 |
Получение накопительных культур, выделение чистых культур
|
|
|
|
К физическим методам, следует отнести регуляцию роста температурой, тепловую и ультразвуковую обработку, ультрафиолетовое облучение и др. Можно использовать также и особенности некоторых других физических свойств данного микроорганизма, например, его размеры, подвижность, что позволяет отделять данный микроорганизм от других членов популяции.
Получение накопительной культуры бактерий, обладающих скользящим типом движения. Пробы предварительно разведенногоисследуемого биологического материала засевают петлей в конденса-
ционную воду скошенной агаризованной питательной среды в пробирках. Посевы инкубируют при оптимальной температуре.
Использование освещения для получения культур цианобактерий. Такие виды легко выделяются из пресной воды и морских осадков. Для получения накопительных культур, образцы инкубируют при
25 °С и постоянном освещении от 500 до 3000 лк.
Инкубация при низкой температуре для получения культур психрофильных бактерий. Поскольку низкая температура способствует задержке роста многих бактерий, на первом этапе проводят ин-
кубирование при температурах 0 – 5 °С. Чашки с образцами инкубируют при температуре ниже 5 °С.
При использовании химических методов применяют токсические вещества, которые убивают или подавляют рост оставшейся части популяции, не влияя на выделяемый микроорганизм. Кроме того,
эти вещества могут быть источниками питания, используемыми преимущественно отдельными бактериями в смешанной популяции.
Условия инкубирования в кислой среде для выделения культур лактобацилл. Для выделения бактерий из сыров, высев производится на среду, которая за счет ацетатной буферной системы имеет рН5,3. В этом случае Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum способны образовывать колонии.
|
|
|
Ингибирование роста пенициллином для получения культур микоплазм. Поскольку микоплазмы лишены клеточной стенки, ониустойчивы к высоким концентрациям пенициллина, который подавля-
ет рост многих бактерий, имеющих клеточную стенку. Антибиотик, добавленный к питательной среде в концентрации 100 – 200 Е/мл, позволяет избавиться от посторонней микрофлоры.
Разбавленная среда для получения культур Sphaerothilus. Бактерии данного рода, образующие чехлы, встречаются в загрязенныхсточных водах, открытых водоемах, где формируют слизистые «пря-
ди», прикрепленные к погруженным в воду предметам. Процедура получения накопительных культур основана на их способности к росту при низком содержании питательных веществ.
Целлюлоза как субстрат для цитофаг. Для получения накопительных культур цитофаг, разлагающих целлюлозу, на поверхность основного минерального агара помещают кусочки фильтровальной бумаги. На бумагу кладут частицы почвы или растительного материалаи инкубируют чашки при комнатной.
Бактериальные клетки как субстрат для миксобактерий. Некоторые виды миксобактерий способны с помощью литических ферментов лизировать клетки других бактерий и использовать высвобождающиеся при этом вещества для своего роста. Бактериальные клетки, используемые в качестве субстрата (например, Enterobacteriaceae), используют в виде густой суспензии, которую наносят мазком на поверхность водно-агаровой среды. На один конец мазка помещают 2 – 3 частицы почвы или кусочки растительного материала.
Биологические методы включают использование специфических хозяев выделяемого микроорганизма, а также преимуществ некоторых свойств патогенных микроорганизмов.
Получение накопительной культуры патогенных для животных организмов. Патогенные для животных бактерии можно выделить,заражая восприимчивое животное-хозяин смешанной культурой исследуемого материала, в котором предполагается его присутствие. Винфицированном животном патогенный микроорганизм часто преобладает и обнаруживается в крови и тканях в виде чистой культуры.Например, чистую культуру пневмококков можно получить через4 – 6 часов после внутрибрюшинного введения мыши 1 мл эмульгированной мокроты, содержащей S.pneumoniaе.
|
|
|
Бактериальный паразитизм бделловибрионов. Способность бделловибрионов прикрепляться к различным грамотрицательным бактериям, проникать через их клеточную стенку и размножаться в
периплазматическом пространстве с последующим лизисом бактерий. Надосадочную жидкость, полученную после центрифугирования растворенной в воде почвы, пропускают через мембранные фильтры с диаметром до 0,45 мкм. Полученный фильтрат смешивают с суспензией клеток-хозяев (пр-тели Pseudomonadaceae, Enterobacteriaceae). В составе полужидкой питательной среды, смесь наслаивают на поверхность агаризованной среды в чашках Петри. Области лизиса, образованные
бделловибрионами (в отличие от бактериофагов), появляются через 2 – 3 суток.
Симбиоз растений с Rhizobium. Клубеньки, образуемые на корнях бобовых растений представляют собой природную накопительную культуру симбиотических азотфиксирующих бактерий. Корни бобо-
вых растений, содержащие клубеньки, промывают и отделяют часть корня с клубеньками. После поверхностной стерилизации (используя сулему, этанол) корень помещают в воду, раздавливают пинцетом в одной чашке Петри, 1 – 2 петли такой суспензии переносят в следующую чашку. К каждому разведению добавляют расплавленный и остуженный агар с маннитом.
Чистая культура как уже говорилось, представляет собой потомство одной микробной клетки. Выделение производят путем изолирования отдельных микробных клеток микроорганизма одним из специальных приемов. Основным метолом выделения чистых культур микроорганизмов до настоящего времени является метод, предложенный Р.Кохом. По методу Коха разбавленную суспензию накопительной культуры высевают «истощающим штрихом» на поверхность плотной, как правило, дифференциально-диагностической питательной среды с целью получения из отдельных клеток суспензии изолированных колоний. Выросшая колония обычно состоит из клеток, представляющих собой потомство одной клетки и является чистой культурой
|
|
|
Сходство и различие клеток эукариот и прокариот.
Цитологические признаки. Прокариоты мельче эукариотов, доходят до 0.5 мкм. Не имеют офформленного ядра и автономных органоидов.
Рибосомы. У про 70S, расперделены по всей ЦП, у эу 80S, локализованы в ЭПР. Медиментация рРНК у про – 5, 16, 23; у эу – 5, 5,8, 18, 28
Жгутики. У про значительно меньше – 0,01-0,02мкм. У эу – 0,2 мкм диаметр.
Гены. У про всего одна – две кольцевые хромосомы. Иногда бывают линейные. Горизонтальный перенос генов. Нет классического полового процесса, как у эу. Нет классического митоза.
Метаболизм. У про дых цепь и ФС ассоциированы с плазмалеммой и ее выростами. Могут быть хемолитотрофами. Умеют фиксировать азот. Есть метаногенез и аноксигенный фотосинтез.
Про имеют пептидогликановую кл стенку, у эу она в основном из целлюлозы или хитина. Поступление веществ у обоих – трансмембр транспорт или диффузия. Но у эу есть еще и эндоцитоз.
Морфология прокариот.
Прокариоты отличаются от эукариот по ряду основных признаков:
1.Отсутствие истинного дифференцированного ядра (ядерной мембраны).
2.Отсутствие развитой ЭПР, АГ.
3.Отсутствие митохондрий, хлоропластов, лизосом.
4.Неспособность к эндоцитозу (захвату частиц пищи).
5.Клеточное деление не связано с циклическими изменениями строения клетки.
6.Значительно меньшие размеры (как правило). Большая часть бактерий имеет размеры 0,5- 0,8 мкм.
По форме выделяют следующие основные группы микроорганизмов:
1.Шаровидные или кокки (с греч.- зерно).
2.Палочковидные.
3.Извитые.
4.Нитевидные.
кокки по характеру взаиморасположения после деления подразделяются на ряд вариантов:
1.Микрококки. Клетки расположены в одиночку. Входят в состав нормальной микрофлоры, находятся во внешней среде. Заболеваний у людей не вызывают.
2.Диплококки. Деление этих микроорганизмов происходит в одной плоскости, образуются пары клеток. Среди диплококков много патогенных микроорганизмов- гонококк, менингококк, пневмококк.
|
|
|
3.Стрептококки. Деление осуществляется в одной плоскости, размножающиеся клетки сохраняют связь (не расходятся), образуя цепочки. Много патогенных микроорганизмов- возбудители ангин, скарлатины, гнойных воспалительных процессов.
4.Тетракокки. Деление в двух взаимоперпендикулярных плоскостях с образованием тетрад (т.е. по четыре клетки). Медицинского значения не имеют.
5.Сарцины. Деление в трех взаимоперпендикулярных плоскостях, образуя тюки (пакеты) из 8, 16 и большего количества клеток. Часто обнаруживают в воздухе.
6.Стафилококки (от лат.- гроздь винограда). Делятся беспорядочно в различных плоскостях, образуя скопления, напоминающие грозди винограда. Вызывают многочисленные болезни, прежде всего гнойно - воспалительные.
|
|
|
