Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита

Занятие № 2.1.3.

Вирусные нейроинфекции. Лабораторная диагностика бешенства, клещевого энцефалита

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить биологические свойства возбудителей клещевого энцефалита, бешенства и принципы их вирусологической диагностики; классифицировать антимикробные препараты для идентификации, лечения, профилактики клещевого энцефалита и бешенства.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Таксономию нейровирусных инфекций. Основные клинические
проявления заболеваний, вызываемых нейровирусами.

2. Патогенез, эпидемиология, восприимчивость и иммунитет, механизм
передачи возбудителей.

3. Принципы лабораторной диагностики клещевого энцефалита и бешенства.

4. Профилактические, лечебные и диагностические препараты, которые применяются при клещевом энцефалите и бешенстве.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· анализировать результаты лабораторной диагностики клещевого энцефалита и бешенства;

· классифицировать лечебные, профилактические и диагностические препараты, применяемые при клещевом энцефалите и бешенстве.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей вирусных нейроинфекций.

Работа № 1. Принципиальная схема лабораторной диагностики клещевого энцефалита

Ситуационная задача

В инфекционную больницу поступил больной М., 27 лет, с жалобами на озноб, лихорадку (39,5⁰С), мучительную головную боль, ломящие боли в конечностях и поясничной области, тошноту и неоднократную рвоту. Больной заторможен. При обследовании выявлены менингеальные симптомы и признаки очагового поражения ЦНС: парезы шеи, мышц плечевого пояса, верхних конечностей. Из анамнеза известно, что пациент живет в сельской местности, часто помогает в работе егерю. Приблизительно 3 недели назад обнаружил на себе присосавшегося клеща. Против клещевого энцефалита не вакцинировался. После осмотра больного врач поставил предварительный диагноз: «Клещевой энцефалит, менингоэнцефалитическая форма»?

Цель: разобрать принцип лабораторной диагностики клещевого энцефалита, обосновать методы, представленные в схеме «Лабораторная диагностика клещевого энцефалита».

Исследуемый материал: кровь, СМЖ, ткань органов от трупов

Заражение куриного эмбриона 7-8 дневного возраста в амнион или аллантоисную полость; либо культуры клеток – ФЭК, СПЭВ, ПЭС

Заражение однодневных мышей-сосунков, белых мышей массой 7-8 гр. интрацеребрально, внутрибрюшинно, подкожно

Серодиагностика (сыворотки пациента на обнаружение антител): РСК, РТГА, РН, РПГА

Идентификация в РСК, РТГА, РИФ, РН на мышах, РП, РИА

Идентификация в РСК, РТГА, РН в культуре клеток, РП, РТГадсорбции, ИФА, РИА, реакция интерференции

Работа № 2. Вирусологическая диагностика клещевого энцефалита

А) Определить наличие вируса клещевого энцефалита в аллантоисной жидкости куриного эмбриона с помощью постановки реакции гемагглютинации (РГА).

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Б) Определить наличие вируса клещевого энцефалита в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона свиньи по результату ЦПД вируса. Описать ЦПД вируса.

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

В) Провести идентификацию вируса клещевого энцефалита с помощью постановки РН в перевиваемой культуре клеток (КК) почек эмбриона свиньи по ЦПД.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Исследуемые пробирки с культурой клеток	Опыт	Контроли к опыту
Контроль вируса	Контроль культуры клеток	Контроль спец. сыворотки
Результат РН в культуре клеток ПЭС

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Работа № 3. Серологическая диагностика клещевого энцефалита

В) Учесть результат постановки ИФА с парными сыворотками больного с подозрением на клещевой энцефалит.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Постановка

негативный позитивный

Титры 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 контроль контроль

1-ая неделя

2-ая неделя

Результат:______________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Работа № 4. Принципиальная схема лабораторная диагностики бешенства

Цель: разобрать принцип лабораторной диагностики бешенства, обосновать методы, представленные в схеме «Лабораторная диагностика бешенства».

Серодиагностика только для определения поствакцинального иммунитета: РН, РСК,РИФ,ИФА

Вирусология: 1. Заражение белых мышей, крыс, морских свинок, кроликов интрацеребрально 2. Индикация по клиническим симптомам и гибели животных. 3. Идентификация по обнаружению телец Бабеша-Негри, специфического антигена в мазках-отпечатках (РИФ), РН.

Вирусоскопия: 1. Обнаружение телец Бабеша-Негри; 2. Обнаружение специфического антигена в мазках-отпечатках - РИФ

Исследуемый материал: слюна, мозговая ткань погибших животных и людей

Работа № 5. Основные методы индикации и идентификации вируса бешенства

А) Определить наличие вируса бешенства в пораженных нервных клетках погибшего больного по наличию цитоплазматических включений.

Б) Начертить схему постановки прямой РИФ, используемой для идентификации вируса бешенства в исследуемом материале.

аправление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя _________________________________________________________

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

1. Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).

Вакцина «Энцепур»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Иммуноглобулин против клещевого энцефалита

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Антирабический иммуноглобулин

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Вакцина антирабическая культуральная инактивированная

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Заполнить контрольные карты по предложенным нозоформам:

КЛЕЩЕВОЙ ЭНЦЕФАЛИТ

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид__________________________________________________________________________

Строение вириона __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и репродукция

_____________________________________________________________________________

Резистентность ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенность для животных ____________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

Клинические симптомы__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Лабораторная диагностика ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) _____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ___________________________________________________________

БЕШЕНСТВО

Таксономия возбудителя:

Семейство____________________________________________________________________

Род__________________________________________________________________________

Строение вириона___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и репродукция

_____________________________________________________________________________

2. Объясните эпидемиологическую цепь бешенства (резервуар в природе, пути передачи, входные ворота)

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. Опишите патогенез бешенства. Какова зависимость между локализацией укуса и продолжительностью инкубационного периода?

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. Как протекает бешенство? (стадии, исход)

5. Принципы лабораторной диагностики бешенство (цели, методы).

Подпись преподавателя _________________________________________________________

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В травматологический пункт обратилась женщина по поводу рваной раны правой кисти. Рана - результат укуса бездомной собаки. Указать, какие профилактические мероприятия должен провести врач травматологического пункта.

2. На фельдшерский пункт обратился молодой человек по поводу рваной раны правой кисти. Рана была результатом тяжелых укусов, нанесенных собственной охотничьей собакой, которая погибла через 5 дней. Из мозга (аммонов рог) погибшей собаки был приготовлен препарат, окрашенный по Манну. Оценить результат исследования. Указать какие препараты можно использовать для профилактике бешенства у укушенного.

3. Среди работников лесхоза заболело несколько человек. Заболевание сопровождалось высокой температурой, поражением нервной системы в виде парезов и параличей. Был поставлен диагноз вирусного клещевого энцефалита. Для подтверждения диагноза была исследована сыворотка крови больного в РТГА. Учесть результат, оформить протокол, сделать выводы.

Выделяется для учета результатов исследования планшет с РТГА для изучения наличия антител в сыворотке больного к вирусам клещевого и японского энцефалитов.

Диагностикум	Разведение сыворотки больного
	1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	К
Из вируса клещевого энцефалита Из вируса японского энцефалита	+ (отсутствие гемагглютинации) - (наличие склеенных эритроцитов)	+ –	+ –	+ –	+ –	– _

Вопросы 1. Какова этиология вирусного энцефалита у обследованного больного? Почему? 2. Ингредиенты РТГА в данном исследовании?

Теоретическая справка

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита проводится в двух направлениях: 1) выделение вируса и его идентификация; 2) серодиагностика. Вирусологическая диагностика предусматривает накопление вируса в организме белых мышей или в курином эмбрионе с последующей идентификацией вируса. Для накопления вируса также используют культуру клеток фибробластов куриных эмбрионов. В этих клетках вирус накапливается, но клетки в процессе репродукции вируса не разрушаются. В перевиваемой культуре клеток почек эмбриона свиньи репродукция вируса сопровождается деструкцией клеток. Поэтому наблюдается ЦПД (очаговая мелкозернистая деструкция клеток).

Индикацию вируса проводят на лабораторных животных (белых мышах) по клиническим проявлениям болезни, а в культуре клеток почек эмбриона свиньи (ПЭС) по цитопатическому действию (ЦПД) и бляшкообразованию.

Идентификация вирусов клещевого энцефалита проводится на основании изучения антигенной структуры выделенных вирусов (в качестве антигенных маркеров используются антитела к различным антигенам вируса).

Геном вируса клещевого энцефалита состоит из однонитчатой, линейной, "плюс-нитевой" РНК. Антигенная структура вируса представлена одним общим NP-антигеном, который выявляется в РСК. В липопротеиновой оболочке вируса содержится 3 антигена: E1, E2 и Е3. Поверхностные антигены вируса определяют его видовую специфичность. E1 — гемагглютинирующий антиген, антигены Е2 и Е3 участвуют в проникновении вируса в восприимчивую клетку и выявляются в РН. Антигены Е2 и Е3 обладают иммуногенной активностью и обеспечивают формирование в организме клеточного и гуморального (образуются вируснейтрализующие антитела) иммунитета.

Идентификация вирусов клещевого энцефалита проводится на основании постановки серологических реакций: РСК, РТГА, в РН на лабораторных животных или в культуре клеток, в нРИФ и РП в геле.

Серодиагностика. Антитела в крови больного выявляют в РСК, РТГА и РН. При отсутствии положительного результата реакции проводят дополнительное исследование сыворотки крови, взятой через 2-3 месяца от начала заболевания. Одновременно определяют различные классы иммуноглобулинов для диагностики острых и хронических форм заболеваний. Наличие IgM свидетельствует об острой инфекции, IgG и IgA — о хроническом течении заболевания после перенесённой инфекции. Комплементсвязывающие антитела в крови переболевших сохраняются в течение 4 месяцев, антигемагглютинирующие — до 3 лет, а вируснейтрализующие — до 10 лет.

Воспользуйтесь поиском по сайту: