28.  Микроскопирование.. Приготовление препаратов и требования к ним.

28.  Микроскопирование.

Приготовление препаратов и требования к ним.

При работе с естественным освещением рабочий стол лаборанта должен стоять у окна, чтобы света было достаточно. Естественный свет направляют в конденсор плоским зеркалом. Конденсор должен быть поднят и диафрагма открыта. Устанавливают необходимый объектив. Контролируя глазом, поворачивают зеркало до тех пор, пока поле зрения не станет равномерно и интенсивно освещенным.

При искусственном освещении осветитель устанавливают так, чтобы пучок света был направлен на зеркало микроскопа. При этом пользуются вогнутой его поверхностью. Препарат помещают на предметный столик, прижимают клеммами и рассматривают сначала под малым увеличением. Для этого препарат устанавливают по объектив малого увеличения, конденсор опускают; при сильном свете закрывают и диафрагму.

Поворачивая макровинт, нужно найти рабочее расстояние между объектом и линзой объектива, при котором будет получено изображение. Вращая макровинт от себя, опускают тубус, вращая на себя – поднимают. Макровинтом осторожно перемещают тубус до появления четкого изображения объекта в поле зрения. Вращая верхнюю часть предметного столика, винтами устанавливают в центре поля зрения ту часть объекта, которую нужно рассматривать при большом увеличении. Затем, не поднимая тубуса, нужно повернуть револьвер, чтобы поместить объект под объектив большего увеличения. Свет необходимо усилить: открыть диафрагму и приподнять конденсор до среднего положения. Снова находят рабочее расстояние между объективом и объектом. Фокусировку проводят очень осторожно, чтобы не допустить соприкосновения объектива с препаратом и повреждения того или другого, так как объектив почти касается препарата. Под контролем глаза медленно поднимают тубус доя получения изображения объекта. Вращением микровинта добиваются большой четкости изображения.

Иммерсионное микроскопирование применяют при необходимости большого увеличения. На препарат, а в некоторых случаях и на верхнюю линзу конденсора наносят каплю иммерсионного масла. Освещение должно быть сильным, т. е. конденсор поднят до отказа и диафрагма открыта. Препарат помещают на предметный столик и прижимают к нему клеммами. Объектив *90 погружают в каплю иммерсионного масла до соприкосновения с препаратом. Затем, глядя в окуляр, поднимают тубус очень осторожными движениями макровинта, так как рабочее расстояние между объективом и объектом в этом случае очень мало. При помощи микровинта получают четкое изображение и просматривают объект послойно.  

Приготовление препаратов для микроскопирования.

Биологические препараты для микроскопирования готовят из крови, выделений человека (моча, кал), колоний бактерий, тканей животных и растений и многих других объектов. В одних случаях приготовление препаратов несложно, в других требует специальной техники.

Просто готовят так называемые нативные препараты, т. е. объекты в естественном их виде. В этом случае материал наносят на предметное стекло и покрывают тонким покровным стеклом. Иногда его смешивают с физиологическим раствором или глицерином для разжижения, просветления и предохранения от высыхания. Так готовят препараты для микроскопического исследования мочи, кала, мокроты.

Различные части препарата воспринимают краску по-разному, что делает их более четкими, позволяет отличить друг от друга различные структуры. Способ окраски зависит от особенностей исследуемого материала и цели исследования.  

Для бактериоскопии существует большое количество методов окраски, в том числе и сложных – двумя и более красителями. Так, по окраске генцианвиолетом с докраской фуксином по Граму все микроорганизмы делят на грамположительные, окрашенные в фиолетовый цвет, и грамотрицательные, окрашенные в красный цвет.

Существует негативная окраска, при которой красится фон мазка и на нем отчетливо видны неокрашенные микробы, например, бледная спирохета.

Препарат для микроскопии не может быть толстым или плотным, так как свет должен хорошо пронизывать его, поэтому приготовление гистологических препаратов из тканей требует довольно сложной техники.

Ткань обрабатывают спиртами, формалином или фиксирующими смесями, пропитывают целлоидином, парафином или желатином. Затем ткань нарезают тончайшими слоями при помощи специального прибора – микротома. После этого срезы окрашивают гематоксилин-эозином, Суданом, сложными смесями красителей, серебром и т. д. Среды закрепляют на предметных стеклах смесью белка с глицерином. Для сохранения препаратов срезы заливают канадским бальзамом и покрывают покровным стеклом. Бальзам засыхает, и гистологический препарат можно хранить в течение многих лет.