Контроль качества дезинфекции помещений методом бактериологического исследования смывов

Пробы, каждую в отдельности, отмывают в той же пробирке путем нескольких погружений и отжатий тампона. Последний удаляют, а жидкость центрифугируют 20-30 минут при частоте вращения 3000-3500 оборотов в минуту. Затем надосадочную жидкость сливают, в пробирку наливают такое же количество сте­рильной воды, содержимое смешивают и снова центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а из центрифугата делают посевы. При наличии в смыве грубых механических примесей их растирают в пробирке стеклянной палочкой, после чего смыв переносят в центрифужную пробирку.

Для индикации кишечной палочки 0,5 мл центрифугата высеивают в пробирки с модифицированной средой Хейфеца или КОДА. Посевы выдерживают 12-18 часовв термостате при 37-38°С. Изменение сиренево-красного цвета сред (в зеленый или салатовый) с помутнением их и образованием газа свидетельствует о наличии роста кишечной палочки. Другие изменения цвета (желтоватый, розовый, сероватый), наблюдаемые приросте микроорганизмов других видов, не учитывают.В сомнительных случаях делают подтверждающий посев с жидких сред на агар Эндо. Посевы инкубируют 12-16 ч при 37-38°С.

Для индикации стафилококков (0,5 мл центрифугата высеивают в 5 мл мясопептонного бульона с 6,5% хлорида натрия. Через 22-24 часа инкубирования посевов при 37-38°С делают пересевы бактериологической петлей на 8,5%-ный солевой мясопептонный агар. Посевы выдерживают в термостате 22-24 часа при температуре 37-38°С. Из выросших культур для подтверждения роста стафилококков готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Для индикации спорообразующих аэробов смывы обрабатывают, как указано выше, но перед центрифугированием их прогревают 30 минут на водяной бане при 65°С, затем центрифугируют. Из центрифугата каждой пробы делают посевы в одну пробирку с мясо-пептонным бульоном (МПБ) и на две чашки с мясопептонным агаром (МПА). Для контроля качества дезинфекции при сибирской язве МПА может быть заменен дифференциально-диагностической средой. Посевы инкубируют 24-28 ч в термостате при 37^оС.

При наличии роста на МПА подсчитывают колонии и изучают морфологию их при малом увеличении микроскопа. В случае возникновения подозрения на выделение возбудителя сибирской язвы проводят идентификацию культуры.

При наличии роста на дифференциально-диагностической среде в крышку чашки Петри вносят 1-2 мл культуры при 20±2°С в течение 1 мин, после чего визуально или под малым увеличением микроскопа учитывают тест. Под действием паров аммиака происходит порозовение колоний микроорганизмов, обладающих фосфатазной активностью. Вас. anthracis фосфатазной активностью не обладают, и его колонии остаются бесцветными.

При отсутствии роста или характерных колоний на плотных средах и наличии роста в МПБ делают дробные посевы из МПБ на плотную питательную среду. При просмотре посевов учитывают общее число проб, в которых обнаружен рост санитарно-показательных микроорганизмов, а при споровой инфекции — и колонии непатогенных спорообразующих аэробов рода Bacillus.

 

Контроль качества дезинфекции методом отпечатков на тонкий слой плотной питательной среды

Метод отпечатков наиболее приемлем в условиях промышленного ведения животноводства на комплексах, где имеются лаборатории.

Ванны и пробирки с пробами-отпечатками, доставленные в лабораторию, помещают на 16-18 ч в термостат при 37°С. После инкубирования пробы просматривают невооруженным глазом на наличие роста. При отсутствии макроколоний и изменении среды пробы дальнейшим исследованиям не подвергают. В сомнительных случаях, когда отсутствует рост макроколоний, но изменены цвет или прозрачность среды, пробы-отпечатки высушивают на воздухе до полного подсыхания среды, фиксируют над пламенем, окрашивают по Муромцеву и микроскопируют с целью обнаружения микроколоний. Учитывают общее число отпечатков, в которых обнаружен рост микроорганизмов.

 

Исследование с целью выделения микобактерий

Контроль качества заключительной дезинфекции при туберкулезе проводят параллельно двумя методами по выделению стафилококка и микобактерий.

Смывы обрабатывают, как указано выше. Из центрифугата каждой объединенной пробы делают высев на среды для выделения стафилококков, готовят по шесть мазков на узких (1,2x7,5 см) предметных стеклах. Мазки высушивают при комнатной температуре или в термостате 2-3 ч, складывают их по два тыльной стороной и погружают в 8-12%-ный раствор серной кислоты на 15 минут. После этого стекла-мазки берут пинцетом и погружают на 5-10 секунд в стерильную дистиллированную воду, а затем переносят в пробирки со средой Сотона и помещают в термостат при 37-38°С.

Пробы почвы с прилегающей территории и соскобы с поверхности помещений (каждую в отдельности) помещают в колбу, заливают двух- трехкратным количеством дистиллированной воды, взбалтывают и фильтруют через двойной слой марли в узкогорлую колбу вместимостью 200-250 мл. К фильтрату добавляют 2-3 мл ксилола или авиационного бензина, встряхивают 15-20 минут и доливают дистиллированную воду до горлышка. Содержимое отстаивают, 30 мин с целью получения флотата, из которого готовят мазки на узких предметных стеклах.

При наличии роста стафилококков хотя бы в одной исследованной пробе качество дезинфекции признают неудовлетворительным и дальнейшее исследование по выделению микобактерий не проводят. Стекла с мазками извлекают из пробирок на 6-й, 8-й и 12-й день инкубирования, высушивают, фиксируют над пламенем горелки, окрашивают по Циль-Нильсену и микроскопируют для обнаружения микроколоний.

 

Оценка качества дезинфекции

Качество профилактической дезинфекции помещений для получения и содержания молодняка скота и текущей дезинфекции изолированных секций (боксов, скотных дворов) с автономной системой жизнеобеспечения животных признают удовлетворительным при отсутствии роста санитарно-показательных микроорганизмов в 90% исследованных проб.

При профилактической дезинфекции помещений для содержания взрослого поголовья и текущей дезинфекции частично освобожденных от животных или неизолированных помещений допускается выделение санитарно-показательных микроорганизмов из 20% исследованных проб.

Качество заключительной дезинфекции при ее контроле по выделению бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, грибов и микобактерий признают удовлетворительным при отсутствии выделения названных культур во всех исследованных пробах.

При споровых инфекциях качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста Вас. anthracis. При прямом посеве на МПА допускают рост единичных (не более трех а смыве) колоний непатогённых спорообразующих аэробов рода Bacillus.

⇐ Предыдущая80818283848586878889Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: