 |
Серотерапия и серопрфилактика. Характеристика антитоксических, антимикробных сыв и им глоб. Их приготовлиние и титрование.
|
|
|
|
Индикация микроб агентов в пат материале с помощью иммунологич р-й
можно обнаружить в крови-бактериоэмия, септицэмия, в очаге.
бакскопич-мазки, бак скопич-посевы.В 2этапа
1выдел-е в чист культ
2идентификация
1 день-мазок окраска по Грамму-тинкториальн и морфол св-ва.Посев на пит среду
2день-описание культ св-в(высота, величина,цвет, пов-ть,прозр, края, консистенция),Приготовл мазка из чист колоний Накопление ч. культ на скош агаре
3день-описание хар-ра роста чист культ. Посев на пестр ряд
4день-учет биохим св-в и заключение
Это информативный метод, чувств, опред чувств к антибиот, но долго и дорого
Серологич м-д-обнаруж-е РТГА, РСК, цв проба, собств иммунологич-РИФ,ИФА, генетич-гибридизация, ПЦД и т.д. РИФ-прям и непрям м-д Кунса.Прям-обработка меченой диагност антисыв. Непрям-мечен антиглобул сыв т. е.немече диагност сыв
ИФА-Ат на лунке +исслед Аг+спец фермент+субстрат, обнаруж Аг-менигит, хламидия
Принципы иммупрофилактики и иммунотерапии-вакцины, сыворотки, иммуноглобулины Вакцинация обеспечивает специф иммун отв с формированием активн противоинфекциммун-та за счет мобилизации иммун памяти. сыв и иммуноглобулины обесп пассивн гумор иммун-тнемедленно т.к. вводят готовые Ат и иммуноглобулины.Вакц-яобесп-ет проф-ку.солержитАг. Вакц 1 поколения-бешенство, туляремия, сиб язва, чумы, паротита, кори, полиомиелита Убитые -убивают микроорганизмы прогреванием, УФ-лучами или хим в-вами-против коклюша,гонококковая, лептоспироза, клещ. энц В убитой лишь немногие детерминанты могут индуцировать имммун-т. В качестве Аг можно использовать как целые тела м.о., так иотдельн компоненты-полисахаридная пневмококковая в. и иммунологич активные фракции –гепатитВ. Живые-например антирабическая создают напря иммун-т, сходный с постинфекционным, применение опасно т.к. у людей с иммуно дефицитами б особенно у детей виру может персистировать в ор-ме.Ослабленные-полностью сохраняют Аг состав возбудителя и более длит д-ют-БЦЖ для проф туберкулеа, есть для брюш тифа используют мутантно ослаблены с пониженной вирулентностью, полиомиелит. Вакцины 2 поколения-хим они менее реактогенны, так холерная(холероген-анатоксин +ЛПС, извлеченный из холер вирионов).Противогрипозная-субъединичная, включает гемагглютинин и нейроменидазу. Для повыш иммуногенности используют адьюванты гидроксид алюминия, алюминиево-калиевые хлебцы, фосфат алюминия. Анатоксины из экзотоксинов–обработка формалином, утрата ядовитости и способность индуцировать антитокс Ат-для спецеф проф столбняка, дифтерии т.е. с экзотоксинами.1ИЕ иммуноген ед-ца-мин кол-воанатоксина, которое при добавлении 1АЕ сыв дает р-ю инициальной флокуляции, р-я происходит с мин кол-ком компоентов за самое короткое время.1АЕ мин кол-во антитокс сыв, которая инактивирует опред число DLM, происходит р-я нейтр имунологич. Генноинженерные-гепатитВ- картирование геномов м.о., контролирующие нужные Аг детерминанты, пореносят в геном др. м.о. и клонируют, добиваясь экспрессии этих генов в новых условиях. Антиидиоптическая, липосомальная в стадии разработки. Рекомбинантная -гриппозная, гепатитВ, столбняк-введение генов патогенных вирусов в геном вируса вакцины так в геном сальмонелл.
|
|
|
Сыв и иммун глоб как ср-ва серопроф и серотерапии. Действие быство-сразу после введения, но срок д-я ограничен периодом сохранения в организме. Все сыв препараты деля т на гетеро- и гомологичтые. 1-из кровиживотных, 2-из человека. из животных они иммуногены, а от чел-нет.Кроме того эти препараты содержат др. Ат, так противокоревой Iq для проф гепетита, коклюша, менингита.
|
|
|
Серотерапия и серопрфилактика. Характеристика антитоксических, антимикробных сыв и им глоб. Их приготовлиние и титрование.
Сыв и иммун глоб как ср-ва серопроф и серотерапии. Действие быстро-сразу после введения, но срок д-я ограничен периодом сохранения в организме. Все сыв препараты деля т на гетеро- и гомологичтые. 1-из кровиживотных, 2-из человека. из животных они иммуногены, а от чел-нет.Кроме того эти препараты содержат др. Ат, так ротивокоревой Iq для проф гепетита, коклюша, менингита. сыв препараты это--иммун сыв -Ig-,,чистые Ат,,-моноклональные Ат. Все они могут быть гетеро-и гомологичные.Гетеро явл для ор-ма чел чужеродны поэтому сопровождается развитием Ат ни не только нейтр д-е препарата, но и вызвать тяжел аллергич и иммунокомплексн р-и.Гетеро получают из крови животных гипериммунизированных, нонеочищенные почти не применяют, Так пртиводифт антитокс сыв лошадиная, очищенная диаферм (диализа и ферментации). Предпочтительнее использ-е глобул фракций с содержанием белков не более 20%, но они все равно иммуногены. Преимущество в высокой концентрации А т и нет ограничений в подборе продуцентов.Необходимо проводить пробы.Препараты Ig от чел неиммуногены, готовят из донорской или плацентарной крови, смеш сыв от разных лиц и поэтому концентрация низк, для получения с высок содерж Ат проводят рпедварительный отбор сырья и для групп особого риска –новорожд, тяжелобольн.
Вакцины живые, убитые, хим, анатоксины, синтетич современ рекомбинантные вакц.Принципы получения, механизмы создаваемого иммунитета, адъюванты. Вакцинация обеспечивает специф иммун отв с формированием активн противоинфекц иммун-та за счет мобилизации иммун памяти. сыв и иммуноглобулины обесп пассивн гумор иммун-тнемедленно т.к. вводят готовые Ат и иммуноглобулины.Вакц-яобесп-ет проф-ку.Вакц 1 поколения-бешенство, туляремия, сиб язва, чумы, паротита, кори, полиомиелита Убитые -убивают микроорганизмы прогреванием, УФ-лучами или хим в-вами-против коклюша, лептоспироза, клещ. энц В убитой лишь немногие детерминанты могут индуцировать имммун-т. В качестве Аг можно использовать как целые тела м.о., так иотдельн компоненты-полисахаридная пневмококковая в. и иммунологич активные фракции –гепатитВ. Живые-например антирабическая создают напря иммун-т, сходный с постинфекционным, применение опасно т.к. у людей с иммуно дефицитами б особенно у детей виру может персистировать в ор-ме.Ослабленные-полностью сохраняют Аг состав возбудителя и более длит д-ют-БЦЖ для проф туберкулеа, есть для брюш тифа используют мутантно ослаблены с пониженной вирулентностью. Вакцины 2 поколения-хим они менее реактогенны, так холерная(холероген-анатоксин +ЛПС, извлеченный из холер вирионов).Противогрипозная-субъединичная, включает гемагглютинин и нейроменидазу. Для повыш иммуногенности используют адьюванты гидроксид алюминия, алюминиево-калиевые хлебцы, фосфат алюминия. Анатоксины –обработка формалином, утрата ядовитости и способность индуцировать антитокс Ат-для спецеф проф столбняка, дифтерии т.е. с экзотоксинами. Генноинженерные-гепатитВ- картирование геномов м.о., контролирующие нужные Аг детерминанты, пореносят в геном др. м.о. и клонируют, добиваясь экспрессии этих генов в новых условиях. Антиидиоптическая, липосомальная в стадии разработки. Рекомбинантная -гриппозная, гепатитВ, столбняк-введение генов патогенных вирусов в геном вируса вакцины так в геном
|
|
|
Рациональная антибиотикотерапия. Побочное д-е антибиотиков на организм чел и м.о. Формирование антибиотикорезистентных и антибиотикозависимых форм микробов. Не следует применять эмпирически т.е. исследование провести на резистентность, при угрозе жизни можно использовать антибиотик широкого спектра д-я, проводить интенсивно для избежания хронизации. Больш антиб оказ бактерицидное, но бакстатич антибиот ( левомицетин, тетрацеклмн ) также применяют.Устойчивость обуславливают естеств (внутр) и приобретенные-обусловлен мутациями и генетич, часто обусловлен плазмидами. Мех-мы резист,1-фермент инактивация 2-измен прониц кл стенки.
Первичный и вторичный иммун. ответ. Перв. развивается при 1й встрече с антигеном. Пик накопления антител приходится на 2-3 нед. 1м вырабатывается IgM и в конце 2й нед. IgG. Около 3-4х дней тратится на взаимодействие иммуннокомпетентных кл-к. При первичном ответе обр-ся кл-ки иммун. памяти. Вторичный ответ развивается при повторной встрече с Ag. За счет кл-к иммун. памяти информация сохраняется и плазматические кл-ки нач-ют нарабатывать IgG.Во вторичном отв. отсутствуют афферент. и центр. звенья иммун. отв. (на кооперацию кл-к время не затрач-ся).
|
|
|
Интерфероны. A-ИФ синтез-ся макрофагами и Т-лимфоцитами при проникновении вируса. Ф-я предупреждение возможности размножения вирусов в соседних кл-ках (блокируется и-РНК,репликация вируса на рибосомах не происходит).В ИФ синтез-ся фибробластами.Обладает противовирусной ф-цией. G-ИФ синтез-ся Т-лимф. при Ag-ной стимуляции. Ф-я один из медиаторов иммун. р-ций,стимулируют и запускают каскад антимикробных и противовирусных р-ций, акт-ют действие макрофагов, явл-ся кофактором диференцировки В-лимф., по механизму действия явл-ся антагонистами ИЛ-4 по действию на В-лимф. У здоровых людей ИФ не обнар-ся. Наличие ИФ при ревматоидном артрите,склеродермии увел-ет резистентность к вирусным инф-ям и опухолям. Препараты ИФ исп-ся для лечения лейкемий и др. онкол-х процессов. Для усиления противовирусной защиты исп-ют ср-ва, повышающие продукцию собственного ИФ-интерфероногены (противовирусные вакцины, препараты РНК и ДНК).
Поступление в организм Ag через дых-ные пути, пищев-ный тракт и др. участки слизистых поверхностей и кожи обуславливает развитие выраженной локальной иммунной р-ции—местный иммунитет. Поступление Ag в одни участки слизистых поверхностей обусл-ет развитие секреторного им-та, связанного с обр-ем секреторных IgA, защищающих все слизистые пов-ти. Однако, ни один орган или ткань не обладают изолированной от ор-ма самостоятельной им-ной сис-мой, и местный им-т расматривается как локальное проявление общей им-ной защиты ор-ма.
Клеточный иммунный ответ. Иногда (при замедленной гиперчув-ти и клеточно-опосредованном цитолизе) реализация им-го ответа требует присутствия иммуннокомпетентных кл-к—клеточно-опосредованный им-т. В этих случаях им-ные р-ции зависят от лимф., к-е сначала должны распознать Ag, а затем мобилизовать др. кл-ки для разрушения несущих Ag кл-к. При клеточно-опоср-ном им-ном ответе Ag-распознающие рец-ры остаются связанными с мем-ной Т-лимфоцита.
Р-ции ГЗТ рассматривают в контексте кожного тестирования. Для выявления специф-кой сенсибилизации ставят кожные аллергические пробы. Н-р, при постановке пробы Манту ту-беркулиновым шприцем внутрикожно вводят р-р туберкулина опр-ной концентрации. Р-ю учитывают через 24 и 48ч, определяя степень ее выраженности. Гиперемию и инфильтрат вокруг места введения оценивают следующим образом:+размером до 5мм, ++ до 1см, +++ больше 1см.
|
|
|
Р-я агглютинации. 2фазы: 1я-специфическая состоит во взаимодействии At с Ag-ными детерминантами, расположенными на пов-ти бактерий и др. корпускулярных частиц.
2я протекает лишь в присутствии электролита в среде, закл-ся в склеивании и оседании на дно пробирки иммунных комплексов в виде хлопьев или зерен, видимых невооруженным глазом. М. быть спонтанная агглютинация: дают R-формы бактерий, не образующие гомогенной взвеси в изотоническом р-ре NaCl и осаждающиеся в виде кл-ных агрегатов. Исп-ся для идентификации видов и сероваров бактерий с помощью диаг-ких агглютин-х сывороток, и для опр-ния присутствия At в сыворотке больного по известным Ag (диагностикумам), т.е. для серодиагностики. Титр—наибольшее разведение сыворотки,в к-м еще набл-ся р-я аггл-ции. Ингридиенты: изотонический р-р NaCl-1мл, исследуемая сыворотка в разведении 1:50-1мл из предыдущей, взвесь бактерий по 2 капли, 5пробирок, КAg- NaCl+взвесь бактерий, К сыв- исследуемая сыв-ка в разведении. Инкубация при 37 С в течение 2ч с последующим выдержива-
нием при комнатной тем-ре до следующего дня. Учет р-ции нач-ют с контрольных. Монорецепторные сыв-ки содержат At к одному определенному Ag, применяются для детального изучения Ag-ной стр-ры бактерий с целью опр-ния их серовара. РНГА—At + Ag адсорбированный на угольной к-те (р-я угольной агломерации), на латексе (р-я латексной агглют-ции), на белке А стаф-ка (р-я коаггл-ции)
Р-я преципитации. Хар-ся осаждением спец-ких мелкодисперсных Ag эквивалентным кол-вом At в присутствии электролита. Образовавшийся комплекс может раствориться в избытке Ag или At. В диаг-ке служит для выявления или идентификации Ag по известной преципитирующей сыв, сод-щей At(преципитины). Титром сыв-ки называется max разведение Ag, к-е при взаимодействии с иммунной сыв-кой вызывает обр-ние видимого преципитата—помутнения. В р-ции исп-ся прозрачные диаг-кие прецип-щие сыв-ки с высокими титрами At. Ингридиенты: преципитирующая сыв-ка, изотонический р-р NaCl, нормальная сыв-ка, исследуемый Ag. Применяется в судебномед. экспертизе, в ветеренарии для опр-ния видовой принадлежности белка.
Р-я иммунофлюоресценции. Метод экспресс-диаг-ки. При прямом методе специф-кие флюоресцирующие At, связавшиеся с микробными Ag обр-ют комплексы, к-е светятся при люминисцентной микроскопии. Нед-к: необ-ть приготовления широго набора флюор-х сыв-к против каждого изучаемого Ag. Пр-ты: материал от больного, спец. против данного Ag сыв-ка с флюор-м. Непрямой метод: используется одна универсальная флюор-щая сыв-ка—антиглобулиновая, содержащая At только против кроличьих глобулинов. Глобулины реагируют с флюор-щей антиглобулиновой сыв-кой в кач-ве Ag и соед-ся с гомологичным исследуемым Ag как At. На комплексе (спец-кие At + исследуемый Ag) фикс-ся флюор-щие антиглобулиновые At, вызывая его свечение. Пр-ты: мат-л от больного,спец-кая против данного Ag сывка,антиглобулиновая сыв-
ка обработанная флюорохромом. Если отсут-ет Ag, то сыв-ка отмывается и свечения нет.
Иммунный ферментный анализ. Метод экспресс-диаг-ки. Исп-ся коньюгаты: фер-т ковалентно связанный с Ag или с At.Применяются различные варианты данного метода в зависимости от использанного фермента (кислая фосфотаза,пероксидаза и др) и системы Ag-At. Схема твердофазного ИФА: 1 адсорбция At на лунке планшета, инкубация 3-4 часа, температура 37 градусов,раствор At удаляют, планшет просушивают 2 внесение исследуемого Ag, инкубация 1 ч, лунки обмывают от избытка Ag 3 добавление специфического Ig меченного фермента (коньюгат пероксидаза хрена) промыть физ. р-ром. 4 внесение субстрата (Н 2О2+хромоген) и учет реакции.
Особенностью приобретенного им-та явл-ся развитие иммунологической памяти—сп-ти к быстрому и сильному ответу на повторное воздействие Ag.При этом часть Т - и В-лимф.
после взаимод-я с Ag сенсибилизируется, но не подвергается конечной дифференцировке.
Далее сенсиб-ные кл-ки в течение длительного времени могут сохранятся в лимф-ной ткани, храня память о спец-ти контактировавшего с ними Ag. После повторной встречи с тем же
Ag, даже если она произойдет через многие годы, они обеспечивают вторичный им-ный
ответ, к-й хар-ся интенсивным синтезом At плазматическими кл-ми лимф-ной системы
орг-ма. После перенесенного заболевания формируется постинф-ный им-т (поствакцинальный, инфекционный и т.д.).
Внутрибольничные инф-ции—любое клинич.-выраженное заболевание микробного происхождения, если оно поражает больного в результате его госпитализации или посещения лечебного учреждения. Госпитальная инф-я — частный случай ВБИ, вызываемая штамми м\о постоянно или длительно циркулирующими в лечебных учреждения. ВБИ могут поражаться не только пац-ты, но и мед. персонал. При наличии госпитальной инф-ции должна прослеживаться эпидемиологическая цепь, к-я состоит из источника, пути передачи, восприимчивом объекте. Общая хар-ка ВБИ:поражаемый
контингент—пац-ты, мед. персонал, место заражения—стационар, поликлиника,лабора-
тория, донорский пункт, причина заражения—контакт с больными и носителями,необез-
зараженный инструментарий и аппаратура., пути заражения—прямые нарушения сан.-
гигиенического режима, профессиональная деят-ть лаб-рий, загрязнение готовых лек-
ных форм бактериями. Возбудители ВБИ:кокки, ГР- бакт, возб-ли кишечной инф-ции,
возб-ли анаэробной инф-ции, вирусы (гепатитов, краснухи), ВИЧ, грипп, грибы рода
Кандида, простейшие. Признаки госпитальных штаммов:1стабильная циркуляция в ле-
чебных учреждениях, 2 участие данного возб-ля в эпидемиологической цепи, 3 мах
вирулентность штамма, 4 высокая устойчивость к дезинфектантам. Лаб. диаг-ка: ми-
кробиологическое исследование. Профилактика:1 соблюдение сан-гиг. режима(провет-
ривание, уборка и тд) 2 размещение больных по палатам соот-х инф-ции 3 рациональ-
ная антибиотикотерапия 4 контроль заживания раны.
Возб-ли раневых инф-ций: золотистый и эпидермальный стафилококки, пиогенный стреп
тококк, протей, синегнойные бактерии. Возб-ли респираторных инф-ций: стрептококк и
микоплазма пневмонии, микобактерия туберкулеза, вирусы гриппа.
Возб-ли кишечных инф-ций: эшерихия коли, клебсиела пневмонии, протеи, клостридии,
стафилококк.
Возб-ли урогенитальных инф-ций: эшерихия коли, протей, клебсиела пневмонии, стреп-
тококки группы В, уреаплазма, хламидии, микоплазма, гоноррея.
Возб-ли кровяных инф-ций—сепсис-полиэтиологичное заболевание:золотистый стафи-
лококк, эшерихия коли,протей, стрептококки,бактероиды.
|
|
|
