 |
Лабораторная диагностика бактериальной дизентерии.
|
|
|
|
Дизентерия — антропонозное инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода Shigella, характеризующееся язвенным поражением толстого кишечника и общей интоксикацией организма. Классификация возбудителей дизентерии (шигелл) представлена в таблице 12, методы микробиологической диагностики в схеме 13.
Таблица 13. Классификация шигелл
| Виды шигелл | Серовары шигелл |
| Shigella dysenteriae | 1-12 |
| Shigella flexneri | 1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 3b, 4a, 4b, 5,6, var X, var Y |
| Shigella boydii | 1-18 |
| Shigella sonnei | - |
Схема 12. Микробиологическая диагностика дизентерии
|
Микроскопический метод при дизентерии не применяется ввиду морфологического сходства шигелл с другими энтеробактериями.
Бактериологический метод является основным методом лабораторной диагностики дизентерии. Исследуемый материалзасевают на среды Плоскирева и Эндо в чашках Петри, а также на селенитовую среду для накопления, с которой через 16— 18 ч делают пересев на указанные плотные питательные среды. Посевы выращивают в термостате при 370 С 18 — 24 часов.
На второй день изучают характер колоний. Бесцветные лактозоотрицательные гладкие колонии шигелл пересевают на одну из полиуглеводных сред (Олькеницкого, Ресселя, Клиглера) для накопления чистой культуры. На 3-й день учитывают характер роста на полиуглеводной среде, а также пересевают материал на дифференциальные среды (Гисса и др.) для биохимической идентификации выделенной культуры. Определяют антигенную структуру выделенной культуры с помощью ОРА с целью ее идентификации до уровней вида и серовара. На 4-й день учитывают результаты биохимической активности (табл. 14).
|
|
|
Таблица 14. Биохимические свойства шигелл
| Виды шигелл | Ферментация | индол | |||||
| Глюкозы | лактозы | маннита | дульцита | ксилозы | орнитина | ||
| S. dysenteriae | К | - | - | - | - | - | - |
| S. flexneri | К | - | к | - | - | - | - |
| S. boydii | К | - | к | - | ± | - | - |
| S. sonnei | К | ± | к | к + | ± | к | + |
Обозначения: «к» – ферментация субстрата с образованием кислоты, «+» - наличие признака, «-«- отсутствие признака, «±» - непостоянный признак.
Шигеллы, в отличие от эшерихий, являются неподвижными микроорганизмами, они не ферментируют лактозу, глюкозу разлагают без образования газа, не декарбоксилируют лизин. Для серотипирования сначала ставят РА на стекле со смесью сывороток против преобладающих в данной местности видов и вариантов шигелл, а затем РА на стекле с монорецепторными видовыми сыворотками. Определяют также чувствительность выделенной культуры к поливалентному дизентерийному бактериофагу и антибиотикам. С эпидемиологической целью определяют фаговар и колициновар выделенных шигелл. Одним из свойств шигелл является их способность вызывать кератит у морских свинок (кератоконъюнктивальная проба)
Серологический метод. Для определения антител в крови больных дизентерией (обычно хронической формой) применяют РНГА с эритроцитарными шигеллезными диагностикумами. Диагностические титры: к шигеллам Флекснера у взрослых - 1:400, у детей до 3 лет - 1:100, у детей старше 3 лет - 1:200, к остальным шигеллам - 1:200. Реакцию ставят, как правило, повторно с сывороткой крови, взятой не менее чем через 7 дней; диагностическое значение имеет нарастание титра антител в четыре и более раз.
Экспресс-методы при дизентерии - прямая и непрямая РИФ, реакция ко-агглютинации, ИФА, РНГА с антительными эритроцитарными диагностикумами для быстрого обнаружения шигелл в исследуемом материале (обычно в фекалиях), а также ПЦР.
|
|
|
Самостоятельная работа студентов
1. Изучить основные этапы выделения чистой культуры шигелл. Учесть посевы на среды Плоскирева, Левина, Олькеницкого (демонстрация). Отметить наличие лактозоотрицательных бесцветных колоний на средах Плоскирева, Левина.
2. Провести контроль чистоты выделенной культуры шигелл. Со среды Олькеницкого приготовить мазок, окрасить его по Граму и промикроскопировать. Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные препараты возбудителей дизентерии Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.sonnei - грамотрицательные палочки с закругленными краями;
3. Идентификация выделенной культуры шигелл:
· по антигенным свойствам – постановка и учет РА на стекле со смесью видовых агглютинирующих сывороток Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh. sonnei и культурой, выделенной на среде Олькенипкого. Учет РА на стекле с видовыми дизентерийными сыворотками;
· по ферментативным свойствам - учет биохимической активности и фаголизабельности выделенной культуры шигелл, (демонстрация).
4. Колициногенотипирование. Учесть пробу по определению колициногенотипа выделенной культуры (демонстрация). Техника постановки описана в разделе «Генетика микроорганизмов».
5. Определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам методом бумажных дисков (демонстрация).
6. Изучить биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:
· агглютинирующие адсорбированные сыворотки к шигеллам Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh.sonnei. Используются для постановки реакции агглютинации при идентификации шигелл.
· дизентерийный бактериофаг таблетированный. Используется для профилактики и лечения дизентерии.
· диагностикумы эритроцитарные из шигелл Флекснера и Зонне. Используются для постановки РНГА при серодиагностике дизентерии.
· вакцина дизентерийная ШИГЕЛЛВАК, из липополисахарида шигелл Зонне.
|
|
|
