 |
Контроль исходного уровня знаний.
|
|
|
|
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет имени
Профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения
Российской Федерации
ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России
Кафедра микробиологии им. доцента Б.М. Зельмановича
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ДЛЯ ОБУЧАЮЩИХСЯ
по дисциплине « Микробиология, вирусология – микробиология
полости рта »
для специальности 060201 – Стоматология (очная форма обучения)
К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 15
ТЕМА: «Микробиологическая диагностика менингококковых
И гонококковых инфекций. Контрольная работа: Патогенные кокки (стафилококки, стрептококки, энтерококки, нейссерии»
Утверждены на кафедральном заседании
протокол № ____от «___»____________20__ г.
Заведующий кафедрой
к.б.н., доцент_________________Перьянова О.В.
Составитель:
к.б.н., доцент_________________Бакшеева С.С.
Красноярск
Занятие № 15
Тема: « Микробиологическая диагностика менингококковых и гонококковых инфекций. Контрольная работа: Патогенные кокки (стафилококки, стрептококки, энтерококки, нейссерии) »
2. Форма организации занятия: практическое.
3. Значение изучения темы. Проблема гонореи и борьба с ней продолжает оставаться актуальной. При этом возникает ряд не только лечебно-профилактических вопросов, но и необходимость организационных мероприятий. Успешная борьба с гонореей находится в прямой зависимости от ранней диагностики данного заболевания. Это большая проблема требует участия не только врача-венеролога, но и специалистов смежных специальностей.
|
|
|
В России регистрируются вспышки менингококковой инфекции, протекающей в тяжелых формах менингококкового сепсиса, менингита, менингококкцемии с бактерионосительством среди окружающих от 5 до 70%. Наибольшую эпидемиологическую опасность представляют менингококки группы В.
Цели обучения:
- общая: обучающийся должен обладать ОК-1,ПК-2,ПК-7,ПК-22,ПК-25,ПК-50,ПК-51.
- учебная:
знать:
- правила работы в микробиологической лаборатории, технику безопасности при работе с микроорганизмами, реактивами и приборами;
- классификацию, морфологию и физиологию микроорганизмов и вирусов; их биологические и патогенные свойства, влияние на здоровье населения;
- особенности формирования процессов симбиоза организма человека с микробами, роль резидентной микрофлоры организма в развитии оппортунистических болезней;
- молекулярно-генетические основы патогенности и антибиотикорезистентности микроорганизмов, механизмы и методы их изучения;
- сущность микробиологических, молекулярно-генетических, иммунологических методов диагностики инфекционных заболеваний, области их применения, принципы интерпретации полученных результатов;
- применение основных антибактериальных, противовирусных и иммунобиологических препаратов;
- влияние физических и химических факторов на микроорганизмы как основа деконтаминации; микробиологические аспекты развития внутрибольничных инфекций и мер борьбы с ними;
- особенности биологии стафилококков, определяющие их роль в инфекционной патологии человека;
- патогенез развития стафилококковых инфекций;
- материал и методы микробиологической диагностики стафилококковых инфекций;
- специфическую профилактику и терапию стафилококковых инфекций;
- тактику этиотропной антимикробной химиотерапии на современном этапе.
уметь:
- соблюдать технику безопасности и правила работы с материалом, представляющим биологическую опасность;
|
|
|
- обосновать выбор материала и методов микробиологической диагностики с учетом биологии возбудителя, патогенеза и основных клинических проявлений заболевания; интерпретировать полученные результаты;
- использовать полученные знания по резистентности микроорганизмов для определения тактики антимикробной терапии; применить принципы экстренной профилактики и антитоксической терапии пациентов;
- анализировать действие лекарственных средств – антибиотиков и иммунобиологических препаратов – по совокупности их свойств и возможность их использования для терапевтического лечения пациентов различного возраста;
- использовать полученные знания по влиянию физических и химических факторов на микроорганизмы в профилактике внутрибольничных инфекций и борьбы с ними;
- провести забор и посев отделяемого из носа с целью выявления бактерионосительства S.aureus;
- готовить фиксированные мазки из гноя, чистых культур, окрашивать их по Граму, микроскопировать их и интерпретировать полученные результаты;
- учесть и оценить результаты метода секторных посевов исследуемого материала;
- учесть и оценить результаты изучения биохимических свойств;
- учесть и оценить результаты определения метициллинорезистентности и антибиотикограммы культур стафилококков;
- учесть и оценить результаты фаготипирования стафилококков;
- определить видовую принадлежность исследуемой культуры;
- заполнить бланк-направление и бланк-ответ из бак.лаборатории.
владеть:
- основными методами и способами дезинфекции, стерилизации и антисептической обработки рук, инструментария и оборудования во избежание инфицирования врача и пациента;
- основными навыками работы с современными приборами, применяемыми для диагностики инфекционных заболеваний;
- навыками интерпретации результатов микробиологических, молекулярно-генетических методов диагностики инфекционных заболеваний;
- навыками интерпретации определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам с целью выбора средств рациональной терапии;
- алгоритмом подбора иммунобиологических препаратов с целью профилактики и терапии инфекционных заболеваний.
|
|
|
5. План изучения темы:
Контроль исходного уровня знаний.
Собеседование по контрольным вопросам.
1. Классификация и морфо-биологические свойства менингококков, гонококков.
2. Факторы вирулентности менингококков и гонококков.
3. Экология, особенности эпидемиологии, патогенеза менингококковых и гонококковых инфекций.
4. Материал и методы микробиологической диагностики менингококковых, гонококковых инфекций.
5. Специфическая профилактика менингококковых инфекций.
6. Специфическая терапия гонококковых инфекций.
Тесты
1. МЕНИНГОКОКК ОТНОСИТСЯ К ВИДУ
1) Neisseria sicca
2) N. meningitidis
3) N.gonorrhoeae
4) N. mucosa
5) N. subflava
2. МЕНИНГОКОККОВАЯ ИНФЕКЦИЯ
1) кишечная
2) вирусная
3) медленная
4) оппортунистическая
5) воздушно-капельная
3. ИСТОЧНИКИ ИНФЕКЦИИ ПРИ МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
1) инфицированные продукты
2) предметы обихода
3) больные, бактерионосители
4) медицинский инструментарий
5) немытые овощи и фрукты
4. ПУТЬ ПЕРЕДАЧИ ПРИ МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
1) воздушно-капельный
2) алиментарный
3) трансплацентарный
4) воздушно-пылевой
5) контактный
5. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКОЙ ГОНОРЕИ ИСПОЛЬЗУЮТ
1) гомологичный иммуноглобулин
2) β-лактамы
3) макролиды
4) гоноаллерген
5) гоновакцину
6. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА ГОНОРЕИ
1) плановая
2) по эпид.показаниям
3) проводится подросткам группы риска
4) проводится в роддоме путем закапывания в глаза 1% р-ра AgNO3
5) не разработана
7. ГОНОКОККИ ОТНОСЯТСЯ К РОДУ
1) Staphylococcus
2) Streptococcus
3) Micrococcus
4) Enterococcus
5) Neisseria
8. ГОНОКОККОВАЯ ИНФЕКЦИЯ
1) антропоноз
2) зооноз
3) сапроноз
4) природно-очаговая
5) особоопасная
9. ИСТОЧНИК ИНФЕКЦИИ ПРИ ГОНОРЕЕ
1) домашние животные
2) предметы обихода
3) медицинский инструментарий
4) больные
5) бактерионосители
10. ПУТЬ ПЕРЕДАЧИ ПРИ ГОНОРЕЕ
1) при внутривенном введении антибиотиков
2) при рукопожатии
3) при использовании общих предметов обихода
4) половой
5) воздушно-капельный
11. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
|
|
|
1) аутовакцина
2) анатоксин
3) химическая вакцина А+С
4) антибиотики
5) глюкортикоиды
12. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
1) антибиотики
2) бактериофаг
3) аутовакцина
4) иммуноглобулин
5) не разработана
5.2. Основные понятия и положения темы.
Менингококкки относятся к сем. Neisseriaceae, роду Neisseria, виду N. meningitides.
Диплококки бобовидной формы, обращенные вогнутой стороной друг к другу, грамотрицательные (характерно для патологического материала!). В чистой культуре - возможна вариация по окраске. Споры не образуют, в организме образуют капсулу полисахаридной природы; не подвижны. Аэробы. Характерны ауксотрофность, низкая биохимическая активность.
Антигенная структура менингококков: полисахаридный капсульный антиген – серогруппы (13) - А, В, С, Д, Е (29Е), I, K, X, Y, W (W135), Z.
Факторы патогенности менингококков:
1. Фимбрии, белок наружной мембраны - адгезия (эпителиальные клетки).
2. Капсула – подавление фагоцитоза, адгезия.
3. Гиалуронидаза, нейраминидаза - инвазия.
4. IgА-протеаза - разрушение SIgA-> подавление иммунитета слизистых оболочек.
5. Эндотоксин - синдром эндотоксемии (особенности эндотоксина менингококков: компонентным составом является сиаловая или нейраминовая кислота, этот компонент определяет устойчивость к альтернативному пути активации комплемента; для менингококков характерно явления аутолиза. С позиции патогенеза это мощное освобождение эндотоксина).
Менингококковая инфекция – антропонозная инфекция. Путь передачи - воздушно-капельный. В 10 - 30% случаев наблюдается воспаление слизистых оболочек (назофарингит). В 1-3% случаев наблюдается проникновение в кровь (бактериемия), приводящее к расстройству гемодинамики и развитие геморрагической сыпи на коже. При генерализации процесса часто поражаются оболочки головного и спинного мозга с развитием гнойного менингита.
Методы микробиологической диагностики менингококковых инфекций:
1. Назофарингит - бактериологический метод (основной); серологический метод - РПГА, ИФА (вспомогательный).
2. Менингококкемия - бактериологический метод; серологический (вспомогательный).
3. Менингит - бактериологический метод; микроскопический; экспресс-диагностика (латекс-агглюттинация); серологический (вспомогательный).
Специфическая профилакта.
- химическая менингококковая вакцина А+С.
- химическая менингококковая вакцина В.
- химическая менингококковая вакцина С.
Специфическая терапия.
- не разработана.
Гонококк относится к виду N.gonorrhoeae. Факторы патогенности гонококков:
1. Фибрии, белки наружной мембраны - адгезия (эпителиальные клетки).
|
|
|
2. IgA-протеаза - разрушение SIgA->подавление иммунитета СО.
3. Эндотоксин - синдром интоксикации.
Микробиологическая диагностика гонореи:
Острая форма:
микроскопический метод (грамотрицательные диплококки бобовидной формы, расположены внутри лейкоцитов!); бактериологический метод; экспресс-диагностика.
Хроническая гонорея:
микроскопический метод (после провокации); бактериологический метод; серологический метод; аллергический метод; экспресс-диагностика.
Спецпрофилактика не разработана..
Специфическая терапия гонореи – гоновакцина.
Для предупреждения бленнореи новорожденных, сразу после рождения закапывают в коньюнктивальный мешок (девочкам также в половую щель) 1-2 капли раствора сульфацил натрия.
5.3. Самостоятельная работа по теме:
I. Проведите исследование СМЖ больного с клиническим диагнозом «менингит», для чего:
- промикроскопируйте готовый препарат из осадка СМЖ, окрашенный метиленовой синькой, оцените полученный результат.
Одним из возбудителей гнойных менингитов являются менингококки. Для их выявления используют СМЖ, полученную путем люмбальной пункции. Желательно взять материал сразу при поступлении больного в стационар и до начала терапии.
Взятие СМЖ – врачебная манипуляция, осуществляемая с соблюдением правил асептики. Прозрачную СМЖ перед исследованием центрифугируют при 3500 об/мин в течение 5 мин и готовят мазки из осадка. Из мутной СМЖ мазки готовят без центрифугирования. Мазки окрашивают метиленовым синим и Граму. Обнаружение грамотрицательных диплококков бобовидной формы, обращенных вогнутой стороной друг к другу и находящихся в лейкоцитах, свидетельствет о менингококковой этиологии менингита.
- поставьте, учтите и оцените результаты латекс-агглютинации со СМЖ и менингококковой сывороткой.
Менингит – это тяжелое и быстро протекающее заболевание. Поэтому важно диагносцировать его в ранние сроки и быстро, чтобы начать своевременное этиотропное лечение. К числу таких методов, помимо РИФ с люминесцирующей иммунной сывороткой, относится латекс-агглютинация для обнаружения специфических полисахаридных антигенов N. meningitidis A, B, C, Y/W в СМЖ. При этом нужно иметь в виду, что микроскопия СМЖ не всегда позволяет обнаружить менингококки.
Для постановки реакции латекс-агглютинации СМЖ подогревают в течение 3 мин при 100°С и центрифугируют в течение 5 мин. По капле надосадочной жидкости и реагента, содержащего латексные частицы с моноклональными антителами к менингококкам, нанесите на …и смешайте с помощью специальной палочки. Параллельно поставьте реакцию с заведомо положительным контролем и реакцию с исследуемой СМЖ и латексными частицами с IgG не иммунизированного кролика.
Учет результатов осуществляется спустя 10 мин по феномену агглютинации, видимому невооруженным глазом. Положительная реакция - четкая агглютинация, в случае наличия агглютинации с заведомо положительным контролем и отсутствие реакции агглютинации с латексом с IgG не иммунизированного кролика, свидетельствует о наличии специфических антигенов N. meningitidis в СМЖ и указывает на его этиологическую роль в развитии менингита. Реакция не интерпретируется, если агглютинация прошла с латексом для негативного контроля. В этом случае нужно повторить тест с другой порцией СМЖ.
Результаты микроскопического исследования и латекс-агглютинации занесите в протокол и сделайте вывод; заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.
II. Проведите бактериологическое исследование носоглоточного отделяемого с целью установления менингококкового носительства.
1 этап. В носоглотке менингококки могут быть обнаружены не только у больных, но и у носителей. Материал для исследования забирают натощак или не раньше, чем через 3-4 ч после еды, до начала антимикробной химиотерапии. Для этого используют специальный носоглоточный тампон, который на ¾ длины сгибают под углом 45°. Тампон заводят за мягкое небо и 2-3 раза проводят по задней стенке носоглотки, не касаясь языка, зубов, слизистой оболочки щек. Исследуемый материал засевают сразу или доставляют в лабораторию, не позднее 2-х ч, поместив тампон в пробирку таким образом, чтобы он не касался стенок. Исследуемый материал и посевы следует предохранять от охлаждения и высушивания, так как менингококк очень чувствителен к воздействию этих факторов. Поэтому для доставки используют специальную термосумку с грелками.
Посев методом «штрих с площадкой» осуществляется на чашки с питательным агаром, содержащим кровь, сыворотку или асцитическую жидкость. Параллельно используют данную среду с добавлением ристомицина, который задерживает размножение грамположительных кокков, содержащихся в отделяемом носоглотки. Посевы термостатируют при 37° С и повышенной концентрации углекислоты (5-10%) в течение 24-48 ч.
2 этап. Оцените результаты посева слизи с задней стенки глотки на сывороточный агар с ристомицином.
Менингококки образуют небольшие, круглые, прозрачные колонии, имеющие в проходящем свете голубоватый оттенок. Характерные изолированные колонии пересевают на сывороточный агар для получения чистой культуры и термостатируют при 37°С 18-24 ч.
3 этап. Приготовьте препарат из агаровой культуры, выделенной от обследуемого, окрасьте по Граму, промикроскопируйте.
Культуру идентифицируют по трем тестам, позволяющим отнести ее к роду Neisseria. Это характерная морфология (полиморфные дипло- и тетракокки), грамотрицательная окраска и положительная реакция на оксидазу. Для определения оксидазы изученную культуру наносят на специальные диски. Если сразу происходит красно-фиолетовое окрашивание, то культура оксидазоположительная. Для видовой идентификации и дифференциации от непатогенных нейссерий, постоянно обитающих в верхних дыхательных путях используют комплекс свойств (таблица 1).
Таблица 1.
Дифференцированные свойства некоторых видов рода Neisseria
| № пп | Свойства | N. meningitidis | N. gonorrhoeae | N. subflava | N. mucosa | N. sicca |
| 1. | Оксидаза | + | + | + | + | + |
| 2. | Каталаза | + | + | + | + | + |
| 3. | Пигмент | - | - | + | d | d |
| 4. | Рост при 22° | - | - | + | + | + |
| 5. | Потребность для роста в крови или сыворотке | + | + | - | - | - |
| 6. | Образование кислоты при расщеплении: - глюкозы - лактозы - мальтозы - сахарозы - фруктозы | + - + - - | + - - - - | + - + d d | + - + + + | + - + + + |
Обозначения: “+” – 90% и более штаммов положительные;
“-“ – 90% и более штаммов отрицательные;
d – 11-89% штаммов положительные.
Определение антибиотикограммы менингококков осуществляется диско-диффузионным методом (ДДМ).
4этап. Учтите и оцените результаты посева исследуемой культуры на обычный питательный агар, 2 пробирки с сывороточным агаром (37°С, 22°С), «пестрый ряд».
У идентифицированных культур менингококков определяют серогруппу в РА с типоспецифическими сыворотками (А, В, С, D, 29E, 135W, X, Y, Z).
На основании полученных результатов, которые внесите в протокол, определите видовую принадлежность культуры, ее чувствительность к антибиотикам и сделайте вывод; заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.
III. Промикроскопируйте окрашенный по Граму препарат из уретрального гноя больного с подозрением на гонорею. Дайте заключение.
При положительном результате в препарате обнаруживают гонококки – грамотрицательные диплококки бобовидной формы находящиеся внутри лейкоцитов. Эта микроскопическая картина наблюдается при острой гонорее до применения антибиотиков. При хронической гонорее бактериоскопическое исследование дает отрицательный результат так как гонококки имеют атипичную форму, вариабельны в окраске по Граму и в препарате обнаруживают разнообразную постороннюю микрофлору.
IV. Учтите и оцените результаты РСК с сывороткой больного с подозрением на хроническую гонорею. Полученные результаты занесите в протокол и сделайте заключение (см. занятие № 11).
V. Ознакомьтесь и опишите в протоколе бак. препараты: химическая менингококковая вакцина А+С, агглютинирующие менингококковые сыворотки, диагностические менингококковые сыворотки для латекс-агглютинации, гонококковая вакцина, гоноаллерген, указав, что они содержат, для чего и как применяются.
|
|
|
