 |
Метод предельных разведений
|
|
|
|
Лабораторная работа № 4.
Санитарно-бактериологическое исследование воды
Подготовка проб
Пробы воды для микробиологического анализа отбирают в стерильные емкости. Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкости многократного применения, изготовленные из материалов, не влияющих на жизнедеятельность микроорганизмов. Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися пробками (силиконовыми, резиновыми или из других материалов) и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги) или с завинчивающимися крышками. Многоразовая посуда, в том числе пробки, должна выдерживать стерилизацию сухим жаром или автоклавированием. Стерильные емкости открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду не следует. После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой, обеспечивающей герметичность и не намокающей при транспортировании (ватные пробки не применять), и стерильным колпачком. При заполнении емкостей должно оставаться пространство между пробкой и поверхностью воды, чтобы пробка не смачивалась при транспортировке.
Поверхностные пробы отбирают с глубины 10-15см от поверхности воды или от нижней кромки льда. Придонные пробы отбирают в 30-50см от дна. Отбор проб следует производить с использованием различных плавсредств, с мостов, помостов в местах, где глубина водоемов не менее 0,5м. Недопустимо производить отбор проб с берега. Поверхностные пробы отбирают батометром с устройством для закрепления стерильных емкостей. Глубинные пробы отбирают специальным батометром, предназначенным для этих целей. При отборе одним батометром нескольких проб его каждый раз стерилизуют фламбированием. Из одной точки в первую очередь отбирают пробы для микробиологических исследований, а затем для других целей. Проруби делают, избегая внесения загрязнения со льда и инструментов. Руки перед отбором проб должны быть обеззаражены. Объем пробы должен быть не менее 500 мл. Доставку проб воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре 4-10°C. В холодный период года контейнеры снабжают термоизолирующими прокладками, обеспечивающими предохранение проб от промерзания. В лаборатории, если анализ по каким-либо причинам откладывают, пробы следует поместить в холодильник. При соблюдении указанной температуры транспортирования и хранения срок начала исследований от момента отбора проб не должен превышать 6 часов. Если пробы нельзя охладить, их анализ проводят в течение 2 часов после забора.
|
|
|
Санитарно-бактериологическое исследование воды
Схемы исследования проб воды
Для определения ОМЧ – общего микробного числа используют метод предельных разведений и метод глубинного или поверхностного посева.
Метод предельных разведений
Разведения готовят в стерильной дистиллированной воде, обычно применяют десятикратные последовательные разведения (1:10 – 10-1, 1:100– 10-2, 1:1000 – 10-3 т.д.).
При исследовании продукта твердой консистенции на технических весах отвесить, с помощью часового стекла и стерильного скальпеля пробу продукта (1 г), перенести в стерильную ступку и растереть в однородную массу. Полученную навеску количественно и асептически перенести в колбу со 100 мл стерильной дистиллированной воды (1:100). Суспензию в колбе тщательно взболтать в течение 3–5 мин, дать отстоять, затем стерильной пипеткой взять 1 мл полученной суспензии и последовательно перенести в ряд пробирок с 9 мл стерильной дистиллированной воды. Из полученной взвеси готовят ряд последующих разведений.
|
|
|
При исследовании воды 1 мл исследуемого объекта помещают в пробирку с 9 мл стерильной дистиллированной воды (1:10). Из полученной взвеси готовят ряд последующих разведений.
Метод глубинного посева
При глубинном способе посева из ряда последовательных разведений, находящихся в пробирках (1:100,1:1000), стерильной пипеткой отбирают 1 мл разведения, вносят в стерильную чашку Петри. Затем, осторожно приоткрыв под углом крышку, заливают дно чашки 20 мл расплавленной и охлажденной до 45 °С агаризованной среды. Крышку чашки закрывают и тщательно перемешивают питательную среду с посевным материалом, после чего чашки оставляют на горизонтальной поверхности до застывания агара. Засеянные чашки Петри помещают в термостат крышками вниз.
|
|
|
