Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону

Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону

В этом методе вместо карболового фуксина применяется 0, 5%-ный (вес/объем) водный малахитовый зеленый. Образец высушивают на воздухе на предметном стекле, фиксируют нагреванием, покрывают промокательной бу­магой или бумажной салфеткой, пропитанной до насы­щения красителем, и помещают на 5 минут над кипящей водой. Стекло промывают водопроводной водой, и мазок дополнительно окрашивают 30 секунд саф­ранином, как при окраске по Граму. Затем вновь промывают и подсушивают мазок промокательной бу­магой. Эндоспоры окрашиваются в ярко-зеленый цвет, а вегетативные клетки — в красно-коричневый.

Метод Виртца в модификации Саватеева

К насыщенному водному раствору (около 5%) малахитовой зелени добавляют 5% глицерина, пропитывают смесью полоски фильтровальной бумаги и высушивают их (лучше при 50°С). Затем готовят 0, 5% водный раствор сафранина, которым смачивают другие полоски фильтровальной бумаги, и высушивают. Сохраняют окрашенные бумажки в закрытых банках в защищенном от солнечного света месте.

Техника окраски. На фиксированный над пламенем мазок наносят 2—3 капли дистиллированной воды и накладывают полоску бумаги, окрашен­ной малахитовой зеленью. Препарат нагревают над пламенем до появления паров (3—4 раза), приблизительно в течение минуты. При испарении добавляется вода. После остывания препарата смывают краску с бумажкой струей водопроводной воды (30 секунд), и тотчас же на мокрую поверхность пре­парата кладут бумажку, окрашенную сафранином. Если необходимо, добавляют несколько капель воды. Через 30—40 секунд мазок промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Микроскопическая картина: свободно лежащие споры — зеленовато-голубого цвета, споры внутри микробных клеток — темно-зеленые, вегетативные формы микробов — красные.

Для окраски лучше брать малахитовую зелень в виде двойной соли ZnCl₂ (медно-желтые кристаллы), хуже — щавелевокислая соль (фиолетово-зеленые или ярко-зеленые кристаллы с бронзовым блеском).

Модификация Шеффер и Фултона.

1. На фиксированный в пламени мазок наливают насыщенный (5%) водный раствор малахитовой зелени на 30—60 секунд с подогреванием до появления паров (3—4 раза).

2. Краску смывают текущей водой 30—40 секунд.

3. Наливают 0, 5% водный раствор сафранина приблизительно на 30 секунд.

4. Промывают водой, высушивают через фильтровальную бумагу.

Микроскопическая картина: споры — зеленые, вегетатив­ные формы —красные.

Способ Пешкова

Наиболее простой и демонстративный; он не требует химических протрав и дифференцировки.

Приготовленный мазок:

1) фиксируют на пламени горелки или смесью спирта и формалина,

2) окрашивают кипящей леффлеровской метиленовой синькой (над пламенем горелки) в течение 15—20 секунд,

3) смывают водой,

4) докрашивают 0, 5% водным раствором нейтральрота в течение 30 секунд,

5) промывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина: споры — голубого или синего цвета, молодые споры — черно-синие, цитоплазма вегетативных форм — розовая, хроматиновые элементы протоплазмы окрашиваются в фиолетовый цвет.

Способ Мюллера

1. Приготовленный на предметном стекле мазок из исследуемой культуры фиксируют на пламени.

2. На мазок наливают 5% водный раствор хромовой кислоты на 1—3 минуты.

3. Промывают препарат водой и слегка просушивают.

4. Через полоску чистой фильтровальной бумаги красят карболовым раствором фуксина при нагревании (до появле­ния паров) в течение 3—4 минут.

5. Обесцвечивают 5% водным раствором серной кислоты в течение 5 секунд.

6. Промывают водой.

7. Окрашивают допол­нительно леффлеровской синькой 1—2 минуты.

8. Промывают водой и вы­сушивают через фильтровальную бумагу.

Микроскопическая картина: споры — красные, вегета­тивные формы — синие.

Способ Ауески

На приготовленный, высушенный на воздухе (нефикси­рованный) мазок наливают 1—2% водный раствор соляной кислоты и подогре­вают на пламени до появления паров (3—4 раза). Затем препарат промывают водой, высушивают через фильтровальную бумагу, фиксируют на пламени и окрашивают карболовым раствором фуксина при нагревании (до появления паров) в течение 3—5 минут. Потом препарат обесцвечивают 5% водным рас­твором серной кислоты в течение нескольких секунд (до бледно-розовой окра­ски), промывают водой и дополнительно окрашивают леффлеровской метиле­новой синькой или 1% водным раствором малахитовой зелени в течение 2 минут. Краску смывают водой, мазок высушивают.

Микроскопическая картина; споры — красные, вегета­тивные формы — синие (или зеленые).

Способ Клейна

1) готовят в пробирке густую эмульсию путем смыва исследуемой культуры физиологическим раствором,

2) к эмульсии прибав­ляют равное количество карболового раствора фуксина,

3) пробирку со смесью нагревают на пламени (до появления паров) в течение 5 минут,

4) из прогретой смеси приготовляют мазок, высушивают его и фиксируют,

5) обес­цвечивают 1% водным раствором серной кислоты в течение 5—10 секунд,

6) промывают водой,

7) слегка подсушивают,

8) окрашивают леффлеровской синькой в течение 1—3 минут,

9) смывают водой и мазок обсушивают.

Микроскопическая картина: споры — красные, вегета­тивные формы — синие. Недостаток способа — значительный расход краски (фуксина).

⇐ Предыдущая11121314151617181920Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: