Обнаружение и контроль микробных загрязнений
⇐ ПредыдущаяСтр 2 из 2 Медицина. Обнаружение микробных инфекций в крови, моче и других биологических образцах. Быстрый подбор антибиотика, определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика. Ветеринария. Определение количества соматических клеток в молоке - наиболее простой и быстрый способ диагностики мастита. Пищевая, фармацевтическая, парфюмерная промышленность. Экспресс-анализ уровня микробных загрязнений для контроля качества на всех этапах производства - от исходного сырья до готовой продукции. Микробиологическая чистота мясо-молочных продуктов, соков и напитков, лекарств и косметики - основное условие их длительной сохранности и высоких потребительских качеств. Промышленность. Подбор биоцидов и штаммов-биодеструкторов для разрушения отходов. Экология. Контроль стерильности в особо чистых помещениях медицинских и промышленных учреждений. Оценка жизнеспособности живых клеток Медицина. Контроль жизнеспособности спермы, качества донорских материалов и органов при трансплантации. Ветеринария. Оценка жизнеспособности семенного материала и эффективности криопротекторов при его консервации, качества вакцинных препаратов. Биотехнология. Определение активности штаммов-продуцентов.
Экспериментальная часть Определение общей загрязненности водного раствора по концентрации АТФ
Определение общей загрязненности водного раствора по количеству АТФ биолюминесцентным методом проводят с помощью реагентов фирмы Люмтек. Реагенты и оборудование Реагенты Флакон № 1 АТФ-реагент - лиофилизованный раствор, содержащий фермент - люциферазу светляков, D-люциферин, сульфат магния, компоненты буферной смеси и стабилизаторы, т.е. все компоненты, необходимые для биолюминесцентной реакции, кроме АТФ.
.
Флакон № 2 - Раствор для реконструкции АТФ-реагента, содержит 5 мл стерильной высокоочищенной воды Флакон № 3 - АТФ-контроль, содержит 1 мл лиофилизованного раствора АТФ с концентрацией 10 наномоль/л. ВНИМАНИЕ: При проведении измерений необходимо использовать стерильные наконечники для пипеток и стерильные кюветы для люминометра. Для каждой операции использовать новый наконечник. Приборы и принадлежности Прибор для измерения интенсивности биолюминесцентного сигнала – люминометр ЛЮМ-1 Автоматические дозаторы на 0,05; 0,2; 1 и 2 мл Наконечники для дозаторов Пробирки стерильные объемом 1,5 мл (типа «эппендорф») в штативе Микрокюветы полистирольные Пинцет Проведение анализа Подготовка реагентов к анализу 1. Во флакон №1 с лиофилизованным АТФ-реагентом внести определенный объем стерильной воды из флакона №2, выдержать 30 мин перед использованием. Полученный раствор АТФ-реагента можно хранить при комнатной температуре в течение рабочего дня, а при 4оС – в течение 2-3 дней. 2. Во флакон №3 внести 1 мл стерильной воды из флакона №2. Полученный раствор АТФ-контроля с концентрацией АТФ 10 наномоль/л нужно хранить на холоду и использовать в течение одного рабочего дня. Построение градуировочной зависимости интенсивности биолюминесцентного сигнала от концентрации АТФ 3. Приготовить разведения раствора АТФ-контроля в 2, 4, 8, 16 и 32 раза, чтобы получить растворы АТФ с концентрацией 5; 2,5; 1,25; 0,625 и 0,312 наномоль/л. Для этого пробирки пронумеровать по количеству анализируемых проб, установить в штатив, и внести в пробирки №№ 2 – 7 по 0,2 мл дистиллированной воды из флакона №2.
Затем из пробирки №1 внести в пробирку №2 0,2 мл раствора АТФ №1, тщательно перемешать. Аналогично приготовить растворы №№ 3-6, внося в пробирки по 0,2 мл соответствующего раствора АТФ. Таблица для регистрации экспериментальных данных
4. Внести в микрокювету с помощью автоматических дозаторов: - 0,05 мл раствора АТФ, полученного по пункту 3; - 0,05 мл раствора АТФ-реагента из флакона №1. Быстро перемешать содержимое микрокюветы, прокачав его 2-3 раза через наконечник дозатора. Поместить микрокюветус помощью пинцета в кюветное отделение люминометра иизмеритьбиолюминесцентныйсигнал на люминометре (I) 6. Повторить измерения по пункту 4для той же концентрации АТФ, найти среднее значение, провести аналогичные измерения для растворов №2- №7, по два измерения для каждой точки, и построить градуировочную зависимость биолюминесцентного сигнала от концентрации АТФ. 7. Составить уравнение, описывающее градуировочную зависимость типа: I = A + B [АТФ], уравнение (1) Где I – интенсивность биолюминесцентного сигнала в относительных световых единицах, [АТФ] – концентрация АТФ в кювете, наномоль/л, A и B - коэффициенты уравнения (1)
Воспользуйтесь поиском по сайту: ![]() ©2015 - 2025 megalektsii.ru Все авторские права принадлежат авторам лекционных материалов. Обратная связь с нами...
|