 |
Микробиологический контроль сметаны
|
|
|
|
Микробиологический контроль кисломолочных напитков
Обор проб для исследования кисломолочных напитков производится так же, как и при исследовании пастеризованного молока: после розлива отбирают по одному–два образца в упаковке от партии. Готовую продукцию контролируют на наличие бактерий группы кишечных палочек и по микроскопическому препарату не реже одного раза в пять дней. Для определения наличия БГКП кисломолочные продукты предварительно нейтрализуют. Для этого отбирают стерильной пипеткой 10 см3 исследуемого продукта в стерильную колбочку и добавляют 1 см3 10 %-го раствора двууглекислого натрия. Содержимое колбочки перемешивают и засевают в три пробирки со средой Кесслера по 1 см3 самого продукта, а также его первого и второго разведений. Для контроля состава микрофлоры готовых кисломолочных напитков просматривают микроскопические препараты, окрашенные метиленовым синим. В поле зрения препарата, приготовленного из йогурта, ряженки, простокваши «Мечниковской», «Южной», «Болгарской», должны находиться цепочки кокков и длинные тонкие палочки; из ацидофильно-дрожжевого молока – ацидофильные палочки и дрожжи; из кефира – стрептококки, короткие палочки, изредка единичные дрожжевые клетки и т. д.
Микробиологические показатели кисломолочных напитков приведены в табл. 2 прил. 2.
Микробиологический контроль творога
При отборе творога из крупной тары (бочек, фляг) верхний слой продукта зачищают. Пробу отбирают стерильным щупом на расстоянии 3–5 см от края, направляя щуп к противоположной стороне и опуская примерно на 3/4 его длины. Из столбика творога на щупе отбирают стерильным шпателем 15–20 г творога и помещают в стерильную посуду, которую закрывают стерильной пробкой. От расфасованных продуктов отбирают один–два образца в упаковке. Для микробиологического анализа отвешивают 10 г продукта на стерильном часовом стекле (или чашке Петри) и тщательно растирают его в стерильной или профламбированной ступке. К навеске добавляют 90 см3 стерильного физиологического раствора, подогретого до 40–45 С, и получают разведение продукта 1:10, из которого готовят все последующие разведения. Готовый творог анализируют на присутствие БГКП в определенной массе и просматривают микроскопический препарат. Бактерии группы кишечной палочки определяют посевом по 1 см3 разведений продукта от 10–1 до 10–5 в пробирки со средой Кесслера. Пробирки с посевами выдерживают в термостате при температуре 37 С в течение 18–24 ч, после чего их просматривают и определяют бродильный титр по наличию газообразования в поплавках. В микроскопическом препарате творога должны обнаруживаться молочнокислые стрептококки. Обнаруженные в препарате дрожжи, палочки, молочная плесень являются посторонними микроорганизмами. Микробиологические показатели творога приведены в табл. 3 прил. 2.
|
|
|
Микробиологический контроль сметаны
Отбор пробы производится в стерильную посуду после тщательного перемешивания из двух–трех мест партии при крупной расфасовке (фляги, бочки), а при мелкой расфасовке отбирают два образца от партии. Сметану нейтрализуют добавлением 10 %-го раствора двууглекислого натрия до рН 6,5–6,8, а затем готовят десятикратные
разведения продукта от 10–1 до 10–4 см3 для определения БГКП. С этой целью делают посев по 1 см3 указанных разведений сметаны в четыре пробирки со средой Кесслера. Бактерии группы кишечной палочки не должны обнаруживаться в 0,01–0,001 см3 продукта (см. табл. 2 прил. 2). В сметане со сроком годности более 72 ч определяют количество дрожжей и плесеней путем посева 1 г продукта и его первого разведения в чашки Петри с суслом-агаром или средой Сабуро. При просмотре микроскопических препаратов сметаны в поле зрения должны находиться молочнокислые стрептококки (в препаратах бифидосметаны – дополнительно единичные клетки бифидобактерий). Наличие посторонних микроорганизмов (термоустойчивых молочнокислых палочек, дрожжей, молочной плесени) свидетельствует о низком санитарно-гигиеническом уровне производства
|
|
|
ГЛАВА 9. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ОБЛИГАТНО АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
К облигатно анаэробным бактериям принадлежит большая группа самых различных микроорганизмов, которые объединены по общему типу дыхания (тоже далеко не в полной мере совпадающему). Поэтому и питательные среды для выделения и культивирования облигатно анаэробных бактерий достаточно разнообразны. Применительно к работе с теми микроорганизмами, которые являются возбудителями патологии человека, можно отметить несколько общих для используемых питательных сред свойств. Они, как правило, достаточно «богаты», содержат большое количество источников белкового питания. Они имеют определенный редокс-потенциал, должны быть восстановлены. Очень часто требуются стимуляторы роста бактерий, которые вводят в состав питательных сред, равно как и селекционирующие вещества, поскольку менее требовательные микроорганизмы препятствуют росту анаэробов.
Среди питательных сред для отдельных групп облигатно анаэробных бактерий, как и для прочих микроорганизмов, могут быть выделены среды общего назначения, селективные среды и дифференциально-диагностические питательные среды. Часто присущие той или иной группе свойства совмещены, и среда имеет полифункциональное назначение.
Согласно рекомендациям Научно-методического центра по клинической лабораторной диагностике (В.И.Кочеровец, В.С.Михайлова и др., 1996 г.) в качестве базовой питательной среды предложен анаэробный гемагар на основе эритрит-агара следующего состава (на литр).
Эритрит-агар 36,0 г
Крахмал растворимый 1,0 г
Аммоний сернокислый 0,4 г
Натрий углекислый кислый 1,0 г
Гемин (1% раствор) 1,0 мл
Твин 80 1,0 мл
Витамин К1 (1% раствор) 1,0 мл
Кровь лизированная цитратная 50,0 мл
|
|
|
рН 7,2
Два последних компонента вносят в расплавленную и охлажденную до 50о среду непосредственно перед ее разливом в чашки Петри.
Другой вариант обогащенной питательной среды авторы предлагают готовить на основе промышленной среды для контроля стерильности, известной также, как тиогликолевая среда. Для этого ее (17,0 г) готовят в литре бульона Хоттингера с 50 мг% аминного азота, добавляют пептон (5,0 г), экстракт кормовых дрожжей (2,5 г), натрий хлористый (1,8 г), аммоний сернокислый (0,4 г), крахмал растворимый (1,0 г), гемина раствор 1% (1,0 мл), агар-агар (16,0 г), а перед разлитием охлажденной среды по чашкам –– витамин К1 (1,0 мл 1% раствора) и 50 мл лизированной крови.
Среде могут быть приданы селективные свойства добавлением налидиксовой кислоты из расчета 30 мкг/мл или канамицина (1 мг/мл) и желчи (20 г на литр). В последнем случае среда рекомендована для выделения B.fragilis и близких к ней по свойствам бактероидов.
Обогащенную среду для определения стерильности без агара предлагают использовать для выделения и культивирования анаэробов во всех случаях, когда необходим ее жидкий вариант.
Среда для контроля стерильности 33,0 г
Гемин (1% раствор) 1,0 мл
Витамин К1 (1% раствор) 1,0 мл
Твин 80 1,0 мл
Гидролизат Хоттингера 50 мг% амминного азота 1000,0 мл
Тиогликолевая среда, применяемая за рубежом (THIO-medium), имеет много совпадающих характеристик с отечественным вариантом тиогликолевой среды и, практически, очень близка по композиции среде для анаэробов, выпускаемой НИЦФ (дано на литр).
Пептон 20,0 г
Глюкоза 6,0 г
Натрия хлорид 2,5 г
L-цистин 0,25 г
Натрия тиогликолят 0,5 г
Натрия сульфит 0,1 г
Натрия бикарбонат 1,0 г
Агар-агар 0,7 г
Витамин К1 0,0001 г
Гемин 0,005 г
Сыворотка крови (кролика, лошади) 100,0 мл
рН 7,2 ± 0,2
Три последних компонента стерильно вводят в готовую основу тиогликолевой среды.
Приведенная пропись далеко не единственная. Среда имеет ряд вариантов: в основном меняют источники азота (дрожжевой экстракт, гидролизат сои, пептоны на основе различного сырья и т.п.). Отличия касаются также содержания агара (оно может быть большим, до 0,1%), причем он рассматривается как средство предотвращения окисления среды, что особенно важно для размножения анаэробных бактерий.
|
|
|
Исторически одной из первых сред, предложенных для культивирования облигатно анаэробных бактерий (патогенных клостридий) и сохранивших свое значение до сегодняшнего дня, явилась среда Китт-Тароцци. Надо отметить, что и до исследований ее создателей был достаточно большой перечень сред, используемых для работы с анаэробами (среды Stickel и Meyer, Wolf, Sfitt и др.), но современные микробиологи о них не знают. Любопытно, что тогда именно в этом случае были популярны питательные среды из высококачественных сортов рыбы (Harde и Hauser). Как не вспомнить нынешние среды на основе гидролизатов рыбной муки или кильки. Сегодня не существует классической прописи среды Китт-Тароцци. Есть принцип, который заключается в приготовлении печеночного бульона на основе мясной среды, например, мясо-пептонного бульона, мясной воды или бульона Хоттингера. Кроме того, в конечном виде среда должна представлять собой столбик бульона с кусочком печени (или мяса) на дне пробирки.
Мясо-пептонный бульон
(на основе мяса говяжьего) 1000,0 мл
Печень КРС 350,0 г
Глюкоза 20,0 г
рН 7,2 ± 0,2
Бульон разливают по пробиркам, добавляют кусочек печени 2,0 – 2,5 г, заливают поверх 1 мл вазелинового масла. Кусочек печени можно заменить на такой же фрагмент мяса.
Вместо МПБ может быть взят печеночный бульон. Его готовят из 500 г печени на литр воды. Добавляют 10,0 г пептона и 5,0 г хлорида натрия. Приготовленный бульон разливают по пробиркам с кусочком печени или мяса и заливают вазелином. За рубежом похожая среда обозначена как бульон из рубленой печени (состав на литр).
Свежая печень КРС 500,0 г
Пептон 10,0 г
Дикалия гидрофосфат 1,0 г
Крахмал растворимый 1,0 г
рН 7,0 ± 0,2
Бульон предназначен для культивирования анаэробных бактерий, в первую очередь патогенных клостридий.
Печеночный бульон с МПБ взят за основу еще одной известной много лет среды Блаурокка. Далее приведена одна из ее наиболее известных модификаций (Г.И.Гончарова).
Печеночный бульон на основе МПБ* 1000,0 мл
Лактоза 10,0 г
Агар-агар 0,75 г
L-цистин 0,1 г
Твин 80 1,0 мл
рН 7,2 – 7,4
(* см.среду Китт-Тароцци)
Среда используется при выделении и, что наиболее важно, определении количества бифидобактерий в кишечном содержимом.
В определенной степени вариантом среды Китт-Тароцци является бульон с рубленным (chopped) мясом и глюкозой, нашедший достаточно широкое распространение за рубежом, особенно в США. Среда применяется по целому ряду показаний, среди которых получение роста разнообразных анаэробных микроорганизмов, в том числе при малом количестве клеток в посевном материале или наличии каких-либо ингибирующих факторов. Она рекомендована АТСС (Американской коллекцией типовых культур) для сохранения и пересевов многих облигатно анаэробных бактерий, в том числе бактероидов, бифидобактерий и клостридий. Признано, что среда наилучшим образом сохраняет токсигенность культур, в том числе C.botulinum. Бульон имеет несколько прописей; изменения, в основном, касаются содержания сахаров (это не обязательно глюкоза и не обязательно только один сахар) и стимулирующих добавок. Представленная ниже пропись рекомендована АТСС, она является наиболее простой по композиции (дано на литр).
|
|
|
Мясо КРС или лошади (без жира) 500,0 г
Натрия гидроокись (1 N) 25 мл
Пептон 30,0 г
Дрожжевой экстракт 5,0 г
Дикалия гидрофосфат 5,0 г
Резазурин (0,025% раствор) 4,0 мл
рН 7,0 ± 0,1
Пробирки с кусочками мяса на дне заполняют 7 мл мясной вытяжки, обращая особое внимание на восстановленный редокс-потенциал среды (работа в атмосфере N2 и Н2).
Более «богатые» прописи среды содержат L-цистеин, гемин, витамин К1. Плотная среда включает агар-агар. Используемые сахара –– глюкоза, мальтоза, целлобиоза, крахмал. Для работы с эубактериями рекомендована эта же среда с добавлением аргинина или твина 80.
Большое внимание уделено питательным средам для культивирования неспорообразующих облигатно анаэробных бактерий. Особенно часто упоминаются бактероиды, возможно в силу их важной роли в патологии человека с одной стороны и высоких требований к качеству и составу питательных сред с другой. Некоторые среды предложены для выделения и культивирования фузобактерий, превотелл и др.анаэробных микроорганизмов. В приведенной далее таблице 9 отображены рекомендации одного из фундаментальных зарубежных практикумов, дающих представление о разнообразии питательных сред для работы с облигатно анаэробными бактериями –– возбудителями заболеваний человека. Далее будет приведен состав некоторых из них.
Таблица 9
|
|
|
