Техника выполнения окраски по Романовскому-Гимза.

Занятие №3

Тема: Про- и эукариоты. Риккетсии. Микоплазмы. Хламидии. Спирохеты. Актиномицеты.

Цель занятия: изучить прокариотические микроорганизмы - актиномицеты, спирохеты, микоплазмы, риккетсии и хламидии; освоить сложные методы окраски для обнаружения спирохет и риккетсий.

План занятия (вопросы для обсуждения):

1. Понятие об эукариотах и прокариотах, представители. Отличительные признаки эукариотических и прокариотических клеток.

2. Риккетсии. Систематическое положение. Сходство с бактериями и вирусами. Морфологические типы риккетсий. Патогенные представители. Способы окраски.

3. Микоплазмы. Положение среди микроорганизмов. Особенности морфологии, значение в патологии человека.

4. Хламидии. Положение среди микроорганизмов. Морфология, патогенные представители.

5. Морфология спирохет, классификация, структура, патогенные представители. Методы изучения спирохет. Способы окраски.

6. Актиномицеты. Положение среди микроорганизмов. Особенности морфологии, значение в патологии человека.

 

Оформление протокола лабораторного занятия (сделать дома)

1. Заполнить сравнительную таблицу 3.2 промежуточных групп м/о (Актиномицеты, Микоплазмы, Хламидии, Риккетсии, Спирохеты) по следующим признакам: размеры, форма, особенности строения, методы окраски и результаты, методы выделения, окраска по Граму, особенности жизненного цикла, вызываемые ими заболевания, сходство с другими промежуточными группами.

2. Зарисовать:

- хламидий (жизненный цикл) из атласа Воробьёва стр. 100 рис. 3.134

- риккетсии стр. 97 рис 3.129 или стр. 98 рис 3.131

- актиномицеты (со стенда лаборатории)

- спирохеты (три сектора)

 

 

3. Переписать таблицу 3.1 «Основные различия клеток прокариотов и эукариотов» +

рисунок и схему «Мир микроорганизмов и промежуточные морфо-физиологические формы»

 

Задания для выполнения лабораторной работы

1. Изучить под микроскопом и зарисовать демонстрационные препараты про­кариотических микроорганизмов: актиномицетов, спирохет, риккетсий.

2. Приготовить мазок из зубного налета, окрасить по методу Бурри-Гинса, изучить под микроскопом и зарисовать обнаруженные формы микроорга­низмов.

3. Приготовить мазок актиномицетов, окрасить по Граму, промикроскопировать и зарисовать.

 

Дополнительный материал

 

Окраска по методу Романовского-Гимзы относится к сложным универ­сальным методам окраски микроорганизмов, позволяет выявить ядерные элементы и включения у простейших.

При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а яд­ра - красно-фиолетовый. Этот метод используют также для обнаружения риккетсий, хламидий, спирохет, и определения форменных элементов крови.

Техника выполнения окраски по Романовскому-Гимза.

- на мазок нанести рабочий раствор красителя (смесь метиленового синего, эозина и азура - 2 капли на 1 мл дистиллированной воды) на 10-20 мин;

- промыть водой и высушить.

 

Боррелии - возбудители возвратного тифа (Borrelia recurrentis) окрашиваются в фиолетовый, эритроциты крови и цитоплазма лейкоцитов - в розово-красный, ядра лейкоцитов - в фиолетовый цвет. Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый цвет, лептоспиры - в розово-сиреневатый цвет.

Окраска по Бурри (Вurri): на тщательно обезжиренном предметном стекле каплю исследуемой культуры микробов смешивают с каплей китайской туши, или в капле туши эмульгируют микроорганизмы с твердой питательной среды, затем краем другого стекла тонким, ровным слоем распределяют по поверхности пред­метного стекла, как это делается при исследовании крови, высушивают на воздухе и исследуют с иммерсионной системой под микроскопом. На равномерно серо-черном фоне бледная спирохета имеет вид серебристо-белой спирали, у Streptococcus pneumoniae видна выраженная капсула

 

Окраска по Бурри-Гинсу: Высушенный на воздухе препарат, приготовленный по Бурри (см. выше), фиксируют, нанося 3-4 капли спира и сжигая его на стекле. На остывшее стекло наливают фуксин Пфейффера на 3-5 мин, промывают мазок водой, высушивают на воздухе и исследуют с иммерсионной системой под микроскопом. В результате окраски видны бактрии окрашенные в красных цвет, окруженные бесцветной капсулой на тушевом (черно-красном) фоне препарата.

 

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: