Паста наносится на рабочий костюм исходя из тех же расчетов и оказывает действие на клещей в течение 27-28 дней. В этих же целях может быть использована жидкость "Лесная". Способ применения ее тот же. Отпугивающее действие сохраняется на протяжении двух недель. Надо заметить, что в настоящее время предложено большое число репеллентов (карбоксил, репефтал и др.) и число их с каждым годом увеличивается.
Само- и взаимоосмотры. Во время пребывания в лесу независимо от применения противоклещевых средств обязательно должны проводиться само- и взаимоосмотры. Беглые осмотры ведутся каждые два часа при большой клещевой плотности, а при малой - три раза в день. Кроме того, обязательно проводится тщательный осмотр с раздеванием при выходе из леса или в конце рабочего дня, если люди остаются в лесу на Они позволяют своевременно обнаружить клещей и удалить их в одних случаях до присасывания, в других - в первые минуты прикрепления, еще до кровососания. Надо помнить, что заражение человека происходит в течение всего периода кровососания. При осмотре следует особо обращать внимание на волосистые части тела, кожные складки, ушные раковины, подмышечные и паховые области. Надо хорошо просмотреть все складки и швы одежды, так как в них часто укрываются клещи, не успевшие присосаться. Встряхиванием одежды не всегда удается избавиться от клещей. Тщательно осматривать надо не только одежду, но и предметы, выносимые из леса, а также и животных.
Удаление клеща. Удаляют клеща так: захватывают его пинцетом или пальцами, обернутыми марлей, и легкими качательными движениями извлекают. Некоторые исследователи рекомендуют смазывать тело клеща какой-либо жидкостью: керосином, эфиром или камфорным маслом. Это приводит к закрытию дыхательных отверстий, и клещ сам пытается покинуть место присасывания. Однако при этом клещ нередко погибает, что затрудняет его извлечение. При извлечении присосавшегося клеща может оторваться головка, которая плотно удерживается в коже. Для того чтобы ее обнаружить, место присасывания клеща протирают влажной марлей или платком. При наличии головки видна черная точка. Головка извлекается иглой или булавкой, предварительно прокаленной докрасна над пламенем. После удаления головки это место смазывают йодной настойкой. Обнаруженные или извлеченные клещи должны быть уничтожены: помещены в дезинфицирующий раствор или сожжены. После удаления клеща необходимо тщательно вымыть руки.

Билет №14

1. Методика приготовления препарата «висячая капля» (цель, последовательность, используемые материалы).. Приготовить препарат, промикроскопировать, сделать вывод (из пробирки №4)
Ответ: на середины обезжиренного покровного стекла наносят небольшую, с четкими краями каплю бульонной культуры. Каплю материала покрывают предметным стеклом с лункой, края которой предварительно смазываютвазелином. Предметное стекло с прилипшим к нему покровным стеклом перевертывают. Капля оказывается висячей в герметически закрытой влажной камере, из которой жидкость испаряется очень медленно и поэтому препарат долгое время остается пригодным для наблюдения.
висячую каплю микроскапируют с плоским зеркалом и суженной диафрагмой. При малом увеличении находят край капли, отчетливо видный в затемненном поле зрения. По одну сторону линии видно множество мельчайших капелек конденсата, осевших на внутренней поверхности покровного стекла, по другую сторону линии фон равномерно серого цвета- искомая капля. Найденный край капли устанавливают в центре поля зрения микроскопа при малом увеличении и, не сдвигая препарата, переходят на более сильную(40Х) или иммерсионную систему, слегка расширив диафрагму микроскопа.
подвижные бактерии проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения микроскопа, вращаясь вокруг своей оси.

2. Указать колонии с ростом, характерным для Е.соli и ЭПКП. Их отличительные биохимические свойства.
Ответ: Е.соli- короткие палочки, в среднем 0,5-3*0,5-0,8 мкм. Грамотрицательные. В большенстве случаев подвижные, перетрихи. Некоторые варианты не подвижны. Многие штаммы образуют капсулу, спор не образуют.
Культуральные свойства: факультативные анаэробы, растут при температуре 37⁰С и pH 7,2-7,8. Хорошо растёт на простых питательных средах. На МПА образует мутноватые, слегка выпуклые влажные колонии с ровным краем. На МПБ даёт равномерное помутнение. Для идентификации Е.соli используют дифференциально-диагностические среды: Эндо и агар с эозинметиленовым синим (ЭМС). На Эндо растёт в виде малиново-красных колоний с металлическим блеском. На ЭМС – в виде тёмно-фиолетовых колоний.
ЭПКП – энтеропатогенная E.coli – вызывают энтероколиты у детей 1-го года жизни, передается в основном контактно-бытовым путем.
Клинически – поражается эпителий тонкого кишечника.
Патогенность связана с белками наружной мембраны, синтезом термолабильного и термостабильного энтеротоксина. Биохимические свойства энтеробактерий. Кишечная палочка обладает наиболее высокой ферментативной активностью
- Ферментируют углеводы до кислоты или кислоты и газа («Пестрый ряд»-среды Гисса)
- протеолитически мало активны.
-Она утилизирует ацетат в качестве единственного источника углерода, восстанавливает нитраты в нитриты.. -Большинство штаммов ферментирует лактозу с образованием кислоты и газа. Однако встречаются варианты, медленно сбраживающие лактозу или вовсе не обладающие этой способностью.

3. В лабораторию поступил материал (отделяемое раны) от больного с подозрением на газовую анаэробную инфекцию.
Назовите методы культивирования и питательные среды, применяемые для культивирования анаэробов.

Ответ: На плотных средах бактерии возбудителя газовой гангрены образуют S- и R-колонии. S-колонии круглые, сочные, куполообразные, с гладкими ровными краями. R-колонии неправильной формы, бугристые, с неровными шероховатыми краями. Колонии окружены зоной гемолиза; гемолиз может быть полным либо частичным. Характерное свойство колоний способность менять серовато-белый цвет на зеленовато-оливковый после кратковременного пребывания в аэробных условиях. На желточном агаре образуют колонии, окружённые зоной перламутрового преципитата.
При подозрении на газовую гангрену бактериологическому исследованию подвергают некротизированную ткань из различных участков, расположенных вблизи здоровой ткани, кусочки пораженных мышц весом не менее 2-3г, иссекаемые при хирургической обработке ран, отечную жидкость, набираемую шприцем на границе со здровой тканью, кровь из вены(5-10мл).
Трупный материал (участки травмированной кожи и патологически измененные мышцы, иссеченные в окружности раны, кусочки печени, селезенки, кровь из сердца) берут в ближайшие часы после смерти, до проникновения в ткани трупа анаэробной микрофлоры из ЖКТ.
Банки с материалом маркируют и немедленно отправляют в микробиологическую лабораторию для исследования.
из материала поступившего на исследование готовят мазки-отпечатки. Один мазок окрашивают по Граму, другой по Гинсу. Основанием для подозрения на газовую гангрену является содержание в мазке патодлогического материала большого количества грамположительных грубых или поломорфных палочек, большей частью в сочетании с кокками. В препаратах окрашенных по Гинсу могут быть обнаружены капсулы, образованные Cl. Perfringens.
После предварительного микроскопирования пат материал подготавливают к посеву: некротизированные участки кожи, мышцы, кусочки ткани, соблюдая правила стерильности, измельчают ножницами, добавляют небольшое количество кварцевого песка и изотонического раствора хлорида натрия, растирают в ступке до образования гомогената
поступившую отечную жидкость и кровь центрифугируют при 3000об/мин в течении 30 мин.
приготовленную ткань и осадок жидкости засевают петлей на плотные пит.среды: кровяной агар, агар Вильсона-Блер, среду Вильсона и Хоббса.
Параллельно с посевом на плотные пит среды взвесь исследуемого материала в объеме 1мл засевают под слой вазелинового масла в 5 пробирок со средой Китта-Тароцци.
Непосредственно перед посевом эту среду регенерируют кипячением в течении 10-20 мин с последующим быстрым охлаждением. После посева одну пробирку оставляют без прогревания, остальные 4 прогревают на водяной бане при 80С в течении 15 мин 1 пробирку, при 100С в течении 5, 10, 20 мин 3 пробирки, для уничтожения посторонней вегетативной микрофлоры, которая может подавить развитие анаэробов.
Второй день: посевы на плотных пит средах инкубируют, просматривают чашки каждые 2 дня, на жидких средах просматривают ежедневно.
Колонии, подозрительные в отношении возбудителей газовой гангрены исследуют бактериоскопически. При обнаружении грамположительных грубых или полиморфных палочек материал из нескольких колоний отсевают на накопление чистой культуры в среду Китта-Тароцци.
Из пробирок с посевами первичного материала, в которых отмечается помутнение среды с образованием пузырьков газа, свидетельствующих о развитии и накоплении в ней микробов-анаэробов, готовят мазки для бактероскопии. При выявлении грубых грамположительных палочек производят высевы на пит среды: кровяной агар, среда Вильсона-Блер, Вильсона и Хоббса для получения роста изолированных колоний и выделения чистых культур.
чистую культуру микробов-анаэробов, выращенную на жидких средах, исследуют бактериоскопически приготовляя: мазок для окраски по Граму, препарата «висячей капли».
Биохимические свойства оценивают при посеве и культивировании в анаэробных условиях в средах пестрого ряда Гисса.
Видовую принадлежность определяют с помощью биологической пробы на мышцах методом нейтрализации токсинов специфическими противогангреозными сыворотками.

 

 

 

 

Билет № 11

1. Методика окраски капсул (цель, последовательность, используемые материалы)
Ответ: Метод выявления капсулы по Бурри-Гинса
Приготовление туши для окраски препаратов по Бурри:
К 1г объема черной туши прибавляют 3 объема дистиллированной воды. Разведенную тушь наливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 15-20 минут при 2000-3000 об\мин для осаждения крупных частиц туши. После центрифугирования быстро перевертывают, сливая надосадочный слой туши, и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 мин.

1. На середину предметного стекла наносят каплю черной туши и смешивают ее с помощью петли с каплей культуры капсульных бактерий.

2. Краем другого предметного стекла делают мазок по типу кровяного. Мазок сушат на воздухе и фиксируют в пламени горелки.

3. Окрашивают 5 мин карболовым фуксином, разведенным водой 1:3.

4. Осторожно промывают водой, высушивают.
Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы контрастно выделяются на темном фоне препарата.

 

2. Приготовить, окрасить, промикроскопировать препарат, сделать вывод.

3. Определите семейство, род и вид м\о по предложенному биохимическому тесту:

Сероводород (-)

Мочевина (-)

Лактоза – кг

Индол (+\-)

Среда Симмонса (-)

Подвижность (+)

Ацетатный агар (+)

Семейство: Enterobacteriaceae

Род: Esherichia

Вид: Esherichia coli

 

4. Задача:

В микробиологическую лабораторию поступил материал- биоптат со слизистой желудка с клиническим диагнозом язвенный гастродуоденит. При посеве исследуемый материал была выделена – H. Pylori. Факторы способствующие сохранению и колонизации H.Pylori на слизистую желудка.

Важным фактором колонизации H. pylori является подвижность, связанная с наличием мощных жгутиков, которые обеспечивают быстрое движение микроорганизма в слое густой слизи вдоль градиента рН и служат одним из факторов его вирулентности, а также способствуют агрегации H. pylori на поверхности эпителия.

Колонизация желудка H. Pylori- он наделен достаточно плотной гладкой клеточной стенкой, кнаружи от которой определяется капсулоподобная оболочка — гликокаликс и способностью к образованию уреазы. Гликокаликс способствует невосприимчивости бактерии к антибиотикотерапии и защищает микроорганизм от иммунного ответа хозяина. В его состав входят углеводсодержащие полимеры (липополисахариды) и белки, необходимые для адгезии H. pylori на поверхности эпителиоцитов, вызывающие развитие воспаления слизистой желудка.
Продукция большого количества фермента уреазы способствует расщеплению мочевины с образованием углекислого газа и аммиака, который нейтрализует соляную кислоту желудочного сока, создавая вокруг бактерии локальную среду с рН 7, наиболее благоприятную для его существования.
Уреаза, вырабатываемая H. pylori, представляет собой никель-содержащий гексадимер и является собственно маркером инфекции. Наличие уреазы представляет собой основу для проведения различных диагностических тестов с целью обнаружения H. pylori

 

 

Билет № 12

1. Аспирационный метод отбора проб воздуха (цель, последовательность, используемые приборы).

Цель занятия:Изучить методы и показатели, необходимые для санитарно-микробиологической оценки объектов окружающей среды.

Нормативы: чистый воздух зимой: ОМЧ не более 4500, гемолитических стрептококков - до 35;грязный воздух зимой: ОМЧ более 7000, гемолитических стрептококков – до 124.

Аспирационный метод (метод Кротова) - более точный количественный метод оп­ределения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью прибора.
Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексиглазовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благода­ря постоянному вращению чашки под входной щелью.
После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по формуле:

х= ^{а х 1000}

^V

х – количество микробов в м³ воздуха;

а - количество выросших на чашке колоний;
V - объем пропущенного через прибор воздуха, дм³ ;

1000 - искомый объем воздуха, дм³.

2. Провести забор воздуха для определения ОМЧ (на ч. Петри №6). Сделать вывод.

3. Рассказать методику посева.

Приборы и посуда

1. Для бактериологического анализа воздуха используют импактор воздуха микробиологический “Флора-100” (ТУ 64-098-33-95).

· Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (ТУ 64-1-791-77).

· Секундомер ГОСТ 9586-75

· Чашки бактериологические, плоскодонные, стеклянные диаметром 100 мм, ГОСТ 10937-75.

· Термостаты электрические суховоздушные, типа ТС, ТУ 64-1-1382-76.

· Пипетки мерные, ГОСТ 1770-74.

· Колбы конические, ГОСТ 1770-74.

· Весы аналитические ВЛА-200-М.

· Камера для стерильной сушки чашек Петри типа ЕМЗ 804-014СП.

2.Методика проведения контроля

ü Воздух аспирируют со скоростью от 20-30 до 150-200л/мин на поверхность питательной (посевной) среды на чашках Петри.

ü Время аспирации 2-5 минут.

ü Инкубирование отобранных из воздуха проб производится в зависимости от выделяемых микроорганизмов в диапазоне температур от 27-28 до 41-42⁰С. При оценке пигментообразования чашки Петри дополнительно (после инкубирования) выдерживают 48 часов при комнатной температуре.

ü Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3-4 сутки и более в зависимости от штамма после посева воздуха.

ü Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 150-200 колоний. Результаты расчета концентрации дают в колониеобразующих единицах (КОЕ) в 1м³ воздуха.

ü Расчет концентрации (колониеобразующих единиц), содержащихся в 1 м³ воздуха производится по формуле:

К= П 1000/С t кл/м³, где

К - концентрации искомой культуры в воздухе, КОЕ/м³,

П - количество изотипов бактерий, сходных по морфологии колоний и клеток,

1000 - коэффициент пересчета на 1 м³ воздуха,

С - скорость аспирации,

t -время аспирации

ü Результаты замеров вносят в протокол.

 

2. Произвести посев бактериальной петлей с ППС на двусахарный агар. ТЮТЮ!!!!

 

3.В стационар поступил мужчина с пищевым отравлением. При исследовании было уствновленно, что возбудителем является м\о p. Salmonella. Перечислить и дать характеристику методам исследования и исследованному материалу.
Ответ: Если рвотные массы густой консистенции, их разводят изотоническим раствором хлорида натрия в соотношении 1:10. 2-3 капли из верхнего слоя засевают на дифференциальные среды и среды обогащения. Дальнейшее исследование ведут по общей схеме. Промывные воды желудка и рвотные массы исследуют обычно при токсикоинфекциях. Они, как правило, имеют кислую реакцию, поэтому перед посевом их нейтрализую 5-10% раствором бикарбоната натрия.
Ход определения:
1 день:
Посев материала на дифференциально – диагностические среды и среды обогащеня. На среду Плоскирева и сред

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: