Грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов

ЗАНЯТИЕ 2

Тема: СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ И МЕТОДЫ ЕЕ ИЗУЧЕНИЯ. СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ

Цель занятия: изучить структурные особенности прокариотических микроорганизмов, овладеть сложными методами окраски для выявления структурных компонентов бактериальной клетки

 

План занятий

1. Особенности строения бактериальной клетки (см. Атлас А.А.Воробьева стр 28, рис 3,4) и ее отличия от клеток высших организмов.

2. Основные структуры: клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, нуклеоид (строение и химический состав).

3. Понятие о сложных методах окраски.

4. Особенности строения клеточной стенки бактерий. Грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы. Окраска по Граму, принцип и этапы окраски, значение для классификации бактерий

5. Механизм, этапы и результат окраски кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена. Механизм, этапы и результат окраски по Нейссеру, Бурри-Гинсу, Ожешке (Ауески), Романовскому-Гимзе

6. Капсула бактерий, ее назначение, методы выявления.

7. Жгутики, строение, функции, методы выявления Исследование микробов в живом состоянии. Характеристика методов «висячей» и «раздавленной» капли.

8. Включения у бактерий, их выявление.

9. Споры бактерий, функции, методы выявления.

10. Бактериоскопический метод диагностики.

Оформление протокола лабораторных занятий (выполнить дома):

1. Нарисовать схематическое строение клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий (см. Атлас А.А.Воробьева стр 28, рис. 3.5).

2. Заполнить в тетради таблицы 2.1. (см. Атлас А.А.Воробьева стр 20) и 2.2.;

3. Зарисовать самостоятельно приготовленный микропрепарат из исследуемого материала (окраска по методу Грама);

4. Зарисовать демонстрационные препараты.

Задания для выполнения лабораторной работы

1. Приготовить мазок из материала, окрасить по методу Грама, изучить под микроскопом, зарисовать и записать ход работы и наблюдения.

 

Дополнительный материал

 

Различия в окраске по Граму связаны с некоторыми особенностями строения клеточной стенки бактерий. В однослойной клеточной стенке грамположительных микробов имеется несколько рядов пептидогликана (до 80 % от массы клеточной стенки), поры которого при обработке этиловым спиртом сужаются и препятствуют выходу комплекса, образуемого при взаимодействии красителя генцианового фиолетового с компонентами клетки в присутствии йода, входящего в состав люголя. Также в поверхностном слое клетки находится магниевая соль рибонуклеиновой кислоты, которая в присутствии йода в кислой среде образует прочное соединение с основным красителем – генциановым фиолетовым. Поэтому грамположительные микробы прочно удерживают первый наносимый краситель – генциан-виолет и окрашиваются в фиолетовый цвет.

У грамотрицательных микроорганизмов имеется двуслойная клеточная стенка. Во внутренний слой входят всего один-два ряда пептидогликана. Верхний слой представлен наружной мембраной, включает фосфолипиды, белки и липополисахарид (ЛПС). Отсутствует магниевая соль рибонуклеиновой кислоты. В связи с этим не образуется прочного соединения компонентов клеточной стенки с основным красителем. Они легко обесцвечиваются этиловым спиртом. Поэтому клетки бактерий окрашиваются в цвет последнего наносимого на их поверхность красителя (водный фуксин) – в красный.

Техника окраски по Граму:

1. Фиксированный мазок кладут на рельсы и накрывают бумажкой по Синеву с генцианфиолетовым, заливают ее водой или наливают на мазок генциан-виолетом через фильтровальную бумагу. Экспозиция 2 мин.

2. Снимают бумажку и наливают раствор Люголя на 1 -2 минуты.

3. Сливают Люголь в кювету, на мазок наливыют с 96˚ этиловый спирт до прекращения отхождения «струею» красителя, примерно 10-15 сек.

4. Промывают проточной водой, стряхивают воду.

5. Наносят фуксин Пфейффера. Экспозиция 2 мин.

5. Промывают проточной водой и сушат в вертикальном положении.

6. Микроскопируют с помощью иммерсионной системы микроскопа.

Отличительные признаки

грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов

Таблица 2.1.

№	Признак	Грамположительные микробы	Грамотрицательные микробы
	Представители прокариот	1 - шаровидные микробы, за исключением менингококков и гонококков; 2 - дифтерийные палочки; 3 - туберкулезные палочки; 4 - спорообразующие палочки; 5 - актиномицеты.	1 - гонококки, менингококки; 2 - неспорообразующие палочко-видные микробы; 3 - риккетсии; 4 - спирохеты; 5 - микоплазмы.
	Строение клеточной стенки (КС)	Однослойная клеточная стенка, состоящая из 6-20 рядов пептидогликана, тейхоевых кислот, образующих соединения с магнием	Двухслойная клеточная стенка: внутренний слой – пептидогликан, наружный слой - фосфолипиды и белки, в котором крепится комплекс липополисахаридов (ЛПС), а так же находятся белки и липопротеиды
	Магниевая соль рибонуклеиновой кислоты	В присутствии йода в кислой среде образует прочное соединение с генциановым фиолетовым	Отсутствует
	Цитоплазматическая мембрана (ЦПМ)	Не связана с КС, имеет многочисленные выросты в цитоплазму	Тесно связана с КС, имеет незначительное число выростов в цитоплазму
	Цитоплазма	рН более кислая (2-3)	рН около 5
	Соотношение РНК и ДНК	РНК в 7 – 8 раз больше, чем ДНК	Одинаковое количество РНК и ДНК
	Строение жгутикового аппарата	Одна пара колец для закрепления жгутиков на уровне ЦПМ	Две пары колец: одна расположена на уровне ЦПМ; вторая – на уровне фосфолипидного бислоя КС
	Спорообразование	Да	Нет
	Токсинообразование	Образуют экзотоксины	Образуют экзо- и эндотоксины (ЛПС)
	Основные антигены	Тейхоевые кислоты	Соматический О-антиген (ЛПС)
	Действие лизоцима	(+), образуют протопласты	(-), иногда (+), образуют сферопласты
	Действие пенициллина	(+)	(-), иногда (+)

 

Таблица 2.2.

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: