 |
Контрольні питання. Заняття № 3. Зміст заняття. Самостійна робота студентів. Оснащення заняття. Методика виконання завдання
|
|
|
|
КОНТРОЛЬНІ ПИТАННЯ
1. Які матеріали необхідні для виготовлення бактерійних препаратів — мазків?
2. Які розчини використовують для фарбування бактерій?
3. Методи фіксації бактерійних препаратів і їх призначення;
4. Способи обробки предметного скла;
5. Техніка фарбування бактерій простим методом;
6. Правила сушки препаратів;
7. Вимоги щодо відбору бактеріальної культури для виготовлення мазку;
8. Методика нанесення бактеріальної культури на предметне скло, взятої з щільного і рідкого поживного середовища.
Заняття № 3
Тема: Складні і спеціальні методи фарбування мікроорганізмів.
Мета заняття: Навчити студентів фарбуванню мікробів складним способом за методом Грама та спеціальним методам фарбування спор і капсул мікроорганізмів.
ЛІТЕРАТУРА: I. 41-46; IV. 46-47; VІ. 32-33; VІІ. 36-39
ЗМІСТ ЗАНЯТТЯ
Викладач:
1. проводить опитування студентів з пройденого та наступного матеріалу;
2. демонструє фарбування бактерій за методом Грама, спор і капсул за методом Пєшкова і Буррі, пояснює сутність цих методів.
САМОСТІЙНА РОБОТА СТУДЕНТІВ
Кожен студент:
1. готує мазки з чистих культур і проводить їх фарбування за методом Грама, Пєшкова, Буррі;
2. проводить мікроскопію препаратів, замальовує в зошиті, підписує під малюнками латинські назви бактерій.
ОСНАЩЕННЯ ЗАНЯТТЯ
Забезпечити кожного студента:
- мікроскопом, предметним склом, спиртівкою, бактеріологічною петлею, практикумом з мікробіології.
Забезпечити кожні дві людини:
- фільтрованим папером, імерсійною олією, промивалкою з ванночкою, олівцем по склу, фарбуючими розчинами, реактивами (генціанвіолет у вигляді смужок фільтрувального паперу, розчин Люголя, 96% спирт, карболовий фуксин, метиленовою синню, 0, 5% водний розчин нейтральроту, склянка з дезинфікуючим розчином );
|
|
|
Забезпечити підгрупу студентів:
- трьома, пробірками з грамнегативною (Асеtоbаctег асеti) і грампозитивною культурою (Вас. subtilis, Вас. mycoides), спороутворюючою (Вас. mesentericus), капсуло утворюючою (Вас. mucylaginosus, або Аzоtоbасtег).
Студенти повинні мати кольорову пасту або олівці (синього і червоного кольору).
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ ЗАВДАННЯ
Складні та спеціальні способи фарбування бактерій засновані на властивостях фізико — хімічної будови мікробної клітини. Вони використовуються для диференціації мікроорганізмів та вивчення їх клітинної структури.
В зв'язку з тим, що хімічний склад цитоплазми і оболонки мікробів відрізняється, вони по-різному сприймають одні і тіж фарби та неоднаково віддають їх при наступному знебарвленні спиртом, кислотами і. т. п. Частини мікробної клітини вибірково реагують на дію фарбуючих розчинів.
Техніка фарбування за методом Грама. На знежирене предметне скло, поділене на дві частини наносять окремо грампозитивні та грамнегативні мікроорганізми. Мазки висушують та фіксують. На препарат наносять смужку фільтрувального паперу з генціанвіолетом на 2 хвилини, знімають папір пінцетом, зливають рідину і наливають розчин Люголя на 2 хвилини. Після цього розчин зливають і препарат обробляють 96% етиловим спиртом протягом 30секунд, похитуючи. Змивають водою і фарбують карболовим фуксином 2 хвилини. Фарбу змивають, препарат висушують фільтрувальним папером і мікроскопують.
Грампозитивні мікроби забарвлюються в синьо-фіолетовий колір, грамнегативні в червоний колір.
Сутність фарбування за методом Грама заснована на особливості фізико — хімічної будови мікробної клітини.
Грампозитивні мікроби містять в цитоплазмі магнієву сіль РНК і поліпептид муреін, які з гінціанвіолетом в присутності йоду, а також кислої реакції (РН- 2-3) цитоплазми утворюють стійкий комплекс (спиртонерозчинний), який зберігається при послідуючому впливу спирту і карболового фуксину і тому мають синьо-фіолетовий колір.
|
|
|
Грамнегативні мікроорганізми не містять вище перелічувані компоненти в оболонці і протоплазмі клітини, або містять в невеликій кількості, тому в них не утворюється стійке з'єднання фарби з оболонкою і протоплазмою, в результаті чого вони знебарвлюються спиртом. При додатковому фарбуванні карболовим фуксином, вони сприймають червоний кольор фуксину.
Фарбування спор за методом Пєшкова. Спори - це овальні світлозаломляючі тільця, які утворюються всередині мікробної клітини при несприятливих умовах. Вони мають щільну багатошарову оболонку (3-5 шарів), тому простим способом не фарбуються. Для їх фарбування застосовують спеціальні методи, які засновані на попередньому руйнуванні оболонок, шляхом протравлення (хромовою, карболовою, соляною кислотами), чи підігрівання над полум'ям спиртівки.
Сутність способу фарбування спор за методом Пєшкова складається в том, що на зафіксований препарат наносять метиленову синьку і тримають над полум'ям спиртівки протягом 15-20 секунд, доводячи до кипіння. Потім фарбу змивають водою, після чого додатково фарбують 0, 5% водним розчином нейтральроту (30 секунд), змивають водою і мікроскопують. Спори фарбуються в блакитний або синій; вегетативні форми - рожевий колір.
|
|
|
