Серологическая диагностика.

Начиная со 2-й недели заболевания (иногда с конца 1-й) брюш­ным тифом или паратифами проводят серологическое исследование сыворотки крови больного с целью обнаружения специфических ан­тител /AT/ - ставят реакцию агглютинации Видаля или реакцию не­прямой гемагглютинации /РНГА/. К этому времени в крови больного накапливаются АТ-агглютинины, причем в разгар заболевания обна­руживаются О- и: Н-агглютинины, а после выздоровления или после прививок надолго остаются только И-агглютинины. Это дает возмож­ность дифференцировать реакцию Видаля инфекционной природы от реакции прививочной или анамнестической путем постановки ре­акции раздельно с О- и Н-диагностикумами. Диагностический титр реакции Видаля у больного равен 1:200. Чтобы подтвердить диагноз в сомнительных случаях, проводят повторно постановку реакции у того же больного с интервалом около недели (парные сыворотки): при на­личии заболевания титр реакции возрастает.

Методика постановки реакции Видаля. Берут 4 ряда пробирок по 7 пробирок- в каждом ряду. В 5 пробирках каждого ряда готовят разведения сыворотки больного от 1:50 до ]:800 в объеме 1,0 мл. 6-ая пробирка каждого ряда - контроль Аг. 7-ая пробирка - контроль испы­туемой сыворотки. Затем во все 6 пробирок первого ряда вносят по 3 капли брюшнотифозного О-диагностикума, в 6 пробирок второго ряда брюшнотифозный Н-диагностикум, в пробирки третьего и четвертого ряда соответственно паратифозный А- и паратифозный В-диагностикумы. Инкубация при 37°С.

Предварительный учет через 2 часа инкубации, титр окончатель­но определяют через 18-24 часа. Результат оформить в виде таблицы.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) также широко при­меняется. Она более чувствительна, чем реакция Видаля и результат получают через 2-3 часа, а не через сутки, как при реакции Видаля. РНГА с брюшнотифозным О-диагностикумом позволяет выявить ост­рые формы брюшного тифа, что особенно ценно в диагностике лег­ких, абортивных форм у детей. Диагностическим титром О-антител считается разведение сыворотки 1:640. РНГА с брюшнотифозным Vi-диагностикумом ставят для выявления хронического бактерионоси­тельства, так как при формировании брюшнотифозного бактерионосительства характерно появление Vi-антител. Диагности­ческий титр реакции 1:40.

Наиболее точные результаты, позволяющие выявить специфичес­кие антитела в сыворотке больного, дает РНГА с эритроцитарными диагностикумами, содержащими отдельные О- и Н-антигенные рецеп­торы, присущие S.typhi (09 и Hd), S.paratyphi A(O2 и На) и S.paratyphi В (04 и Н6).

 

4. Факторы патогенности. Возбудители брюшного тифа, как и другие энтеробактерии имеют эндотоксин, ос­вобождающийся при разрушении бактерий.

У S.typhi имеется Vi-антиген, связанный с микрокапсулой и от­носящийся к К-антигенам. Это высокомолекулярный полимер, кото­рый состоит из соединенных между собой остатков N-ацетилгалактозаминуроновой кислоты. С наличием Vi-антигена свя­зывают повышенную вирулентность брюшнотифозных бактерий. Со­держащие Vi-антиген культуры S.typhi (обычно это штаммы, свежевыделенные от больных) называются V-формой, не имеющие его - W-формой. Культуры в V-форме агглютинируются анти-У1-сыворот-кой и не агглютинируются анти-О-сывороткой, так как О-антиген "мас­кирован" более поверхностно расположенным Vi-антигеном. После прогревания бактерий при 100°С в течение 30 минут О-агглютинабильность восстанавливается вследствие разрушения Vi-антигена. Этот антиген является рецептором дл брюшнотифозных Vi-фагов, на чем основано фаготипирование S.typhi.

У возбудителей брюшного тифа обнаружены фак­торы адгезии и колонизации. У них имеются факторы инвазии. Важной особенностью возбудителей является способность размно­жаться в макрофагах, что способствует их выживанию и распрост­ранению по всему организму.

 

 

Задача 2.

 

1. Да.

Патогенез.

Попавшие через рот возбудители в инфекционной дозе (не менее 10 млн живых бактерий) в течение инкубационного периода, который обычно длится 10-14 дней, прикрепляются к стенке гонкой кишки, начинают размножаться на поверхности эпителия (ад­гезия и первичная колонизация) и. далее, проникают в лимфатические образования тонкого кишечника - пейеровы бляшки и солидарные фол­ликулы (инвазия), где фагоцитируются макрофагами. Находясь в фагосомах макрофагов, возбудители не погибают, а интенсивно размножаются. Вместе с макрофагами по лимфатическим путям они проникают в мезентериальные и забрюшинные лимфатические узлы, где развивается воспалительный процесс и продолжается фагоцитоз новыми макрофагами и накопление возбудителей. Это приводит к про­рыву гемато-лимфатического барьера и попаданию возбудителей в кровяное русло, где часть их погибает под действием бактерицид­ных свойств крови и в результате фагоцитоза.

В течение 1 -ой недели заболевания у всех больных имеется бак­териемия, которая при дальнейшем течении болезни постепенно пре­кращается. Часть возбудителей с кровью заносится в паренхиматозные органы, и в костный мозг, где продолжается их размножение в макро­фагах, а также гибель, при которой высвобождаются новые порции эндотоксина.

С конца 1-ой - начала 2-ой недели заболевания возникают за­щитные реакции: образуются специфические антитела, активируется фагоцитоз, однако преобладают проявления гуморального иммуните­та. Организм больного в значительной степени освобождается от воз­будителей, уменьшается интоксикация, но нарастает воспалительный процесс в лимфатическом аппарате тонкого кишечника. Этому спо­собствует вторичный занос в просвет тонкого кишечника из желчного пузыря и инвазия возбудителей в лимфатические элементы. В желч­ном пузыре бактерии находятся в благоприятных условиях и защище­ны от воздействия антител, что способствует их длительному сохранению.

Различают 5 периодов в развитии воспалительного процесса в лимфатических элементах стенки кишечника: мозговидное набухание, некроз фолликулов, отторжение некротических масс и образование язв, очищение язв, заживление язв. Начиная с конца 2-ой - начала 3-ей недели возбудители вместе с некротическими массами поступают

в просвет тонкой кишки и выделяются с испражнениями обычно вплоть до клинического выздоровления. Иногда бактериовыдсление затяги­вается и может перейти в хроническое бактерионосительство (у 3-5% переболевших).

 

2. 3. Методика постановки реакции Видаля. Берут 4 ряда пробирок по 7 пробирок- в каждом ряду. В 5 пробирках каждого ряда готовят разведения сыворотки больного от 1:50 до ]:800 в объеме 1,0 мл. 6-ая пробирка каждого ряда - контроль Аг. 7-ая пробирка - контроль испы­туемой сыворотки. Затем во все 6 пробирок первого ряда вносят по 3 капли брюшнотифозного О-диагностикума, в 6 пробирок второго ряда брюшнотифозный Н-диагностикум, в пробирки третьего и четвертого ряда соответственно паратифозный А- и паратифозный В-диагностикумы. Инкубация при 37°С.

Предварительный учет через 2 часа инкубации, титр окончатель­но определяют через 18-24 часа. Результат оформить в виде таблицы.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) также широко при­меняется. Она более чувствительна, чем реакция Видаля и результат получают через 2-3 часа, а не через сутки, как при реакции Видаля. РНГА с брюшнотифозным О-диагностикумом позволяет выявить ост­рые формы брюшного тифа, что особенно ценно в диагностике лег­ких, абортивных форм у детей. Диагностическим титром О-антител считается разведение сыворотки 1:640. РНГА с брюшнотифозным Vi-диагностикумом ставят для выявления хронического бактерионоси­тельства, так как при формировании брюшнотифозного бактерионосительства характерно появление Vi-антител. Диагности­ческий титр реакции 1:40.

Наиболее точные результаты, позволяющие выявить специфичес­кие антитела в сыворотке больного, дает РНГА с эритроцитарными диагностикумами, содержащими отдельные О- и Н-антигенные рецеп­торы, присущие S.typhi (09 и Hd), S.paratyphi A(O2 и На) и S.paratyphi В (04 и Н6).

 

4. 1) Вакцина брюшнотифозная спиртовая сухая - инактивированные этиловым спиртом лиофилизированные брюшнотифозные бактерии (штамм 4446). Применяется для профилактики брюш­ного тифа у взрослых.

2) Вакцина брюшнотифозная Ви-полисахаридная жидкая - ра­створ капсульного полисахарида, выделенного из культуры брюшнотифозных бактерий, очищенного ферментативными и физико-химическими методами. Введение вакцины приводит к быстрому и интенсивному образованию Ат и формированию резистентное™ через 1-2 недели. Применяется для профилак­тики брюшного тифа у взрослых.

3) Вакцина брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Ви-антигеном - состоит из двух вышеописанных вакцин, которые соединяют непосредственно перед применением. Вакцина сти­мулирует клеточный иммунитет и образование Ат к О- и Ви-антигенам возбудителя брюшного тифа. Предназначена для профилактики брюшного тифа у детей 7-14 лет.

4) Бактериофаг брюшнотифозный в таблетках с кислотоуспюйчивым покрытием - таблетки из концентрированного лиофилизированного фаголизата сальмонелл брюшного тифа, покрытые слоем ацетилфталилцеллюлезы (АЦФ) или содержащие пектин. Препарат предназначен для профилактики брюшного тифа по эпидемическим показаниям в семейном очаге, больнице, населенном пункте и пр.

 

Задача 3.

 

1. Пищевые токсикоинфекции чаще всего вызываются сальмонел­лами, входящими в серогруппы В, С, D, Е. Все они имеют резервуар среди животных и птиц, т.е. эти заболевания являются зооантрононозными. Наиболее распространены следующие возбудители ПТИ:

- S.typhimurium (группа В) - источником инфекции могут быть мыши, голуби, домашние птицы и их яйца. Вторично могут быть заражены другие продукты.

- S.choleraesuis (группа С) - источник инфекции - свиньи.

- S.enteritidis (группа D) - источник инфекции - крупный рогатый скот.

 

Патогенез. В патогенезе пищевых токсикоинфекции важное зна­чение имеет попадание с пищей большого количества возбудителей и их эндотоксина. Прикрепившись к эпителию кишечника, сальмонеллы начинают размножаться, проникают в подслизистое простран­ство и в лимфатические образования в стенке кишечника, где проис­ходит их дальнейшее размножение и гибель с высвобождением эндотоксина. Массивное накопление эндотоксина (вместе с эндоток­сином, попавшим извне) приводит к интоксикации, часто тяжелой (с лихорадочным состоянием, нарушениями со стороны нервной и со­судистой систем, вплоть до коллапса.) и диарее.

При меньшем количестве сальмонелл, попавших в организм с пищей, заболевание может протекать в виде гастроэнтерита с диаре­ей, но без выраженной интоксикации и без подъема температуры.

 

2. Исследуемый материал: с 1 недели – кровь.

со 2 недели – моча, желчь, соскобы.

с 3 недели – испражнения.

3. На 1-й неделе заболевания исследуют кровь с целью выделения возбудителя. Гемокультуру выделяют в 100% случаев заболевания. Примерно у 40% заболевших удается выделить гемокультуру и на 2-й неделе заболевания при условии посева 15-20 мл крови. Кровь берут из локтевой вены в объеме 10 мл и засевают в колбу со 100 мл жидкой питательной среды (среды обогащения для "чистого" материала - среда Раппопорт или желчный бульон). Следует соблюдать соотношение крови и питательной среды не менее 1:10. чтобы не проявилось бакте­рицидное действие крови. Далее делают высев со среды обогащения на чашку со средой Эндо, где в положительном случае вырастают лактозонегативные (лак-) колонии- бесцветные или бледнорозовые по­лупрозрачные колонии. Колонии засевают в комбинированные дифференциально-диагностические среды (Клиглсра, Рсссела и др.). Выделенную лактозонегативную культуру идентифицируют на осно­вании изучения биохимических и антигенных свойств. Биохимическое тестирование проводят на различных дифференциально-диагностических средах или более совершенными методами - в системе API 20 Е, с помо­щью энтеротестов, "Enterotube'II Roche и др. Серологическая идентификация осуществляется с помощью агглютинирующих адсорби­рованных сальмонеллезных О- и Н-сывороток (см. с. 28).

С 3-й недели заболевания (нередко с конца 2-й) проводят повтор­ные высевы возбудителя из испражнений. Со 2-й недели заболевания возможно выделить возбудителя также из мочи, желчи, соскоба из ро­зеол, костного мозга, но, практически, это делают редко. Бактериоло­гическое исследование испражнений несколько отличается от исследования крови, поскольку этот материал содержит посторон­нюю микрофлору. Пробу испражнений разводят в десять раз физиоло­гическим раствором NaCl и далее надосадочную жидкость в соотношении 1:5 засевают на среды обогащения (среды, предназна­ченные для посева загрязненных материалов - селенитовый бульон или среду Мюллера). Затем делают пересев на чашки со средами Эндо, Плоскирева, или висмут-сульфит агаром. На двух последних значи­тельно подавляется рост посторонней микрофлоры, что способствует выделению возбудителя.

Как правило, одновременно с посевом на среды обогащения, про­бу испражнений засевают непосредственно на чашки со средами Плос­кирева или висмут-сульфит агара. Если на них вырастают колонии возбудителя, срок бактериологического диагноза становится на сутки короче. Выросшие подозрительные колонии - лактозонегативные на средах Эндо и Плоскирева и черные или коричневые на висмут-сульфит агаре - отсевают на комбинированные среды Клиглера, Рассела и др., т.е. дальнейшее выделение чистой культуры возбудителя и его идентификация проводится так же, как и при исследовании кро­ви.

4. Названии среды: Висмут-сульфит агар, селективная среда; плотная, в чашке Петри молочно-зеленовато цвета. Состав: МПА, сульфит висмута. сульфат железа. фосфат натрия, бриллиантовый зеленый. Назначение: для сальмонелл и протея. Принцип действия: сальмонеллы образуют из сульфата железа сероводород, который взаимодействуя с бесцветным сульфитом висмута, переводит его в сульфид висмута черного цвета. Поэтому колонии сальмонелл имеют черный цвет (или черные с коричневатым или гемнозеленым оттенком). Рост Грам- флоры и многих энтеробактерий подавляется. Эшерихин образуют коричневатые колонии, вырастающие значительно позже.

 

Задача 4.

 

1. Протеи являются наиболее распространенными возбудителями ОКИ среди условно-патогенных энтеробактерий. Род Proteus включа­ет несколько видов, наибольшее значение в инфекционной патологии имеют роды: P.mirabilis и P.vulgaris.

 

2. Патогенез пищевой протейной инфекции связан с массивным проникновением в ЖКТ бактерий протея и некоторого количества сво­бодного эндотоксина. Бактерии попадают в лимфатический аппарат кишечной стенки, где происходит их интенсивное разрушение и осво­бождение большого количества эндотоксина. Это приводит к общей интоксикации организма через несколько часов после приема пищи, что характерно для ПТИ.

При наличии у штамма протея, попавшего в пищеварительный тракт, дополнительных факторов патогенности для развития ОКИ до­статочно значительно меньшей дозы бактерий. Такие штаммы коло­низируют слизистую оболочку тонкого кишечника, не проникая в клетки эпителия. Основное патологическое действие оказывает энтеротоксин, нарушающий функции аденилатциклазной системы эпителиоцитов. В результате развивается гастроэнтерит с диарейными явлениями и, как правило, без выраженной интоксикации. Заражение обычно происходит от больных или бактерионосителей.

Протеи могут вызывать также гнойно-воспалительные заболева­ния различной локализации: холециститы, пиелонефриты, циститы, остеомиелиты, отиты, конъюнктивиты и др., часто имеющие хрони­ческое течение. Заболевания могут развиваться как эндогенная инфек­ция, но чаще это внутрибольничная экзогенная инфекция с контактно-бытовым способом заражения.

 

3.

Этап исследования	Ход исследования	Результат
1-й	Посев исследуемого материала на: а) среду Плоскирева или б) висмут-сульфит агар. Эти среды содержат соли желчных кислот и подавляют роение протея, поэтому протей вырастает в виде изолированных колоний.	а) На среде Плоскирева -крупные желтовато-розовые (лак-) полупрозрачные колонии; б) На висмут-сульфит агаре колонии коричневатые, после их снятия остается темнокоричневая редукционная зона.
2-й	Посев колоний на скошенный агар по Шукевичу.	На скошенном агаре отмечается ползучий рост.
3-й	Идентификация выделенной культуры: морфологические свойства – в раздавленной капле и препарате, окрашенном по Граму; биохимические свойства серологическая идентификация;	Подвижные грамотрицательные мелкие палочки, расположенные беспорядочно; На биохимических тест- системах; В реакциях агглютинации с диагностическими адсорбированными О- и Н- сыворотками.
4-й	Учет полученных результатов и заключение по проведенному исследованию.	Из исследуемого материала выделена культура Proteus, типичная по свойствам.

4. При диагностике ПТИ, вызванных условно-патогенными энтеробактериями, к которым относится и протей, необходимо не только выделить возбудителя, но и доказать массивное обсеменение исследу­емых материалов и, особенно, пищевых продуктов. Для этого из ис­следуемой пробы готовят десятикратные разведения от 10~' до 10~⁸, из которых делают высевы на чашки с дифференциально-диагностичес­кими средами.

Доказательным является рост колоний из разведений 10⁵ - 10⁶ и выше.

 

Задача 5.

 

1. Для бактерий рода Salmonella характерно наличие следующих ан­тигенов: О-антигена, называемого соматическим, Н-антигена (жгути­кового) и К-антигена (футлярного, или оболочечного).

О-антиген термостабилен, расположен в клеточной стенке, по своей природе является полисахаридно-белково-липидным комплек­сом. Антигенная специфичность О-антигена связана с полисахаридом, который неоднороден и у сальмонелл одного вида состоит из несколь­ких антигенных рецепторов. Антигенные рецепторы обозначаются цифрами 1,2,3,4...и т.д.

Футлярные К-антигены термолабильны, находятся в клеточной стенке более поверхностно, чем О-антиген. У сальмонелл обнаруже­ны относящиеся к К-антигенам М-Аг и Vi-Ar.

Н-антиген термолабилен, по химической природе является бел­ком (флагеллин), располагается в жгутиках. У бактерий одного и того же вида Н-антиген может состоять из двух антигенных комплексов, отличающихся по серологической специфичности. Такие бактерии называются двухфазными и могут существовать в двух фазах, для каж­дой из которых характерно наличие соответствующих антигенных ком­плексов.

 

2.

Этап	Ход исследования	Результат
Предвари­тельный этап	Посев исследуемого материала на селенитовую среду или среду Мюллера	Рост культуры вызывает помутнение среды
1-й	Посев исходного исследуемого материала или пересев со среды обогащения на чашки со средами Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агар	На чашках выросли различного вида колонии, в том числе полупрозрачные бесцветные лактозонегативные на средах Эндо и Плоскирева; коричневые и черные - на висмут-сульфит агаре
2-й	Пересев подозрительных колоний уколом и штрихом на комбинированные среды суспензируют в дистиллированной, воде и засевают на тест-системы API-20 Е или др.	На среде Кл игл ера: столбик желтый, скошенная часть розового цвета, почернение в нижней части среды (культура lac-,glu+H2S),B среде -пузырьки газа. На среде Рассела: столбик синего Цвета, скошенная часть розовая (культура lac-. glu+), пузырьки газа
	Идентификация выделенной культуры: а) изучение морфологических свойств в мазке, окрашенном по Граму; б) учет биохимического тестирования в тест-системе API-20 E; в) серологическая идентификация: 1. реакция агглютинации на стекле с поливалентной сальмоиеллезной О-сывороткой (рецепторы 0-2, О-4, О-7. 0-9; могут входить и другие рецепторы);	а) при микроскопии видны небольшие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные беспорядочно; б) результаты на API-20 E тест-системе; в) I. При положительной реакции культура относится к ролу Salmonella; 2.0-2 0-4 0-7 0-9
3-й	2. Реакция агглютинации на стекле с отдельными монорецепторными 0- сыворотками, входившими в состав поливалентной сыворотки для определения серогруппы сальмонелл; 3. реакция агглютинации на стекле с монорецепторными Н-сыворотками для определения вида (серовара); г) постановка теста на определение фаготипа д) проверка чувствительности культуры к антибиотикам методом бумажных дисков.	Культура относится к серогруппе…     3. Культура является S.....   г) Культура является фаготипом... д) Учет чувствительности к антибиотикам
4-й	Учет полученных результатов и заключение	Заключение: из....(материала) больного выделена культура S...., типичная по свойствам, чувствительна к антибиотикам...:

 

3. Серологическая идентификация сальмонелл проводится в ре­акции агглютинации на стекле с агглютинирующими адсорбирован­ными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками. Такие сыворотки получают методом адсорбции антител по Кастеллани из видовых им­мунных сывороток (путем насыщения сыворотки родственными бак­териями, на которых адсорбируются группоспецифические антитела). Агглютинирующие адсорбированные сальмонеллезные сыворотки мо­гут быть поливалентными и монорецепторными, т.е. содержать не­сколько различных антител (рецепторов) или только одно.

Последовательность серологической идентификации выделенной культуры:

1. Для установления принадлежности культуры к роду Salmonella, а именно к наиболее распространенным серогруппам - А, В, С, D, Е - культуру испытывают в реакции агглютинации с адсор­бированной поливалентной О-сывороткой, содержащей антите­ла против антигенных рецептеров 2, 4, 7, 9, 3, 10. При необходимости используют монорецепторные О-сыворотки про­тив редких серогрупп. При диагностике брюшного тифа, пара­тифа А и паратифа В можно использовать смесь О-сывороток, содержащих антитела к рецепторам 2, 4, 9.

2. При положительном результате для определения принадлежно­сти испытуемой культуры к определенной серологической группе ставят реакцию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, входившей в состав поливалентной: ре­цептор 2 (серогруппа А), рецептор 4 (серогруппа В), рецептор 7 (серогруппа С), рецептор 9 (серогруппа D) и т.д.

3. После установления серогруппы, к которой относится культура, определяют ее видовую принадлежность (серовариант) с помо­щью реакции агглютинации с адсорбированными монорецептор­ными Н-сыворотками против Н-антигенов 1-й фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Далее проводят реак­цию агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2-й фазы и окончательно устанавливают антиген­ную формулу испытуемой культуры.

 

4. Отравление остатками пищи.

5. Среда Клиглера: комбинированная, дифференциально-диагностическая, плотная, в пробирках в виде скошенного столбика». Цвет среды: красновато-бурый. Компоненты: МПА, лактоза 1%, натрий тиосульфат, индикатор. Назначение: для отсева «подозрительных» колоний.

 

Задача 6.

 

1. Лабораторный диагноз стафилококковой пищевой интокси­кации основан на обнаружении стафилококкового энтеротоксина в ма­териалах от больного и в пищевых продуктах и в выделении чистой культуры S.aureus, продуцирующей энтеротокисн.

Исследуемые материалы: испражнения, рвотные массы, промыв­ные воды желудка, подозрительные пищевые продукты.

Энтеротоксин обнаруживают в декантате или фильтрате из ис­следуемых материалов и в бульонной культуре стафилококков, выделенных из перечисленных материалов с помощью следую­щих методов:

- серологический - путем обнаружения стафилококкового эн­теротоксина с помощью реакций РОНГА, ИФА, реакции пре­ципитации в геле;

- биологический - путем постановки биологической пробы на котятах, у которых после введения исследуемого материала, содержащего стафилококковый энтеротоксин, через рот раз­вивается рвота и понос.

Бактериологический - выделение коагулазоположительной куль­туры S.aureus с последующим обнаружением энтеротоксина и других факторов патогенности.

Как правило, в пище, послужившей причиной отравления, обнару­живают не менее 10⁵ - 10⁶ энтеротоксигенных стафилококков на 1г/мл продукта. Фаготипирование позволяет определить принадлежность ста­филококковых культур, выделенных из пищи и из организма больного, к одному фаговару, и тем самым подтвердить их идентичность.

 

2. Энтеротоксины стафилококков относятся к простым токсинам и являются одноцепочечными белками с одной дисульфидной связью; молекулярная масса колеблется в пределах 26 000 -34 000. Энтероток­сины термостабильны (выдерживают кипячение в течение 20-30 ми­нут), устойчивы к действию пищеварительных ферментов и к изменению рН в пределах 4,5 - 10,0. При воздействии формалина они не превращаются в анатоксины. Известно 7 антигенных вариан­тов энтеротоксинов: А, В, Cl, C2, СЗ, В, Е; их образование кодируют гены конвертирующих фагов. Пищевую интоксикацию вызывают преимущественно антигенные варианты (типы) А и В.

 

3. - серологический;

- биологический;

- бактериологический;

 

4. Патогенез. В отличие от многих энтеротоксинов, продуцируе­мых другими бактериями, стафилококковые энтеротоксины не нару­шают функции аденилатциклазной системы эпителиоцитов. Обладая свойствами суперантигенов, они неспецифически стимулируют мно­жество клонов лимфоцитов, что приводит к гиперсекреции цитокинов (интерлейкин-2) и развитию вторичной (опосредованной цитокинами) интоксикации. Избыточное накопление интерлейкина-2, кроме общей интоксикации организма способствует возбуждению гладкой мускулатуры кишечной стенки и повышению ее моторики, что приво­дит к развитию диареи. Есть данные, что энтеротоксин может оказы­вать и прямое воздействие на центры головного мозга (нейротропное действие), а также на клетки эпителия кишечника, с чем связана соот­ветственно многократная рвота и диарея.

Обычно пищевые интоксикации вызывают кондитерские изде­лия с кремом, молочные, мясные, рыбные продукты, инфицирован­ные стафилококками и находившиеся в условиях, способствующих размножению стафилококков и накоплению энтеротоксина.

Заболевание возникает через 2-4 часа после приема пищи. Отме­чаются сильные боли в эпигастральной области, повторная рвота, сла­бость, падение артериального давления, иногда развивается коллапс; диарея не всегда выражена. Как правило, выздоровление наступает через 2-3 дня.

 

Задача 7.

 

1. C.botulinum - возбудитель ботулизма. Ботулизм - тяжелая пищевая интоксикация, вызываемая ботулиническим токсином и ха­рактеризующаяся поражением нервной системы..

Вид C.botulinum образует экзотокси­ны, различающиеся по антигенным свойствам, и по этому признаку подразделяется на серотипы. Ботулотоксины всех типов обладают сход­ной биологической активностью и являются вариантами единого нейротоксина. Кроме нсйротоксического действия ботулотоксин обладает лейкотоксической, гемолитической и лецитиназной активностью.

Известны 8 антигенных вариантов ботулотоксина: А, В, Cl, C2, D, E, F, G. Токсинообразование типов С, D, Е закодировано в геноме конвертируемых бактериофагов и проявляется при интеграции профага в бактериальную хромосому; у остальных типов генетический контроль осуществляет непосредственно хромосома клетки.

Заболевания человека вызывают ботулотоксины типов А, В, Е, а также F. В организме человека С. botulinum размножаются слабо и не продуцируют токсина за редким исключением. Ботулотоксин на­капливается в пищевых продуктах, инфицированных спорами С. botulunum, при их прорастании, если созданы анаэробные условия (например при консервировании). Для человека ботулотоксин - самый сильнодействующий бактериальный яд, губительно действующий в дозе 10^хг. Токсин полностью инактивируется при кипячении в тече­ние 20 минут.

Токсин представляет собой полипептидную цепь с одной или несколькими внутримолекулярными связями, его молекулярная масса равна 150 000, он относится к бинарным токсинам.

Ботулотоксины всех типов продуцируются в виде токсичных бел­ковых комплексов, состоящих из нейротоксина и нетоксичного белка. Белок является стабилизатором токсина, защищает его от разрушаю­щего действия протеолитических ферментов и НС1.

Ботулотоксин в виде высокомолекулярного комплекса малоток­сичен и является прототоксином. В результате мягкого протеолиза, осуществляемого у большинства типов токсина собственными эндо­генными протеазами, а у типа Е экзогенными протеазами (например трипсином), прототоксин распадается на 2 субкомпонента: L-легкий и Н-тяжелый. Между ними сохраняется дисульфидная связь. L-суб­компонент соответствует фрагменту А (активатор) и оказывает токси­ческое действие на клетку-мишень (мотонейрон). Н-субкомпонент соответствует фрагменту В (акцептор) и осуществляет прикрепление к рецептору клетки-мишени.

 

2. Патогенез. Попав вместе с пищей в ЖКТ, ботулотоксин прикреп­ляется к клеткам эпителия кишечника и путем пиноцитоза попадает в лимфатические сосуды, затем в кровь и далее проходит гематоэнцефалический барьер. В организме он распадается на 2 субкомпонента: L-легкий и Н-тяжелый. Н-субкомпонент связывается с ганглиозидами пресимпатической мембраны мотонейронов. L-субкомпонент, действуя как эндопротеаза, блокирует секрецию ацетилхолина. Тем самым пре­рываются нервные импульсы, идущие от мотонейрона к мышце, что приводит к развитию вялых параличей. Ботулотоксин поражает мотонейроны спинальных моторных центров, продолговатого мозга и пе­риферической нервной системы.

Экология. C.botulinum является сапронозом и вегетирует в по­чве, часто обнаруживается в кишечнике лошадей и других животных, реже встречается в кишечнике человека. Из почвы или испражнений споры возбудителя попадают на различные объекты и могут загряз­нять пищевые продукты. В анаэробных условиях споры прорастают, вегетативные клетки продуцируют ботулотоксин. Чаще всего заболе­вание возникает при употреблении в пищу консервированных продук­тов домашнего приготовления, что связано с их недостаточной стерилизацией.

 

3. Лабораторный диагноз ботулизма проводят одновременно в двух направлениях - обнаруживают ботулотоксин и выделяют возбудителя.

Исследуемые материалы: кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, моча, секционный материал, пищевые продукты. 1. Выявление ботулотоксина и определение его типа может быть осуществлено:

Серологическим методом с помощью серологических реак­ций РОНГА, ИФА, реакции преципитации в геле.

Бактериологический - выделение и идентификация культуры C.botulinum (как и других клостридий) проводят, используя методы выделения анаэробных бактерий.

 

4. Биопроба на мышах. Для этой цели кровь, фильтрат или центрифугат других исследуемых материалов разливают в 4 пробирки, в каждую из трех добавляют разные противоботулинические сыворотки А, В и Е, в 4-ю - нормальную сыворотку и инкубируют в термостате 30 минут. Затем содержимое пробирок вводят 4-м группам мышей (не менее 2-х мышей в каждой группе) и наблюдают за живот­ными в течение 4-х суток. При наличии ботулотоксина вы­живают мыши только одной группы вследствие нейтрализации токсина гомологичной сывороткой, что по­зволяет определить тип ботулинического токсина.

 

5. Сыворотки противоботулинические типов А, В, Е лошади­ные очищенные концентрированные жидкие - представляют собой специфические иммуноглобулинные сыворотки крови ло­шадей, гипериммунизированных ботулиническими анатоксина­ми, очищенные, концентрированные. С лечебной целью сыворотку вводят в максимально ранние сроки с момента появ­ления первых симптомов ботулизма. Для лечения заболеваний, вызванных неизвестным типом токсина ботулизма, используют смесь моновалентных сывороток. При известном типе токсина используют моновалентную сыворотку соответствующего типа.

 

Задача 8.

 

1. Клостридии - возбудители псевдимембранозного колита.

Псевдомембранозный колит - тяжелое заболевание, вызываемое С. difficile, сопровождается общей интоксикацией и лихорадкой, схват­кообразными болями в животе, диареей с примесью крови.

С. difficile обладает адгезив­ной активностью и продуцирует комплексный термолабильный ток­син, состоящий из энтеротоксина (токсина А) и цитотоксина (токсин В).

Токсин А действует на гуанилатциклазную систему, стимулируя образование цГМФ, что приводит к развитию диареи. Этот токсин об­ладает слабым летальным действием (его определяют путем внутри­венного введения токсина в разных разведениях экспериментальным животным). Токсин В ингибирует синтез белка, нарушает функции кле­точных мембран с потерей К+ и обладает сильным летальным дей­ствием, превышающим в 1000 раз активность токсина А.

 

2. Патогенез псевдомембранозного колита. При попадании C.difficile в желудочно-кишечный тракт псевдомембранозный колит развивается у людей на фоне лечения антибиотиками. В результате антибиотикотерапии подавляется нормальная микрофлора толстого ки­шечника, что приводит к снижению колонизационной резистентности, обусловленной, главным образом бифидобактериями и бактероидами. Это создает благоприятные условия для адгезии и колонизации эпителия толстого кишечника антибиотикоустойчивыми штаммами С. difficile.

Образующийся комплексный токсин вызывает развитие язвенного пленчатого колита с диарейными явлениями и кровью в испражнени­ях. Слизистая толстого кишечника частично или полностью некротизируется, покрывается лейкоцитами и налетом фибрина (псевдомембрана). У детей грудного возраста заболевание может воз­никать и без применения антибиотиков.

3. Лабораторный диагноз псевдомембранозного колита. Иссле­дуемые материалы: испражнения, рвотные массы, подозрительные пи­щевые продукты.

Методы исследования:

1) Бактериологический - выделение и идентификация возбудителя - С. difficile - проводится по тем же правилам, что и при других клостридиозах с установлением идентичности возбудителя, вы­деленного от больного и из пищевого продукта.

2) Серологический - определение токсинов серотипов А или В с помощью ИФА и встречного иммуноэлектрофореза.

 

Задача 9.

 

1. Да.

Этап исследо­вания	Ход исследования	Результат
1-й	Посев исследуемого материала на чашку Петри со средой Эндо	На среде Эндо рост 1ас+ колоний
2-й	Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле 1ас+ колоний с поливалентным препаратом ОКА-сыворотки. Оставшуюся часть колонии, давшей положительную реакцию агглютинации засевают на скошенный агар для получения чистой культуры 1! в API 20 Е тест-систему или др. тест-системы.	При положительной реакции агглютинации отобранной колонии с ОКА-сывороточным препаратом делают предварительное заключение о принадлежности колонии к ЭПЭ.
3-й	Идентификация чистой культуры: а) изучение морфологических свойств в мазке, окрашенном по Граму;   б) учет биохимического тестирования     в) серологическая идентификация: постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с поливалентными ОКВ-, ОКС-. OKD- и ОКЕ-сыворотками;   2. Постановка реакции агглютинации на стекле с каждой адсорбированной ОК-сывороткой, входящей в состав поливалентной сыворотки, давшей реакцию агглютинации;   3. Постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными групповыми и факторными О-сыворотками. В

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: