 |
Методы окраски микроорганизмов.
|
|
|
|
Мотивация темы занятия.
Микроскопический метод исследования позволяет обнаружить микроорганизм непосредственно в материале, взятом у пациента, изучить морфологические особенности микроорганизмов. Как правило, лабораторная диагностика инфекционного заболевания начинается с отбора проб биологического материала, приготовления мазков и их окраски. Правильно приготовленный и окрашенный бактериологический мазок даёт возможность не только определить морфологические характеристики возбудителя, но часто поставить предварительный диагноз инфекционного заболевания.
I. Письменно ответьте на вопросы:
1. Какой метод лабораторной диагностики инфекционных болезней позволяет обнаружить возбудителя непосредственно в материале, взятом у больного?
2. Что такое тинкториальные свойства бактерий?
3. С какой целью проводится окраска бактерий по Граму?
4. В чём заключается различие в строении клеточной стенки у грамположительных и грамотрицательных бактерий?
5. Как взаимосвязаны результаты окраски бактерий по Граму и особенности строения их клеточной стенки?
II. План для самоподготовки нового материала.
1. Изучение методов окраски бактерий.
2. Анализ результатов простого метода окраски по иллюстрациям.
3. Анализ результатов окраски по Граму по иллюстрациям.
2.1. Вопросы для анализа результатов окрашивания бактерий простым методом:
1) Сколько цветов Вы видите в препарате?
2) Сколько красителей применялось для окраски препарата?
3) Найдите микроорганизмы в препарате.
4) Как они расположены?
5) Какую форму имеют микроорганизмы?
3.1. Вопросы для анализа результатов окрашивания:
1) Сколько цветов Вы видите в препарате?
|
|
|
2) Сколько красителей применялось для окраски препарата?
3) Найдите микроорганизмы в препарате.
4) Как они расположены?
5) Какую форму имеют микроорганизмы?
6) Какую особенность строения имеют эти микроорганизмы?
Результаты окраски бактерий
 |
Результаты окраски бактерий
 |
ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
СТУДЕНТОВ
1. Запишите в тетрадь алгоритм окраски простым методом.
2. Зарисуйте мазок №1 «Гонококк в гное». окрашенный простым методом метиленовым синим.
3. Ответьте на вопросы. Ответы запишите под соответствующим номером. В случае затруднения найдите нужные для ответа сведения в «Информационном блоке для студентов» на стр. 7
Мазок №1 Мазок №1 «Гонококк в гное».
|
|
3
|
|
4. Запишите алгоритм окраски мазка по Граму.
5. Зарисуйте мазок №2 «Стрептобактерии сибирской язвы», окрашенный по Граму.
6. Ответьте на вопросы. Ответы запишите под соответствующим номером. В случае затруднения найдите нужные для ответа сведения в «Информационном блоке для студентов» на стр. 8
|
сибирской язвы»
|
|
|
7. Проверьте свои ответы по эталонам ответов, которые получите у преподавателя. Проанализируйте Ваши ошибки с помощью таблицы №1
Таблица №1
| Если ошибка в ответе на вопрос № …. | Вам нужно |
| …. внимательно рассмотреть схему №1 «Методы окраски микроорганизмов» на стр. 7. Обратите внимание на классификацию методов окраски по количеству красителей. | |
| 2, 3 | …. внимательно рассмотреть рисунки №№ 1, 2 на стр. 3, 4 |
| 4, 5, 6 | …. повторить раздел лекции по теме «Морфология бактерий» или учебника на стр. 15 – 16 «Строение клеточной стенки». |
Внимание!
|
|
|
При подготовке домашнего задания обратите особое внимание на те разделы темы, в которых Вы сделали ошибки.
2. Запишите домашнее задание:
1) Повторите строение микробной клетки по материалам лекции или по учебнику. Тема лекции «Морфология бактерий»
Учебник - гл. 2.2 «Морфология и ультраструктура бактерий» – стр. 13 – 19.
2) Устно ответьте на вопросы:
Ø какие группы бактерий по форме клеток Вы знаете?
Ø как располагаются в мазке диплококки, стрептококки, сарцины, стафилококки?
Ø какие группы палочковидных бактерий по спорообразованию выделяют в бактериологии? Приведите примеры возбудителей из каждой группы.
Ø какую роль выполняет спора у бактерий?
Ø чем обеспечивается устойчивость споры во внешней среде?
Ø какое строение имеет оболочка бактерий?
Ø какое значение имеет капсула в развитии инфекционного заболевания? Приведите примеры капсулообразующих бактерий.
Ø что такое включения?
Ø у каких бактерий наличие включений является важным диагностическим признаком?
Ø назовите органы подвижности бактерий. Приведите примеры подвижных бактерий.
Информационный блок
для самостоятельной работы студентов
Часть 1.
Методы окраски бактерий.
Окраска микроорганизмов имеет большое диагностическое значение, так как даёт возможность установить морфологические и тинкториальные особенности микроба, чего в некоторых случаях достаточно для постановки микробиологического диагноза. Для окрашивания микроорганизмов применяют простые и сложные методы окраски
(смотрите схему №1 «Методы окраски микроорганизмов»).
Схема №1
Методы окраски микроорганизмов.
При простых способах окраски применяют один краситель – раствор метиленового синего или фуксина. Простым способом пользуются для обнаружения микроорганизмов, определения их количества, формы и расположения (рисунок №1).
При сложных способах окраски используют два красителя, один из которых – основной, а другой – дополнительный. Кроме того, при сложных методах применяются дополнительные химические реактивы. Сложные методы окраски применяются для выявления структурных элементов микробной клетки или для дифференциально-диагностических целей (рисунок №2, №3).
|
|
|
Часть 2.
Простой метод окраски.
Простой способ окраски используют для обнаружения микроорганизмов, определения их количества, формы и расположения в мазке. Обычно используют раствор красителя метиленового синего. В препаратах, окрашенных простым методом, фон окрашивается значительно слабее, чем клеточные элементы и бактерии (Рис. №1).
АЛГОРИТМ ПРОСТОГО МЕТОДА ОКРАСКИ
1. Поместить препарат на подставку для окрашивания мазком кверху.
2. Нанести на мазок 1-2 капли раствора метиленового синего.
3. Выдержать краситель на мазке 3 минуты.
4. Промыть мазок водой.
5. Высушить мазок на воздухе.
Часть 3.
Метод окраски по Граму.
Окраска по Граму даёт возможность разделить все бактерии на две большие систематические группы – грамположительные (отдел Firmicutes) и грамотрицательные (отдел Gracilicutes) - в соответствии со строением клеточной стенки. Тинкториальные свойства бактерий учитываются при определении вида бактерий в ходе лабораторной диагностики инфекционных болезней. При окраске по методу Грама применяются два красителя:
основной – генциановый фиолетовый и
дополнительный – фуксин.
Толстостеночные бактерии хорошо удерживают генциановый фиолетовый и сохраняют фиолетовый цвет до конца окрашивания. Их называют грамположительными (Г +). Тонкостеночные бактерии легко обесцвечиваются, поэтому мазок докрашивают дополнительным красителем – фуксином. По окончании окраски они имеют розовый цвет и называются грамотрицательными (Г -). (Рисунки №2 и №3).
АЛГОРИТМ ОКРАСКИ ПО ГРАМУ
(модификация по Синёву)
1. Поместить препарат на подставку для окрашивания мазком кверху.
2. Положить на мазок фильтровальную бумажку, пропитанную раствором генцианового фиолетового.
|
|
|
3. Нанести на бумажку 2-3 капли воды.
4. Выдержать краситель на мазке 2 минуты.
5. Удалить фильтровальную бумажку пинцетом в специальную ёмкость.
6. Нанести на мазок 1 – 2 капли раствора Люголя на 2 мин.
7. Обесцветить мазок, промыв в спирте.
8. Промыть препарат водой.
9. Нанести на мазок 1 – 2 капли раствора фуксина на 2 минуты.
10. Промыть мазок водой.
11. Высушить препарат на воздухе.
Задачи самоконтроля.
1 вариант.
Задание: запишите № варианта Вашего задания. Прочитайте вопрос или задачу. Запишите № задания, напротив запишите ответ.
1. Кишечная палочка – грамотрицательная. К какой систематической группе по строению клеточной стенки она относится?
2. Вам нужно быстро определить наличие, форму и расположение бактерий в мазке. Какой способ окраски мазка Вы используете?
3. 
|
2 вариант.
Задание: запишите № варианта, прочитайте вопрос или задачу. Запишите № вопроса или задачи, напротив запишите ответ.
1. Стрептококк – грамположительный. К какой систематической группе по строению клеточной стенки он относится?
2. Какой метод окраски используется для определения толщины клеточной стенки бактерий?
3.
|
|
|
|
