 |
13. Доказательство бивалентной природы IgG.
|
|
|
|
13. Доказательство бивалентной природы IgG.
Общей структурной единицей всех иммуноглобулинов является комплекс из четырех полипептидных цепей-двух идентичных между собой легких цепей и тяжелых с молекулярной массой по 53 000 (Н-цепи).
Каждая из легких цепей прочно соединена с NH2-концевыми участками тяжелых цепей благодаря наличию межцепочечных дисульфидных связей и множеству слабых гидрофобных‚ электростатических и других межатомных взаимодействий. Аналогичные свяви существуют и межлу свободными участками тяжелых цепей.
При действии протеолитического фермента папаина молекула IgG распадается на три фрагмента, два из которых идентичны и сохраняют способность связывать антигены (так называемые Fab-фрагменты; от английского fragment. antigen binding) и третий, способный к кристаллизации (так называемый Fc-фрагмент, от английского fragment cristalline). Именно Fс-фрагмент ответствен за эффекторную функцию антител-связывание белка комплемента CIq, транспорт через мембраны, взаимодействие с мембранными рецепторами и т. д.
Другой протеолитический фермент пепсин разрывает пептидную связь, расположенную ближе к СООН-концу цепи, от S-S-связи между Н-цепями в Fс-фрагменте. В результате образуются так называемый рFс’-фрагмент, представляющий собой остатки тяжелых цепей, и соединенные дисульфидными связями два Fab-фрагмента, обозначаемые как F(ab’)2 фрагмент. Последний также сохраняет способность. к связыванию антигенов.
14. Критерии выбора ферментов для их использования в ИФА в качестве меток.
К выбору ферментных меток в ИФА предъявляется ряд общих требований. Основными являются следующие:
а)_ высокая специфичность и удельная каталитическая активность фермента, позволяющая обнаруживать ферментативную метку в низких концентрациях;
|
|
|
б) доступность ферментов; возможность получения достаточно чистых ферментных препаратов, сохраняющих высокую ферментативную активность после химической модификации при получении коньюгата с антителами или антигенами;
в) стабильность в оптимальных условиях взаимодействия антигена с антителом;
г) простота и чувствительность метода определения концентрации фермента.
Наибольшее распространение в гетерогенном ИФА среди ферментов, удовлетворяющих перечисленным выше требованиям, получили пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза и р-В-галактозидаза. Все три фермента определяются на уровне пикомолярных концентраций.
Наиболее доступной является пероксидаза.
15. Характеристика классов иммуноглобулинов: IgG, IgA, IgM, IgE, IgD.
ИММУНОГЛОБУЛИНЫ (Ig), группа близких по хим. природе и св-вам глобулярных белков позвоночных животных и человека, к-рые обычно обладают св-вами антител, т. е. специфич. способностью соединяться с антигеном, к-рый стимулирует их образование. Иммуноглобулины продуцируются В-лимфоцитами и находятся либо в своб. виде в крови и нек-рых др. жидкостях организма, либо в виде рецепторов на поверхностных мембранах клеток. Семейство иммуноглобулинов у высших позвоночных включает в себя неск. классов; у человека их известно пять (G, М, A, D, Е). Классы иммуноглобулинов делятся на подклассы. Молекулы иммуноглобулинов симметричны. Они построены из " легких" (ок. 220 аминокислотных остатков) и " тяжелых" (450-600 аминокислотных остатков) полипептидных цепей (соотв. L- и Н-цепи), скрепленных дисульфидными связями и нековалентными взаимодействиями (см., напр., на рис. 1 схему строения IgG). В антителах человека обнаружено два вида легких цепей (( и l) и пять видов тяжелых цепей (g, m, a, d и e), отличающихся аминокислотной последовательностью. При обозначении иммуноглобулинов в ниж. индексах греческих букв цифры показывают, сколько цепей содержится в молекуле. Тяжелые цепи, характерные для каждого из классов и подклассов иммуноглобулинов, содержат по одному или более олигосахаридному фрагменту.
|
|
|
lgM активируют систему комплемента;
IgE связывается со специфическими рецепторами на поверхности тучных клеток и базофилов с высвобождением из этих клеток медиаторов аллергии;
IgA секретируется в различные жидкости организма, обеспечивая секреторный иммунитет;
IgD функционирует в основном в качестве мембранных рецепторов для антигена;
в IgG проявляет разнообразные виды активности, в том числе способность проникать через плаценту.
IgG: это мономеры, включающие 4 субкласса (IgGl – 77%; IgG2 – 11%; IgG3 – 9%; IgG4 – 3%), которые отличаются друг от друга по аминокислотному составу и антигенным свойствам. Период полураспада составляет 20-28 дней, а синтезируется в течение суток от 13 до 30 мг/кг. На их долю приходится 80% от общего содержания ИГ. Они защищают организм от инфекций. способствуя тем самым фагоцитозу возбудителя. IgG4 участвует в аллергических реакциях и не способен фиксировать комплемент. Антитела класса IgG играют основополагающую роль в гуморальном иммунитете при инфекционных заболеваниях, вызывая гибель возбудителя с участием комплемента и опсонизируя фагоцитарные клетки. Они проникают через плаценту и формируют антиинфекционный иммунитет у новорожденных. Они способны нейтрализовать бактериальные экзотоксины, связывать комплемент, участвовать в реакции преципитации.
|
|
|
