Главная | Обратная связь | Поможем написать вашу работу!
МегаЛекции

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита

Занятие № 2.1.3.

Вирусные нейроинфекции. Лабораторная диагностика бешенства, клещевого энцефалита

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить биологические свойства возбудителей клещевого энцефалита, бешенства и принципы их вирусологической диагностики; классифицировать антимикробные препараты для идентификации, лечения, профилактики клещевого энцефалита и бешенства.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Таксономию нейровирусных инфекций. Основные клинические
проявления заболеваний, вызываемых нейровирусами.

2. Патогенез, эпидемиология, восприимчивость и иммунитет, механизм
передачи возбудителей.

3. Принципы лабораторной диагностики клещевого энцефалита и бешенства.

4. Профилактические, лечебные и диагностические препараты, которые применяются при клещевом энцефалите и бешенстве.

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

 

· анализировать результаты лабораторной диагностики клещевого энцефалита и бешенства;

· классифицировать лечебные, профилактические и диагностические препараты, применяемые при клещевом энцефалите и бешенстве.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей вирусных нейроинфекций.

 

 

Работа № 1. Принципиальная схема лабораторной диагностики клещевого энцефалита

Ситуационная задача

В инфекционную больницу поступил больной М., 27 лет, с жалобами на озноб, лихорадку (39,50С), мучительную головную боль, ломящие боли в конечностях и поясничной области, тошноту и неоднократную рвоту. Больной заторможен. При обследовании выявлены менингеальные симптомы и признаки очагового поражения ЦНС: парезы шеи, мышц плечевого пояса, верхних конечностей. Из анамнеза известно, что пациент живет в сельской местности, часто помогает в работе егерю. Приблизительно 3 недели назад обнаружил на себе присосавшегося клеща. Против клещевого энцефалита не вакцинировался. После осмотра больного врач поставил предварительный диагноз: «Клещевой энцефалит, менингоэнцефалитическая форма»?

 

Цель: разобрать принцип лабораторной диагностики клещевого энцефалита, обосновать методы, представленные в схеме «Лабораторная диагностика клещевого энцефалита».

 

 

Исследуемый материал: кровь, СМЖ, ткань органов от трупов

 

 

Заражение куриного эмбриона 7-8 дневного возраста в амнион или аллантоисную полость; либо культуры клеток – ФЭК, СПЭВ, ПЭС
Заражение однодневных мышей-сосунков, белых мышей массой 7-8 гр. интрацеребрально, внутрибрюшинно, подкожно
Серодиагностика (сыворотки пациента на обнаружение антител): РСК, РТГА, РН, РПГА
Идентификация в РСК, РТГА, РИФ, РН на мышах, РП, РИА
Идентификация в РСК, РТГА, РН в культуре клеток, РП, РТГадсорбции, ИФА, РИА, реакция интерференции

 

 


Работа № 2. Вирусологическая диагностика клещевого энцефалита

А) Определить наличие вируса клещевого энцефалита в аллантоисной жидкости куриного эмбриона с помощью постановки реакции гемагглютинации (РГА).

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Б) Определить наличие вируса клещевого энцефалита в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона свиньи по результату ЦПД вируса. Описать ЦПД вируса.

 


Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

 

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

В) Провести идентификацию вируса клещевого энцефалита с помощью постановки РН в перевиваемой культуре клеток (КК) почек эмбриона свиньи по ЦПД.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

 

Механизм:

 

 

Постановка:

 

Исследуемые пробирки с культурой клеток   Опыт Контроли к опыту
Контроль вируса Контроль культуры клеток Контроль спец. сыворотки
  Результат РН в культуре клеток ПЭС        

 

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Работа № 3. Серологическая диагностика клещевого энцефалита

 

В) Учесть результат постановки ИФА с парными сыворотками больного с подозрением на клещевой энцефалит.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

 

Постановка

негативный позитивный

Титры 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 контроль контроль

 


1-ая неделя

 

 


2-ая неделя

 

 

Результат:______________________________________________________________________

 

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Работа № 4. Принципиальная схема лабораторная диагностики бешенства

Цель: разобрать принцип лабораторной диагностики бешенства, обосновать методы, представленные в схеме «Лабораторная диагностика бешенства».

 

Серодиагностика только для определения поствакцинального иммунитета: РН, РСК,РИФ,ИФА
Вирусология: 1. Заражение белых мышей, крыс, морских свинок, кроликов интрацеребрально 2. Индикация по клиническим симптомам и гибели животных. 3. Идентификация по обнаружению телец Бабеша-Негри, специфического антигена в мазках-отпечатках (РИФ), РН.
Вирусоскопия: 1. Обнаружение телец Бабеша-Негри; 2. Обнаружение специфического антигена в мазках-отпечатках - РИФ
Исследуемый материал: слюна, мозговая ткань погибших животных и людей

 

 

Работа № 5. Основные методы индикации и идентификации вируса бешенства

А) Определить наличие вируса бешенства в пораженных нервных клетках погибшего больного по наличию цитоплазматических включений.

 

 

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Б) Начертить схему постановки прямой РИФ, используемой для идентификации вируса бешенства в исследуемом материале.

аправление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

 

Постановка:

 

 

Результат:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя _________________________________________________________

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

1. Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).

Вакцина «Энцепур»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Иммуноглобулин против клещевого энцефалита

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Антирабический иммуноглобулин

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Вакцина антирабическая культуральная инактивированная

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

  1. Заполнить контрольные карты по предложенным нозоформам:

КЛЕЩЕВОЙ ЭНЦЕФАЛИТ

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид__________________________________________________________________________

Строение вириона __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и репродукция

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Резистентность ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенность для животных ____________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

 

Инкубационный период_______________________________________________________________________

Клинические симптомы__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Лабораторная диагностика ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) _____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ___________________________________________________________

 

БЕШЕНСТВО

Таксономия возбудителя:

Семейство____________________________________________________________________

Род__________________________________________________________________________

Строение вириона___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и репродукция

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

 

2. Объясните эпидемиологическую цепь бешенства (резервуар в природе, пути передачи, входные ворота)

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

3. Опишите патогенез бешенства. Какова зависимость между локализацией укуса и продолжительностью инкубационного периода?

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. Как протекает бешенство? (стадии, исход)

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

5. Принципы лабораторной диагностики бешенство (цели, методы).

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя _________________________________________________________

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В травматологический пункт обратилась женщина по пово­ду рваной раны правой кисти. Рана - результат укуса бездом­ной собаки. Указать, какие профилактические мероприятия должен провести врач травматологического пункта.

2. На фельдшерский пункт обратился молодой человек по поводу рваной раны правой кисти. Рана была ре­зультатом тяжелых укусов, нанесенных собственной охотни­чьей собакой, которая погибла через 5 дней. Из мозга (аммонов рог) погибшей собаки был приготовлен препарат, окрашенный по Манну. Оценить результат исследования. Указать какие препараты можно использовать для профилакти­ке бешенства у укушенного.

 

3. Среди работников лесхоза заболело несколько человек. Заболевание сопровождалось высокой температурой, по­ражением нервной системы в виде парезов и параличей. Был по­ставлен диагноз вирусного клещевого энцефалита. Для подтверж­дения диагноза была исследована сыворотка крови больного в РТГА. Учесть результат, оформить протокол, сделать выводы.

Выделяется для учета результатов исследования планшет с РТГА для изучения наличия антител в сыворотке больного к вирусам клещевого и японского энцефалитов.

  Диагностикум Разведение сыворотки больного
    1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 К
Из вируса клещево­го энцефалита Из вируса японского энцефалита + (отсутствие гемагглютинации) - (наличие склеен­ных эритроцитов) +   –   +   –   +   –   +   –   – _    

Вопросы 1. Какова этиология вирусного энцефалита у обследованного больного? Почему? 2. Ингредиенты РТГА в данном исследовании?


Теоретическая справка

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита

 

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита проводится в двух направлениях: 1) выделение вируса и его идентификация; 2) серодиагностика. Вирусологическая диагностика предусматривает накопление вируса в организме белых мышей или в курином эмбрионе с последующей идентификацией вируса. Для накопления вируса также используют культуру клеток фибробластов куриных эмбрионов. В этих клетках вирус накапливается, но клетки в процессе репродукции вируса не разрушаются. В перевиваемой культуре клеток почек эмбриона свиньи репродукция вируса сопровождается деструкцией клеток. Поэтому наблюдается ЦПД (очаговая мелкозернистая деструкция клеток).

Индикацию вируса проводят на лабораторных животных (белых мышах) по клиническим проявлениям болезни, а в культуре клеток почек эмбриона свиньи (ПЭС) по цитопатическому действию (ЦПД) и бляшкообразованию.

Идентификация вирусов клещевого энцефалита проводится на основании изучения антигенной структуры выделенных вирусов (в качестве антигенных маркеров используются антитела к различным антигенам вируса).

Геном вируса клещевого энцефалита состоит из однонитчатой, линейной, "плюс-нитевой" РНК. Антигенная структура вируса представлена одним общим NP-антигеном, который выявляется в РСК. В липопротеиновой оболочке вируса содержится 3 антигена: E1, E2 и Е3. Поверхностные антигены вируса определяют его видовую специфичность. E1 — гемагглютинирующий антиген, антигены Е2 и Е3 участвуют в проникновении вируса в восприимчивую клетку и выявляются в РН. Антигены Е2 и Е3 обладают иммуногенной активностью и обеспечивают формирование в организме клеточного и гуморального (образуются вируснейтрализующие антитела) иммунитета.

Идентификация вирусов клещевого энцефалита проводится на основании постановки серологических реакций: РСК, РТГА, в РН на лабораторных животных или в культуре клеток, в нРИФ и РП в геле.

Серодиагностика. Антитела в крови больного выявляют в РСК, РТГА и РН. При отсутствии положительного результата реакции проводят дополнительное исследование сыворотки крови, взятой через 2-3 месяца от начала заболевания. Одновременно определяют различные классы иммуноглобулинов для диагностики острых и хронических форм заболеваний. Наличие IgM свидетельствует об острой инфекции, IgG и IgA — о хроническом течении заболевания после перенесённой инфекции. Комплементсвязывающие антитела в крови переболевших сохраняются в течение 4 месяцев, антигемагглютинирующие — до 3 лет, а вируснейтрализующие — до 10 лет.

Поделиться:





Воспользуйтесь поиском по сайту:



©2015 - 2024 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...