 |
Раздел: «частная бактериология»
|
|
|
|
КУРС: «СПЕЦИАЛЬНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ»
Занятие 1. Дата _____. Тема: «Возбудители кишечных инфекций: брюшного тифа, сальмонеллезов»
Таблица 25. Протокол выделения и бактериологического исследования гемокультуры (крови) больного при брюшном тифе
Материал для исследования – кровь больного
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – брюшной тиф (?)
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| Посев крови больного в соотношении 1:10 на 10% желчный бульон для накопления | ||
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из крови больного выделены бактерии вида _______________ фаготип _______. |
Таблица 26. Протокол бактериологического исследования рвотных масс больного при сальмонеллезе
Материал для исследования – рвотные массы больного
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – сальмонеллез (?)
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из рвотных масс больного выделены бактерии вида _____________________. |
Занятие 2. Дата _____. Тема: «Возбудители кишечных инфекций: брюшного тифа, сальмонеллезов (продолжение). Возбудители колиэнтерита, шигеллезов»
Таблица 27. Протокол бактериологического исследования фекалий (копрокультуры) больного при колиэнтерите
Материал для исследования – фекалии больного
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – колиэнтерит (?)
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из фекалий больного выделены _______________________ серогруппы _________. |
|
|
|
Таблица 28. Протокол бактериологического исследования фекалий (копрокультуры) больного при шигеллезе (бактериальной дизентерии)
Материал для исследования – фекалии больного
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – дизентерия (?)
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из фекалий больного выделены _______________________. |
Таблица 29. Принципы классификации сальмонелл по схеме Кауфмана-Уайта
| Серогруппа, серовар, вид | O-антиген | H-антиген | |
| Фаза 1 | Фаза 2 | ||
| Серогруппа 2 (A) | |||
| Ø S. Paratyphi A | 1, 2, 12 | a | (1, 5) |
| Серогруппа 4 (B) | |||
| Ø S. Paratyphi B (S. Schottmuelleri) | 1, 4(5), 12 | b | 1, 2 |
| Ø S. Typhimurium | 1, 4(5), 12 | i | 1, 2 |
| Серогруппа 6,7 (C) | |||
| Ø S. Choleraesuis | 6, 7 | (c) | 1, 5 |
| Серогруппа 9 (D1) | |||
| Ø S. Typhi | 9, 12 | d | - |
| Ø S. Enteritidis | 1, 9, 12 | g, m | (1, 7) |
| Ø S. Dublin | 1, 9, 12 | g, p | - |
| Ø S. Moscow | 9, 12 | g, q | - |
| Серогруппа 3,10 (E1) | |||
| Ø S. London | 3, 10 | l, v | 1, 6 |
Таблица 30. О-РПГА с парными сыворотками при диагностике брюшного тифа
| Результаты | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | контроль |
| Сыворотка 1 | ||||||||
| Сыворотка 2 | ||||||||
| ВЫВОДЫ: РПГА _____________________ (положительная /отрицательная). v Титр антител к ___-антигену в первой сыворотке _________. v Титр антител к ___-антигену во второй сыворотке ________. v ___ -кратное увеличение титра антител во второй сыворотке ___________ (подтверждает/не подтверждает) диагноз ___________________________. |
Таблица 31. Биохимические свойства энтеробактерий
| Название бактерий | Среда Клиглера | Цитрат Симмонса | Среда с лизином |
| ü Незасеянные пробирки | 
|
|
|
| ü Salmonella sp. |
|
|
|
| ü Shigella sp. |
|
|
|
| ü Escherichia sp. |
|
|
|
|
|
|
__Энтеробактерии_____Vibrio cholerae___
____________________ ____________________
 |  |
Окраска по Граму Окраска по Граму
Занятие 3. Дата _____. Тема: «Возбудители кишечных инфекций: брюшного тифа, сальмонеллезов, шигеллезов (продолжение). Возбудитель холеры»
Таблица 32. Протокол бактериологического исследования испражнений больного при холере
Материал для исследования – испражнения больного
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – холера (?)
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| Ø Посев испражнений больного на 1% пептонную воду и Ø щелочной агар | ||
| Постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными монорецепторными холерными сыворотками О1 и О139 | ||
| (если необходимо) | ||
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из фекалий больного выделены _______________________ серогруппы _________. |
Таблица 33. Дифференциация холерных вибрионов
| Признак | V. cholerae, биовар CLASSIC | V. cholerae, биовар Эль-Тор |
| Агглютинация O1 -сывороткой | + | + |
| Лизис специфическими бактериофагами: Ø бактериофаг C Ø бактериофаг Эль-Тор | + - | - + |
| Агглютинация куриных эритроцитов | - | + |
| Гемолиз эритроцитов барана | - | + или - |
| Чувствительность к полимиксину | чувствителен | устойчив |
| Гексаминовый тест | - | + |
| Реакция Фогес-Проскауэра | --/+ | + |
Занятие 4. Дата ______. Тема: «Возбудители кишечных бактериальных инфекций (окончание). Патогенные и условно-патогенные микобактерии. Возбудители дифтерии, коклюша и паракоклюша».
Mycobacteriumtuberculosis ___ M. bovis __ M. tuberculosis__
____(в ткани легкого) ____(чистая культура) __ (cord-фактор)__
 |  |  |
Окраска по Цилю-Нельсену Окраска по Цилю-Нельсену Окраска по Цилю-Нельсену
__Bordetella pertussis__Corynebacterium diphtheriae
__ (чистая культура)______(чистая культура)____
 |  |
Окраска по Граму Окраска по Нейссеру
Таблица 34. Дифференциация бордетелл
| Признаки | Bordetella pertussis | B.parapertussis |
| Рост на МПА | -- | + |
| Время культивирования | 3-5 сут. | 48 ч. |
| Образование колоний коричневого цвета | -- | + |
| Образование уреазы | -- | + |
| Образование каталазы | -- | + |
| Рост на среде с тирозином | -- | + (коричневый пигмент) |
| Реакция агглютинации с типовыми сыворотками к: Ø Bordetella pertussis Ø B. parapertussis | + -- | -- + |
Таблица 35. Дифференциация коринебактерий
|
|
|
| Признаки | C. diphtheriae | C.pseudodiphtheriticum |
| Зерна волютина на полюсах (два в каждой клетке) | + | -- |
| Диффузное расположение зерен волютина (от 1 до 3 в каждой клетке) | -- | + |
| Расположение клеток под углом друг к другу | + | -- |
| Параллельное расположение клеток («частоколом») | -- | + |
| Ферментация глюкозы | + | -- |
| Ферментация крахмала | Биовар gravis “+” / mitis “--“ | -- |
| Цистиназная активность | + | -- |
| Уреазная активность | -- | + |
| Токсигенность | +/-- | -- |
| Агглютинабельность типовой сывороткой | + | -- |
Занятие 6. Дата ______. Тема: «Патогенные кокки: стафилококки, стрептококки, нейссерии»
Streptococcus pneumoniaeStreptococcus pyogenesS.aureus в гное Neisseria gonorrhoeae в гное
(в органах) (чистая культура) _ ______________ (незавершенный фагоцитоз)
 |  |  |  |
Окраска водным фуксином Окраска по Граму Окраска по Граму Окраска метиленовым синим
Neisseria meningitidis Рисунок 11. Факторы вирулентности стафилококков
(чистая культура) Плазмокоагулаза Рост на 5% кровяном агаре Рост на ЖСА
(β-гемолиз) (лецитовителлаза)
Окраска по Граму
Таблица 36. Этиологически значимые виды стрептококков
| Вид | Серогруппа | Тип гемолиза | Дифференцирующий признак | Биотоп | Примеры заболеваний |
| S. pyogenes | A | β- гемолиз | Чувствителен к бацитрацину | Кожа, ротоглотка | Фарингит, ангина, пневмония, сепсис, скарлатина, рожа, ревматизм, гломерулонефрит, септический эндокардит |
| S. agalactiae | B | β- гемолиз | Устойчив к бацитрацину | Женские половые органы | Неонатальный менингит, сепсис |
| Enterococcus faecalis | D | α – или β - гемолиз | Устойчив к 6,5% NaCl; образование колоний черного цвета на желчном агаре с эскулином | Кишечник, уретра, женские половые органы | Инфекции мочевыводящих, желчевыводящих путей, эндокардит |
| S. pneumoniae | Не определена | α - гемолиз | Чувствителен к желчи и оптохину | Верхние дыхательные пути, ротоглотка | Пневмония, отит, синусит, сепсис |
| S. viridians S. mitis, S. mutans | Не определена | α - гемолиз | Устойчивы к желчи и оптохину | Ротоглотка | Инфекционный эндокардит, кариес |
Таблица 37. Сравнительная характеристика стрептококков
|
|
|
| Вид | Морфология, тинкториальные свойства | Среда для культивирования | Культуральные свойства | Факторы патогенности | Видовая дифференциация | Внутривидовая дифференциация |
| S. pneumoniae | Грам+ ланцеторидные диплококки, имеют капсулу | 5% кровяной агар, 37оС, СО2-инкуботор | Мелкие колонии с зоной зеленящего гемолиза | · Капсула · IgA-протеаза · Гиалуронидаза | Чувствителен к желчи и оптохину | По капсульному антигену на серовары (>80) |
| S. pyogenes | Грам+ кокки, расположенные цепочкой | 5% кровяной агар, 37оС, СО2-инкуботор | Мелкие колонии с зоной полного гемолиза | · М-протеин · Гиалуронидаза · Стрептокиназа · Стрептолизин | Чувствителен к бацитрацину | По типовому белковому М-антигену на серовары (по Ланцфельд) |
Таблица 38. Протокол бактериологического исследования гноя
Материал для исследования – гной из абсцесса
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – абсцесс мягких тканей бедра
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| 1. Приготовление мазка из гноя и окраска по Граму. 2. Посев гноя на желточно-солевой и 5% кровяной агар | ||
| 1. Микроскопия колоний (окраска по Граму). 2. Пересев на скошенный МПА | ||
| 1. Приготовление мазка и окраска фуксином (для определения чистоты выделенной культуры) 2. Посев на цитратную кроличью плазму и среду Гисса с маннитом (под вазелиновым маслом для создания анаэробных условий) 3. Фаготипирование культуры типовыми стафилококковыми бактериофагами: __________________________ 4. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам | Ø Доксициклин - ____мм Ø ___________________- ____ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм | |
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из гноя больного выделены бактерии вида ________________ фаготип ____, чувствительные к ________________________ ______________________________________ устойчивые к __________________ ___________________________________. |
Занятие 7. Дата ______. Тема: «Патогенные анаэробы: клостридии и неспорообразующие анаэробы»
Clostridium perfringens Clostridium perfringens Clostridium tetani
(в органах) (чистая культура) (чистая культура)
 |  |  | |||||
| |||||||
Окраска фуксином Окраска по Граму Окраска по Граму
Clostridium botulinum Peptostreptococcus anaerobius (чистая культура) чистая культура)
 | |
|
|
|
Окраска по Граму Окраска фуксином
Таблица 39. Определение типа ботулинического токсина с помощью РОНГА (РПГА)
| Ингредиенты | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | Конт-роль |
| Изотонический раствор натрия хлорида, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Исследуемый материал (промывные воды желудка, разведение 1:5), мл |  0,5
| вылить 0,5 | --- | |||||
| Антительный эритроцитарный диагностикум соответствующего серотипа, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| РЕЗУЛЬТАТЫ: | ||||||||
| Ø с поливалентным диагностикумом АВЕ | ||||||||
| Ø с диагностикумом А | ||||||||
| Ø с диагностикумом В | ||||||||
| Ø с диагностикумом Е | ||||||||
| ВЫВОД: |
Рисунок 12. Tесты для ускоренной диагностики инфекций,
вызванных Clostridium perfringens
рост на среде Вильсона-Блера створаживание молока
РАЗДЕЛ: «КЛИНИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ» [1]
Занятие 8. Дата _____. Тема: «Основы клинической микробиологии»
Таблица 40. Протокол бактериологического исследования мокроты
Материал для исследования – мокрота
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – пневмония (?)
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
1. Приготовление серийных стократных разведений мокроты в стерильном физ. растворе:
  9,9 мл9,9 мл9,9 мл
2. Посев газоном по 0,1 мл мокроты из разведения 10-5 на ЖСА и 5% кровяной агар, из разведения 10-7 на 5% кровяной агар
| ||
| 1. Микроскопия колоний (окраска по Граму). 1. Пересев на скошенный МПА | ||
| 1. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам | Ø Оксациллин - _________ мм Ø Доксициклин - _________ мм Ø Цефалексин- _________ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм | |
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из мокроты больного выделены бактерии вида ______________ в количестве ____________ КОЕ/мл, что подтверждает/не подтверждает этиологическую роль выделенных бактерий в развитии заболевания. Выделенные бактерии чувствительны к ______________________________________________, устойчивы к _______________________________________________________. |
Таблица 41. Протокол бактериологического исследования мочи
Материал для исследования – моча
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – острый пиелонефрит (?)
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
Посев мочи по Голду
| ||
| 1. Микроскопия колоний (окраска по Граму). 2. Пересев на скошенный МПА | ||
| Определение чувствительности бактерий к антибиотикам | Ø Оксациллин - _________ мм Ø Доксициклин - _________ мм Ø Цефалексин- _________ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм | |
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из мочи больного выделены бактерии вида________________. Степень бактериурии - ________ КОЕ/мл, что подтверждает/не подтверждает этиологическую роль выделенных бактерий в развитии заболевания. Выделенные бактерии чувствительны к __________________________________, устойчивы к __________________________________. |
Таблица 42. Определение степени бактериурии
| Количество колоний в секторах на МПА | Среднее кол-во бактерий, КОЕ/мл мочи | |||
| Сектор А | Сектор 1 | Сектор 2 | Сектор 3 | |
| 1-6 | -- | -- | -- | <1,000 |
| 8-20 | -- | -- | -- | 3,000 |
| 20-30 | -- | -- | -- | 5,000 |
| 30-60 | -- | -- | -- | 10,000 |
| 70-80 | -- | -- | -- | 50,000 |
| 100-150 | 6-10 | -- | -- | 100,000 |
| >200 | 20-30 | -- | -- | 500,000 |
| >200 | 40-60 | -- | -- | 1,000 000 (106) |
| >200 | 100-140 | 10-20 | -- | 5,000 000 (5x106) |
| >200 | >200 | 30-40 | -- | 10,000 000 (107) |
| >200 | >200 | 60-80 | 1-8 | более 100,000 000 (108) |
РАЗДЕЛ: «САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ » [2]
Занятие 8. Дата _____. Тема: «Санитарно-микробиологическое исследование питьевой воды, почвы, пищевых продуктов»
Таблица 43. Определение некоторых микробиологических показателей чистоты питьевой воды
| Показатели | Единицы измерения | Проба №1 | Проба №2 |
| Общие колиформные бактерии. | КОЕ/100мл | ||
| Термотолерантные колиформные бактерии | КОЕ/100мл | ||
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ: |
Таблица 44. Определение общего микробного числа почвы (ОМЧ)
| Засеваемые объемы почвенной суспензии: | 1 мл (1:100) | 1 мл (1:1000) | 1 мл (1:10000) |
| МПА | 15мл | 15мл | 15мл |
| Результаты: | |||
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ: |
Таблица 45. Определение микробиологических показателей санитарного состояния почвы
| Засеваемые объемы почвенной суспензии: | 1 мл (1:100) | 1 мл (1:1000) | 1 мл (1:10000) |
| БГКП | |||
| Перфрингенс-титр | |||
| Сальмонеллы | |||
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ: |
Таблица 46. Определение показателя МАФАМ в стерилизованном/ пастеризованном молоке (КОЕ/мл)
| Засеваемые объемы молока: | 1мл (1:10) | 1мл (1:100) | 1мл (1:1000) | |
| МПА | 15мл | 15мл | 15мл | |
| Результаты: | Пастеризованное молоко | |||
| Стерилизованное молоко | ||||
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ: |
Таблица 47. Определение некоторых микробиологических показателей качества стерилизованного/пастеризованного молока
| Засеваемый объем молока: | 1мл (1:10) | 1мл (1:100) | 1мл (1:1000) | |
| Результаты: | ||||
| Рост на среде Кесслера | Пастеризованное молоко | |||
| Стерилизованное молоко | ||||
| Рост на ЖСА | Пастеризованное молоко | |||
| Стерилизованное молоко | ||||
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ: |
Занятие 9. Дата _______. Тема: «Клиническая микробиология / Санитарная микробиология (окончание). Патогенные спирохеты (трепонемы, боррелии, лептоспиры)»
Borrelia recurrentisTreponema pallidumLeptospira interrogans
____ в крови ______ _________________ ___________________
 |  |  |
Окраска по Романовскому-Гимзе Окраска серебрением по Морозову Серебрение по Морозову
Рисунок 13. Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном
 |
| Кардиолипиновый антиген + исследуемая сыворотка | Физ. раствор + исследуемая сыворотка |
ВЫВОД:
Таблица 48. Схема РПГА для серологической диагностики сифилиса
| Контроль антигена | |||||||
| Сыворотка пациента, в разведении | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | 1:64 | ─ |
| Эритроцитарный трепонемный диагностикум, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 1,0 |
| Результаты: | |||||||
| ВЫВОДЫ: РПГА ___________________________(положительная/отрицательная). Титр антител к бледным трепонемам ________, что подтверждает/не подтверждает диагноз сифилиса. (Диагностический титр 1:8 – 1:16) |
Занятие 11. Дата ______. Тема: «Бактерии - возбудители зоонозных инфекций (чумы, сибирской язвы, бруцеллеза, туляремии)»
Таблица 49. Реакция агглютинации для серологической диагностики туляремии
| Ингредиенты | Контроль антигена | Контроль сыворотки | ||||||
| Изотонический раствор хлорида натрия, мл | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | |
| Сыворотка больного 1: 25, мл | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | ─ | 1,0 | |
| Диагностикум (в каплях) | ─ | |||||||
| Разведения сыворотки | 1:50 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | ─ | ─ | |
| Результат: | ||||||||
| ВЫВОДЫ: Реакция агглютинации _______________________(положительная/отрицательная). Титр антител к Francicella tularensis __________, что подтверждает/не подтверждает диагноз туляремии. |
Таблица 50. Реакция агглютинации для серологической диагностики бруцеллеза (реакция Хеддельсона)
| 0,08 мл сыворотки 0,03 мл антигена Разведение 1:50 | 0,04 мл сыворотки 0,03 мл антигена Разведение 1:100 | 0,02 мл сыворотки 0,03 мл антигена Разведение 1:200 |
| Результат: | Результат: | Результат: |
| 0,01 мл сыворотки 0,03 мл антигена Разведение 1:400 | 0,02 мл сыворотки 0,03 мл физ. р-ра Контроль сыворотки | 0,03 мл антигена 0,03 мл физ. р-ра Контроль антигена |
| Результат: | Результат: | Результат: |
| ВЫВОД: Реакция Хеддельсона ___________________(положительная/отрицательная) до титра_______, что является/не является показанием для постановки реакции Райта. |
Таблица 51. Реакция агглютинации для серологической диагностики бруцеллеза (реакция Райта)
| Ингредиенты | Контроль антигена | Контроль сыворотки | |||||
| Изотонический раствор хлорида натрия, мл | ─ | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Сыворотка больного 1: 25, мл | 0,5 | → | → | → | → вылить | ─ | 0,5 |
| Диагностикум (в каплях) | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | ─ |
| Разведения сыворотки | 1:50 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | ─ | ─ |
| Результат: | |||||||
| ВЫВОДЫ: Реакция агглютинации _____________________(положительная/отрицательная). Титр антител к бруцеллам ____, что подтверждает/не подтверждает диагноз бруцеллеза. |
Таблица 52. Реакция термопреципитации по Асколи
| Ингредиенты | Опыт | Контроли | |
| Сибиреязвенная преципитирующая сыворотка, мл | 0,2 | 0,2 | -- |
| Исследуемый антиген, мл | 0,2 | -- | -- |
| Стандартный сибиреязвенный антиген, мл | -- | 0,2 | 0,2 |
| Неиммунная (нормальная) сыворотка, мл | -- | -- | 0,2 |
| Результат: | |||
| ВЫВОД: В исследуемом материале обнаружен/не обнаружен сибиреязвенный антиген. |
Таблица 53. Дифференциация видов бруцелл
| Вид бруцелл | Условия выращивания в первых генерациях | Бактериостатическое действие красок | Выделение H2S | |
| фуксин 1:50000 | тионин 1:25000 | |||
| Brucella melitensis | аэробные | + (рост) | ─ (отсутствие роста) | ─ |
| Brucella suis | аэробные | ─ (отсутствие роста) | + (рост) | + |
| Brucella abortus | при 5 – 10 % CO2 | + (рост) | ─ (отсутствие роста) | + или ─ |
___Yersinia pestis______Brucella abortus___
__(чистая культура) __ (чистая культура)__
 |  |
Окраска генциан фиолетовым Окраска по Граму
__Francisella tularensis_ __Bacillus anthracis __
___ (чистая культура) ___ __ (чистая культура)
 |  |
Окраска по Граму Окраска по Граму
РАЗДЕЛ: «ОБЩАЯ ВИРУСОЛОГИЯ»
Занятие 13. Дата _______. Тема: «Структура и биология вирусов. Методы диагностики вирусных инфекций. Культивирование вирусов. Методы индикации вирусов. Идентификация вирусов. Серологическая диагностика вирусных инфекций»
ВИДЫ КУЛЬТУР ТКАНЕЙ
 |  |
А. Культуры переживающих Б. Культуры растущих тканей
кусочков (эксплантантов) тканей
1. культуры 2. однослойные 3. суспензионные
фиксированных культуры клеток культуры тканей клеток
а)первично-трипсинизированные в)перевиваемые культуры
б)полуперевиваемые культуры
Схема 6. Виды культур тканей
Культура клеток типаКультура клеток ____ЦПД вирусов_______
куриных фибробластов типа HeLa (гибель и деструкция монослоя)
 | | |
_______ЦПД вирусов _ЦПД вирусов__ Реакция_____
цитоплазматические включения внутриядерные включения гемадсорбции
 | | |
Таблица 54. Реакция гемагглютинации (РГА) для индикации вируса в аллантоисной жидкости куриного эмбриона
| Ингредиенты | Разведения вируссодержащего материала | Контроль эритроцитов | ||||
| 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | ||
| Изотонич. р-р хлорида натрия, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Аллантоисная жидкость (вируссодержащий материал), мл | 0,5 | à | à | à | à вылить в дез. р-р | -- |
| 1% суспензия эритроцитов, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Перемешать, инкубировать при комнатной температуре в течение 30- 60 мин. | ||||||
| Результаты: | ||||||
| ВЫВОДЫ: РГА положительная/отрицательная. В аллантоисной жидкости обнаружен/не обнаружен вирус, обладающий гемагглютинирующей способностью. Титр вируса ______. |
Таблица 55. РСК с иммунной и нормальной сыворотками
| Результаты: | Разведения сыворотки | Контроли | |||||||
| 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | эритр. | комплемента | гемолит. системы | |
| Иммунная сыворотка | |||||||||
| Нормальная сыворотка | |||||||||
| ВЫВОДЫ: РСК положительная с иммунной / нормальной сывороткой. Титр антител в _____________________ сыворотке _________. |
Условные обозначения: «+» - наличие гемолиза (РСК «-«),
«-» - отсутствие гемолиза (РСК «+«).
Рисунок 14. Реакция биологической нейтрализации (РБН) в культуре клеток для идентификации вируса
|
|
|
|
|
|
| неизв. вирус + cыворотка X | неизв. вирус + cыворотка Y | Контроли: | |||
| культ. клеток | вируса | cыворотки X | cыворотки Y |
ВЫВОДЫ:
Таблица 56. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) с иммунной и нормальной сыворотками
| Номера пробирок | Контроли | ||||||||
| Разведения сыворотки | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | сыво-ротки | вируса | эритро-цитов |
| Ингредиенты: | |||||||||
| Изотонич. р-р хлорида натрия, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 1,0 |
| Исследуемая сыворотка 1:10, мл | 0,5à | 0,5 à | 0,5 à | 0,5 à | 0,5 à |
|
|
|
