 |
Методы ВРТ (вспомогательных репродуктивных технологий)
|
|
|
|
это методы лечения бесплодия, при которых отдельные или все этапы зачатия и раннего развития эмбрионов осуществляются вне организма.
• ЭКО (экстракорпоральное оплодотво-рение)
• ИКСИ (инъекция сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки)
• Донорство яйцеклеток
• Суррогатное материнство
• PGD(преимплантационная диагностика наследственных болезней эмбриона)
• IVM (дозревание яйцеклетки вне организма
• Замораживание ооцитов, спермы, эмбрионов, яичниковой ткани
• Вспомогательный хетчинг
Основные лабораторные этапы программы
in vitro оплодотворения (ЭКО)
• Пункция фолликулов под ультразвуковым контролем
• Поиск и идентификация ооцит -кумулюсных комплексов
• Контроль стадии зрелости ооцитов
• Обработка спермы
• Инсеминация ооцитов
• Контроль оплодотворения
• Культивирование и оценка морфологии эмбрионов
• Выбор эмбрионов и перенос эмбрионов
Морфологическое исследование спермы (выявление сперматозоидов с аномалиями головки, шейки)
ИКСИ (ICSI)
Метод оплодотворения путем введения одного сперматозоида в яйцеклетку
PICSI
• Новый метод селекции сперматозоидов PICSI
• Селективный отбор сперматозоидов проводится на чашках PICSI перед процедурой ИКСИ с предшествующим определением на стеклах НВА.
• Селекция сперматозоидов в программах ИКСИ – является ключевым моментом, определяющим влиянием мужской гаметы на доимплантационное развитие эмбрионов.
• Использование данной методики в ИКСИ позволяет выбрать более функционально компетентные сперматозоиды, что позитивно влияет на вклад отцовской гаметы в доимплантационный эмбриогенез
Параметры оценки качества эмбрионов
• Наличие фрагментации
|
|
|
• Сферичность бластомеров
• Равные размеры бластомеров
• Аномалии зоны пелюцида
• Аномалии цитоплазмы
• Мультинуклеированные бластомеры
Вспомогательный хетчинг
Нанесение насечки в оболочке эмбриона для облегчения его выхода из оболочки оплодотворения и имплантации при в полость матки.
Оценка эмбрионов: дополнительные критерии
– Генетические маркеры
• PGS
• анализ полярного тельца
• митохондриальная ДНК
– Морфокинетка
• time-lapse например
– Биохимические маркеры
• аминокислотный профиль
• инфракрасная спектроскопия
– Дыхание
• потребление кислорода
• метаболизм пирувата/глюкозы
Технология серийной съемки позволяет
выбрать один качественный эмбрион с максимальной возможностью к имплантации
Оценка эмбрионов: морфокинетика
• Описывает большое количество параметров, потенциально характеризующих компетентность эмбриона
• Выделяет важнейшие параметры, влияющие на результативность
• Алгоритм EEVA позволяет оценить вероятность формирования бластоцисты
• Значительно увеличивает шансы эмбриолога на выбор лучших эмбрионов
• Сводит к минимуму различия в видении разных эмбриологов
• Возможный путь увеличения ЧКБ
Нарушение имплантации
Привычное невынашивание беременности
• Пренатальный генетический скрининг
– CGH (Scott et al.,2012; Handyside et al., 2012)
– Неэффективность FISH диагностики
• MSOME + IMSI
– Увеличение частоты наступления беременности в группе пациенток с повторным отсутствием имплантации (Bartoov, 2002, 2003, Cassuto 2009)
– Снижение частоты преждевременных родов при использовании IMSI по сравнению со стандартным ИКСИ (Cassuto et al., 2012)
– PICSI /Sperm Slow
– Снижение числа прерываний беременности в группе пациентов с индексом зрелости сперматозоидов <65 (Worrilow et al., 2009)
– Влияние на иммунное взаимодействие эмбриона и эндометрия
– Ко-культивирование эмбриона и клеток эндометрия (Spandorfer et al., 2008)
|
|
|
– Орошение полости матки ростовыми факторами перед переносом (Stamenow et al., 2011)
– Использование метаболизированной среды при переносе эмбрионов
– Использование клеток гранулёзы
Цитокины и доимплантационное развитие эмбриона
• На протяжении всего процесса доимплантационного развития в репродуктивном тракте – от оплодотворения до имплантации – эмбрион подвергается воздействию цитокинов и ростовых факторов
Цитокины и ростовые факторы регулируют процессы выживания и пролиферации клеток
Роль факторов роста в наступлении и поддержании беременности
До имплантации
• Регуляция процессов деления и дифференцировки клеток эмбриона
• Регуляция взаимодейстивия бластоцисты с поверхностным эпителием и эндометрием
Во время имплантации
• Обеспечение адгезии и пролиферации трофобласта
• Обеспечение инвазии трофобласта
После имплантации
• Обеспечение иммунной толерантности,
• предотвращение отторжения плода
Влияние GM-CSF на развитие эмбриона
Увеличение общего числа клеток в бластоцисте
Увеличение числа клеток внутренней клеточной массы
Снижение уровня апоптоза (Robertson et al.,2001)
Экспрессия GM-CSF в репродуктивном тракте женщины
• Экспрессия GM-CSF в период овуляции регулируется эстрогенами
• Попадание семенной жидкости в репродуктивный тракт вызывает резкое увеличение уровня экспрессии GM-CSF и провоспалительных цитокинов клетками эндометрия
• Второй пик экспрессии GM-CSF наблюдается в период имплантации
• После имплантации GM-CSF экспрессируется в клетках трофобласта, децидуальной ткани и плаценты
GM-CSF и нарушения фертильности у женщин
• Уровень экспрессии GM-CSF клетками эндометрия коррелирует с исходом цикла ЭКО (Spandorfer et al., 2008)
• У женщин с бесплодием неясного генеза снижена концентрация GM-CSF в фолликулярной жидкости (Calogeroet et al.,2008)
• В небольшой группе женщин с привычным невынашиванием беременности снижена экспрессия мРНК GM-CSF в эндометрии (Jasper et al., 2007)
IVM
Дозревание яйцеклеток вне женского организма
Особенности:
- Поиск незрелых яйцеклеток
- Этап дозревания яйцеклеток
- Оплодотворение – ИКСИ
- Проведение вспомогательного хетчинга
перед переносом эмбрионов
PGD
Особенности:
|
|
|
- На 3 сутки у эмбриона забирается 1 бластомер для анализа
- Фиксация, окраска и осмотр (FISH – анализ)
Показания:
- Привычное невынашивание
- Риск рождения ребенка с наследственными заболеваниями
Преимплантационная генетическая диагностика CGH
• Метод сравнительной геномной гибридизации
• Высокая точность выявления хромосомных патологий (числовые и структурные аномалии хромосом)
• Исследование 23 пар хромосом
Криоконсервация эмбрионов
Позволяет сохранить их для использования в последующих менструальных циклах без проведения стимуляции яичников. Криоконсервированные эмбрионы могут храниться неограниченно долго.
Донорство спермы
Показания:
- Отсутствие полового партнера
- Отсутствие сперматозоидов у партнера
- Тяжелые нарушения сперматогенеза
- Неблагоприятный генетический прогноз потомства при использовании сперматозоидов партнера
- Иммунный конфликт
Донорство яйцеклеток
Показания:
- Отсутствие яичников
- Истощение яичников
- Неблагоприятный генетический прогноз потомства при использовании яйцеклеток супруги
Новые направления ВРТ
• Криоконсервация ооцитов и яичниковой ткани для аутотрансплантации и реализации гормональной и репродуктивной функции женщины
• ПГД клеток трофэктодермы и полярного тельца
• Создание криобанка долгосрочного хранения спермы, ооцитов и донорских эмбрионов
• Ко-культивирование эмбрионов на клетках эндометрия
|
|
|
