 |
Лабораторные работы для выполнения
|
|
|
|
НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ
Раздел V. Биохимия витаминов и гормонов.
Тема 5.4. Механизм действия гормонов. Гормональная регуляция
Обмена углеводов и липидов.
٭ Количественное определение малонового диальдегида
Свободными радикалами (R*) называют атомы, молекулы или структурные фрагменты молекул, имеющие на внешних орбиталях неспаренные электроны. В силу исключительно высокой реакционной способности радикалы могут взаимодействовать с различными молекулами, вызывая их повреждение. Малоновый диальдегид (МДА)― конечный продукт свободно-радикального окисленияполиненасыщенных высших жирных кислот, входящих в состав фосфолипидов биологических мембран. МДА - химически очень активное вещество: его альдегидные группы взаимодействуют с NH2-группами белков, вызывая необратимую денатурацию последних.
Активация в клетке пероксидных и свободно-радикальных процессов ― это один из факторов патогенеза атеросклероза, ишемической болезни сердца, инфаркта, инсульта, язвенной и ожоговой болезни, онкологических, воспалительных и инфекционных заболеваний, синдрома адаптационного перенапряжения и хронической усталости, диабета. Синдром пероксидации проявляется так же при низком уровне антиоксидантов, стрессе любого происхождения, действии синтетических лекарств и ксенобиотиков, гиподинамии, старении организма, избыточном потреблении в пищу жиров и углеводов, гипоксических состояниях, воздействия вибрации, электромагнитных полей, радиоактивного и ультрафиолетового излучений.
Цель работы. Определить содержание МДА в сыворотке крови.
Принцип метода. МДА реагирует с тиобарбитуратовой кислотой, при этом образуется окрашенное соединение –триметиловый комплекс. Оптическую плотность окрашенного раствора определяют на ФЭК при 532 нм и рассчитывают концентрацию МДА, исходя из молярного коэффициента экстинции триметилового комплекса.
|
|
|
Ход определения. Студентам выдается готовый лизат, приготовленный следующим образом: к 2 мл крови добавляют 0,2 мл 0,1%-ного раствора Тритон Х-100 и оставляют на 30 мин при 0°С. МДА определяют в образовавшемсялизате по нижеприведенной схеме:
| № | Реактивы и этапы | Пробы | |
| Опыт | Контроль | ||
| Лизат, мл | 0,5 | ― | |
| Физиологический раствор, мл | 1,5 | ||
| Трихлоруксусная кислота (30%-ный раствор), мл | |||
| Инкубируют 15 мин при 0°С | |||
| Центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин | |||
| Надосадочную жидкость аккуратно сливают в помеченные стеклянные пробирки, отбирают из них точно по 2 мл надосадочной жидкости и добавляют: | |||
| Тиобарбитуратовая кислота (0,5%-ный раствор), мл | |||
| Кипятят 15 мин (осторожно!) | |||
| Охлаждают до 15-25°С | |||
| Фотометрируют против воды (λ=532 нм, толщина кюветы 1 см). D532 | |||
| Dоп―Dк |
Расчеты
Концентрацию МДА (Сх) вычисляют по формуле:
Cx=76,92•(Dоп―Dк) (мкмоль/л)
Примечание. Величина 76,92 рассчитывается исходя из молярного коэффициента экстинкции триметилового комплекса (1,56·105 М-1см-1) и разведения.
К методическим рекомендациям
Тема 5.5. Гормональная регуляция обмена белков, кальция, воды, натрия.
Вопросы для самоподготовки.
1. Назовите гормоны, участвующие в регуляции обмена белков.
2. Перечислите гормоны, обладающие анаболическим эффектом.
3. Назовите катаболические гормоны.
4. Назовите гормон, обладающий самым мощным анаболическим эффектом.
5. Назовите механизм действия СТГ.
6. Назовите клетки (органы) – мишени для СТГ.
7. Какие соединения называются соматомединами?
|
|
|
8. Назовите виды и функции соматомединов.
9. Назовите биохимические процессы, протекающие в начальные этапы действия СТГ.
10. Охарактеризуйте биохимические процессы, протекающие на ранних этапах действия СТГ.
11. Охарактеризуйте процессы, протекающие на поздних этапах действия СТГ.
12. Назовите заболевание, возникающее при гиперсекреции СТГ в молодом возрасте.
13. Назовите заболевание, возникающее при гиперсекреции СТГ у взрослого человека.
14. Какие биохимические процессы нарушаются при гипосекреции СТГ?
15. Назовите медиаторы, с помощью которых реализуется действие СТГ на клетки (органы) – мишени.
16. Охарактеризуйте механизм анаболического эффекта инсулина.
17. Назовите клетки (органы) – мишени для инсулина.
18. Охарактеризуйте механизм анаболического эффекта половых гормонов.
19. Назовите клетки (органы) – мишени для андрогенов.
20. Назовите клетки (органы) – мишени для эстрогенов.
21. Укажите отличия в действии андрогенов и эстрогенов на процессы биосинтеза белка.
22. Охарактеризуйте механизм действия тиреоидных гормонов на процессы биосинтеза белка.
23. Назовите гормоны, угнетающие биосинтез белка.
24. Охарактеризуйте механизм действия кортикостероидов на биосинтез белка.
25. Охарактеризуйте механизм действия АКТГ на процессы биосинтеза белка.
26. Составьте схему гормональной регуляции биосинтеза белка.
27. Назовите гормоны, ускоряющие распад белка в лимфоидной ткани.
28. Назовите гормоны, усиливающие биосинтез белка, преимущественно, в печени.
29. Какую биологическую роль выполняет вода в организме?
30. Укажите процентное содержание жидкости в различныхкомпартментах организма.
31. Способы определения жидкости в каждом из компартментов организма.
32. Назовите главный фактор, определяющий количество воды в организме, поддерживающий равновесие междуинтра- и экстрацеллюлярными объемами жидкости.
33. Назовите ион, от концентрации которого зависит объем циркулирующих и внутриклеточных жидкостей.
34. Назовите ион, преобладающий во внутриклеточной жидкости.
35. Назовите ион, преобладающий во внеклеточной жидкости.
36. Назовите железисто-эпителиальные структуры, участвующие в поддержании водно-солевого баланса.
|
|
|
37. Механизм действия антидиуретического гормона.
38. Укажите точку приложения действия АДГ.
39. Назовите, на какой из факторов, регулирующих осмотическое давление, действует альдостерон.
40. Назовите железисто-эпительальные структуры, через которые реализуется действие альдостерона.
41. Как влияет альдостерон на концентрацию ионов натрия и калия в крови?
42. Назовите фермент, осуществляющий перенос одновалентных ионов натрия и калия. Где в клетке расположен этот фермент?
43. Какие соединения избирательно ингибируют работу этого фермента?
44. Составьте схему действия этого фермента и объясните принцип его работы.
45. Назовите заболевание и его симптомы, возникающие при недостатке АДГ.
46. Где и какими клетками вырабатывается ренин?
47. Охарактеризуйте механизм действия ренин-ангиотензиновой системы.
48. Назовите норму концентрации кальция в крови.
49. Назовите состояние, возникающее при снижении концентрации кальция в крови.
50. Назовите последствия, возникающие при повышении уровня кальция в крови.
51. Пределы физиологических колебаний уровня кальция в крови.
52. Назовите органы и ткани организма, от функционального состояния которых зависит уровень кальция в крови.
53. Роль кишечника в поддержании концентрации кальция.
54. Роль почек в поддержании уровня кальция.
55. Назовите гормоны и витамин, контролирующие уровень кальция в крови.
56. Объясните механизм действия паратгормона.
57. Назовите гормон, снижающий уровень кальция в крови.
58. Объясните механизм действия кальцитонина.
59. Составьте общую схему регуляции уровня кальция в крови. Какое значение в регуляции имеет кальциферол ихолекальциферол?
60. Назовите гормоны и органы-мишени, которые обеспечивают кальциевый гомеостаз.
61. Назовите гормон, синтезирующийся клетками паращитовидных желез.
62. Назовите гормон, регулирующий кальциевый обмен и синтезируемый клетками коры надпочечников.
63. Назовите гормон, усиливающий реабсорбцию ионов натрия в почечных канальцах.
64. Как изменится секреция АДГ при гиповолемии?
|
|
|
65. Назовите вещества, обмен которых регулируется вазопрессином.
66. Назовите гормон, недостаток которого приводит к развитию несахарного диабета.
67. Назовите заболевание, развивающееся при гиперсекреции альдостерона.
Вопросы, задачи и упражнения для самоконтроля.
1. Для абсорбтивного периода характерно:
1) повышение концентрации инсулина в крови;
2) ускорение синтеза жиров в печени;
3) ускорение глюконеогенеза;
4) ускорение гликолиза в печени;
5) повышение концентрации глюкагона в крови.
2. Под влиянием инсулина в печени ускоряется:
1) биосинтез белков;
2) биосинтез гликогена;
3) глюконеогенез;
4) биосинтез жирных кислот;
5) гликолиз.
3. Выберите неправильное утверждение. Инсулин:
1) ускоряет транспорт глюкозы в мышцы;
2) ускоряет синтез гликогена в печени;
3) стимулирует липолиз в жировой ткани;
4) тормозит глюконеогенез;
5) ускоряет транспорт аминокислот в мышцы.
4. Выберите гормон, синтез и секреция которого влияет на повышение осмотического давления:
1) альдостерон;
2) кортизол;
3) вазопрессин;
4) адреналин;
5) глюкагон.
5. Подберите каждому из веществ соответствующее место синтеза:
| 1. вазопрессин; 2. альдостерон; 3. ренин; 4. ангиотензин. | а) печень; б) почки; в) гипоталамус; г) надпочечники. |
6. Укажите соответствие:
| 1. вазопрессин; 2. альдостерон; 3. оба; 4. ни один. | а) стимул для синтеза и секреции – образованиеангиотензинаII; б) стимул для синтеза и секреции – повышение ионов натрия; в) органы-мишени – периферические артерии; г) дефицит гормона приводит к полиурии. |
7. Выберите из перечисленных веществ компоненты, составляющие систему ренин-ангиотензин-альдостерон и расположите их в порядке функционирования:
1) ангиотензинI;
2) ангиотензинII;
3) ренин;
4) альдостерон;
5) ангиотензиноген.
8. К указанным гормонам подберите соответствующие органы-мишени:
| 1. печень; 2. костная ткань и кишечник; 3. почки и костная ткань; 4. почки. | а) альдостерон; б) кальцитриол; в) паратгормон; г) глюкагон. |
9. Выберите положение, правильно отражающие роль кальцитриола:
1) увеличивает скорость всасывания кальция в кишечнике;
2) стимулирует реабсорбцию кальция в почках;
3) стимулирует мобилизацию кальция из костей;
4) стимулирует реабсорбцию натрия в почках;
5) является предшественником 7-дегидрохолестерина.
10. Снижение концентрации кальция в плазме крови вызывает:
1) увеличение секреции паратгормона;
2) ингибирование активности парафолликулярных клеток щитовидной железы;
3) гидроксилирование метаболитов витамина D3;
4) уменьшение экскреции кальция почками;
5) повышение скорости растворения кости.
|
|
|
11. Укажите соответствие:
| 1. паратгормон; 2. кальцитриол; 3. оба; 4. ни один. | а) участвуют в мобилизации кальция из костей; б) активируется путем частичногопротеолиза; в) активная форма образуется в результатегидроксилирования; г) при протеолитическом расщеплении образует С-концевые биологически активные фрагменты. |
12. Выберите правильные утверждения. Паратгормон:
1) содержит дисульфидную связь;
2) секреция регулируется концентрацией кальция в крови;
3) недостаточность гормона приводит к снижению концентрации кальция;
4) для проявления биологической активности необходима вся молекула гормона целиком;
5) увеличивает эффективность всасывания кальция в кишечнике.
13. Выберите утверждения, правильно характеризующие паратгормон:
1) одноцепочечный пептид;
2) N-концевой пептид проявляет полную биологическую активность;
3) стимулом, вызывающим секрецию гормона, является снижение концентрации ионов кальция;
4) недостаток гормона вызывает снижение концентрации ионов кальция и фосфатов в крови.
К оглавлению раздела
Лабораторная работа
|
|
|
