Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!

Методы лабораторной диагностики чумы

РАЗДЕЛ 2: частная микробиология

ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:

обучающие:

дать понятие о правилах забора, хранения и транспортировки исследуемого

материала при диагностике чумы;

сформировать знания о питательных средах, необходимых диагностики чумы;

обучить методике бактериологической диагностики чумы;

ЗАДАНИЯ.

Надеть противочумный костюм.

Произвести микроскопию препаратов окрашенных по Граму, метиленовой синькой. Результаты зарисовать.

Окрасить препарат люминесцирующей сывороткой.

Изучить морфологию колоний чумы на плотной среде и рост в жидкой питательной среде. Зарисовать.

Поставить ускоренный метод пробы с бактериофагом.

Произвести учет ферментативного ряда.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ.

1. К какой группе инфекций относится чума?

2. Кто является переносчиками и источником чумы?

3. Какие формы заболевания вызывает Yersiniae pestis?

4. Как растет возбудитель чумы на плотных и жидких питательных средах? Какая форма является вирулентной?

5. Какой токсин вырабатывает возбудитель чумы?

ТЕМА: “Микробиологическая диагностика чумы”.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: выявление возбудителя чумы.

Возбудитель чумы: Yersiniae pestis.

Материал для исследования:

1) Содержимое бубонов (бубонная форма);

2) Содержимое язвы или карбункула (кожная форма);

3) Мокрота (легочная форма);

4) Испражнения (кишечная форма);

5) Кровь (при всех формах);

6) Секционный материал (кусочки органов, трупа, кровь, костный мозг);

7) Блохи – содержимое их кишечника;

8) Крысы, мыши и др. погибшие (и болеющие) грызуны – вскрывают, исследуют органы и кровь.

Способы сбора материала:

Содержимое бубонов, язвы или карбункула берут стерильным шприцем. Мокроту, испражнения собирают в стерильную широкогорлую банку. Кровь 3-5мл берут стерильным шприцем и засевают у постели больного в бульон.

Основные методы исследования:

Экспресс-методы: МФА и РНГА;

Микроскопический;

Бактериологический;

Биологический.

День исследования.

1) Микроскопический метод.

Из поступившего материала готовят мазки, высушивают на воздухе, фиксируют в смеси Никифорова 15-20 минут. Мазок окрашивают по Граму и метиленовым синим для выявления биполярности. Наличие в мазках грамотрицательных палочек овоидной формы, а при окраске метиленовым синим - наличие биполярности дает право поставить предварительный диагноз.

2) Бактериологический метод.

Материал засевают в МПБ и МПА. Для подавления роста посторонней микрофлоры в МПА добавляют генцианвиолет (1:50000). В качестве стимуляторов роста добавляют кровь или сульфит натрия рН = 7,0-7,2. Посевы инкубируют в термостате при 28 – 30⁰С.

День исследования.

Изучают рост на плотной и жидкой питательной среде.

На МПБ наблюдается сталактитовый рост (с поверхности среды спускаются рыхлые нити). Из бульонной культуры делают мазки, окрашивают по Граму и метиленовым синим.

На МПА через 18-24 часа под микроскопом при малом увеличении можно видеть колонии в виде «битого стекла». Через 48ч – «кружевные платочки», в центре колонии зернистость.

Подозрительные колонии снимают на скошенный МПА и помещают в термостат для выделения чистой культуры.

Параллельно ставят пробу с фагом. На 2-3 подозрительные в отношении возбудителя чумы колонии наносят чумный бактериофаг. Инкубируют в термостате. Через 10-12ч колонии изменяются – лизируются.

День исследования.

Изучают культуру, выросшую на скошенном МПА. На поверхности агара чумная палочка образует вязкий серовато-белый налет. Затем проводят:

1) микроскопию;

2) изучение биохимических свойств. Сахаролитические свойства проверяют посевом на сахара: глюкозу, сахарозу, маннит, мальтозу, рамнозу, арабинозу;

3) ставят пробу с фагом (посев газоном + дорожка из чумного бактериофага, t = 28⁰С).

День исследования.

Учет результатов.

1. Ферментативные свойства.

	Вид бактерии	Тест
	глюкоза	сахароза	маннит	мальтоза	рамноза	арабиноза
Y. pestis	±	-	+	+	-	+

2. Проводят дифференциацию чумных бактерий от бактерий псевдотуберкулеза.

Признаки	Yersiniae pestis	Yersiniae pseudotuberculosis
Подвижность	-	+
Рост на голодной среде Бессоновой	Не растет	Растет
Лизис чумным б/фагом	+	-
Образование мочевины	-	+
Свертывание молока	-	+

Биологическая проба.

Биопробу ставят на белых мышах.

Мокрота, гной – заражают накожным методом путем втирания в кожу брюшной стенки скальпелем (предварительно кожу эпилируют, обрабатывают стерильным изотоническим раствором натрия хлорида и скарифицируют)

Незагрязненный материал (кровь, содержимое закрытого бубона) вводят животным подкожно или внутрибрюшинно.

Наблюдает в течение 3-9 дней. Павших животных вскрывают. Изучают изменения в органах. Обычно у животных, павших от чумы, увеличены лимфоузлы, в органах геморрагические и некротические участки. Печень и селезенка увеличены. При вскрытии из органов и крови делают мазки-отпечатки на специальные среды.

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЧУМЫ

I. PESTIS