 |
Методы определения Staphylococcus aureus
|
|
|
|
Средства контроля и вспомогательные устройства
Аппаратура, материалы, реактивы
по ГОСТ 9225 со следующими дополнениями:
сухая плазма кроличья, цитратная;
контрольный штамм Staphylococcus aureus;
мембранные фильтры;
калия теллурит [2], раствор с массовой концентрацией 10 г/дм 
;
глицин [1], раствор с массовой концентрацией 200 г/дм ;
кристаллический фиолетовый [6];
натрия пируват [8], раствор с массовой концентрацией 200 г/дм ;
литий хлористый, гексагидрат [4];
триптон;
экстракт дрожжевой [3] или
экстракт дрожжевой, очищенный [7];
экстракт мясной;
фуксин основной [5], спиртовой раствор с массовой концентрацией 50 г/дм ;
яйца куриные пищевые по ГОСТ 27583;
витаминный препарат "ЭКД" сухой [11].
Питательные среды
3.2.1 Гидролизованное и стерильное обезжиренное молоко по ГОСТ 10444.11 (3.3.1 и 3.3.3).
3.2.2 Среды питательные сухие для определения Staphylococcus aureus [9] или питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой и питательный агар сухой II, выпускаемые Дагестанским НПО "Питательные среды" [10].
3.2.3 Желточную эмульсию готовят следующим образом
Свежее куриное яйцо моют водопроводной водой, затем протирают ваткой, смоченной в спирте, и обсушивают. Отделяют желток и вносят его в 100 см стерильного раствора хлористого натрия по ГОСТ 9225. Тщательно перемешивают. Приготовленная эмульсия может храниться при температуре 0-5 С° не более 72 ч.
3.2.4 Солевой бульон*:
________________
* Допускается применение солевого бульона [9], который готовится согласно указанию на этикетке.
Состав: натрий хлористый (NaCl) - 7,5 г;
питательный сухой бульон - 1,5 г;
или гидролизованное молоко - 100 см .
Приготовление: в 100 см дистиллированной воды вносят 1,5 г сухого питательного бульона, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватный тампон, добавляют 7,5 г NaCl, устанавливают рН (6,9±0,1).
|
|
|
Разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение (10±1) мин.
Или к 100 см гидролизованного молока добавляют 7,5 г NaCl, устанавливают рН (6,9±0,1), разливают и стерилизуют, как указано выше.
3.2.5 Желточно-солевой агар*
________________
* Допускается использовать солевой агар [9], который готовится согласно указанию на этикетке и к которому после стерилизации добавляется желточная эмульсия или обезжиренное молоко.
Состав: питательный агар*
для культивирования микроорганизмов (на основе гидролизата кильки) [10] - 35 г
или
питательный агар II*
(на основе гидролизата кормовых дрожжей) [10] - 24 г;
натрий хлористый (NaCl) - 75 г;
эмульсия желточная - 50,0 см ;
вода дистиллированная - 1 дм .
________________
* При изменении заводом-изготовителем количества вносимой среды на 1 дм дистиллированной воды, количество среды вносится согласно указанию на этикетке.
Приготовление: в 1 дм дистиллированной воды вносят 36 г питательного агара для культивирования микроорганизмов или 24 г питательного агара сухого II, добавляют 75 г хлористого натрия (NaCl), кипятят до полного расплавления агара, фильтруют через ватный тампон, разливают во флаконы или колбы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение (20±1) мин. После стерилизации охлаждают до температуры (45±1) °С и добавляют 50 см предварительно подготовленной желточной эмульсии. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки со средой хранят в холодильнике не более 5 сут.
3.2.6 Молочно-солевой агар*
________________
* Допускается использовать солевой агар [9], который готовится согласно указанию на этикетке и к которому после стерилизации добавляется желточная эмульсия или обезжиренное молоко.
Состав: питательный агар* для культивирования микроорганизмов (на основе гидролизата кильки) [10] - 35 г
|
|
|
или питательный агар II* (на основе гидролизата кормовых дрожжей) [10] - 24,0 г;
натрий хлористый (NaCl) - 75,0 г;
молоко обезжиренное - 100 см ;
вода дистиллированная - 1 дм .
________________
* При изменении заводом-изготовителем количества вносимой среды на 1 дм дистиллированной воды, количество среды вносится согласно указанию на этикетке.
Приготовление: среду готовят, как указано в 3.2.5, но после охлаждения до температуры (45±1) °С добавляют вместо желточной эмульсии 100 см стерильного обезжиренного молока. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки со средой хранят в холодильнике не более 5 сут.
3.2.7 Агар Байрд-Паркера*
_________________
* Допускается использовать агар Байрд-Паркера [9]. Среда готовится согласно указанию на этикетке.
Состав. Основа среды:
триптон - 10,0 г;
дрожжевой экстракт [3] - 1,0 г;
мясной экстракт - 5,0 г;
литий хлористый, гексагидрат [4] - 5,0 г;
агар - 12,0-20,0 г;
вода дистиллированная - 1 дм .
Раствор пирувата натрия:
пируват натрия [8] - 20,0 г;
вода дистиллированная - 100 см .
Раствор глицина:
глицин [1] - 20,0 г;
вода дистиллированная - 100,0 см .
3.2.7.1 Приготовление основы среды: в 1 дм дистиллированной воды вносят 10 г триптона, 5 г мясного экстракта, 1 г дрожжевого экстракта, 5 г хлористого лития, 20 г агара.
При отсутствии триптона применяют гидролизат казеиновый сухой, а при отсутствии дрожжевого экстракта применяют витаминный препарат "ЭКД" сухой [11].
При отсутствии мясного экстракта, триптона и дрожжевого экстракта вместо дистиллированной воды применяют 1 дм мясопептонного бульона или питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой или питательный агар сухой II [10].
Все компоненты, внесенные в 1 дм дистиллированной воды (мясопептонный бульон), нагревают и перемешивают до полного растворения, охлаждают до температуры 50-60 °С. Устанавливают рН (7,2±0,1), разливают в колбы или бутылки по 90 см и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение (20±1) мин.
При использовании сухой среды в 1 дм дистиллированной воды вносят 36 г питательного агара для культивирования микроорганизмов или 24 г питательного агара сухого II, добавляют 5 г хлористого лития. Нагревают до полного растворения, охлаждают до температуры 50-60 °С, устанавливают рН (7,2±0,1), разливают и стерилизуют, как указано выше.
|
|
|
Готовую основу среды хранят не более 30 сут при температуре (6±2) °С.
3.2.7.2 Перед использованием к 90 см расплавленной основы среды добавляют асептически стерилизованные фильтрованием через мембранный фильтр растворы: 6,3 см раствора глицина, 5 см раствора пирувата натрия; 1 см раствора теллурита калия; 5 см желточной эмульсии.
Допускается растворы глицина, пирувата натрия, теллурита калия и желточную эмульсию готовить в асептических условиях на стерильной дистиллированной воде.
После тщательного перемешивания приготовленную среду разливают в чашки Петри.
Чашки со средой можно хранить не более 48 ч.
|
|
|
