 |
Исходный уровень знаний и навыков
|
|
|
|
Студент должен знать:
1 Механизмы регуляции углеводного обмена.
2 Механизмы нарушения обмена веществ при сахарном диабете.
3 Строение и биологическую роль желчных кислот.
4 Характеристику основных классов ЛП.
5 Метаболизм ЛП в норме.
6 Пути передачи гормонального сигнала на клетку (аденилатциклазный, инозитолтрифосфатный).
7 ЦТК, его энергетический баланс.
8 Структуру и функцию полиферментных комплексов (на примере пируват-ДГ).
Студент должен уметь:
1 Проводить исследование на фотоэлектроколориметре.
Структура занятия
Теоретическая часть
1.1 Биосинтез насыщенных жирных кислот. Роль ацилпереносящего белка (АПБ), пантотеновой кислоты, биотина, NADPH + H+ и ферментов. Источники ацетил-КоА для биосинтеза жирных кислот (ЖК). Регуляция биосинтеза ЖК.
1.2 Биосинтез триглицеридов (ТГ) и фосфатидов.
1.3 Биосинтез холестерина, его регуляция, биологическая роль холестерина. Пул холестерина в клетке, его регуляция.
1.4 Механизм регуляции липидного обмена. Гормоны, регулирующие липолиз и липогенез. Интеграция липидного и углеводного обменов.
1.5 Жироуглеводный цикл Рэндла. Цикл триглицериды – жирные кислоты. Их механизмы и физиологическое значение. Взаимоотношения кетоновых тел, СЖК и глюкозы.
1.6 Нарушение переваривания и всасывания липидов, его проявления.
1.7 Жировая инфильтрация и дегенерация печени – механизмы развития и профилактика.
1.8 Ожирение – виды, механизмы развития и осложнения.
1.9 Дислипопротеидемии. Классификация по Фридриксону, биохимическая и клинико-диагностическая характеристика основных групп.
1.10 Липидозы – наследственные нарушения липидного обмена.
1.11 Перекисное окисление липидов мембран. Механизм возникновения. Реакции, метаболиты. Биологическое значение в норме и при патологии.
|
|
|
1.12 Антиоксидантная защита (см. тему «Биологическое окисление»).
Практическая часть
2.1 Решение задач
2.2 Лабораторная работа.
Задачи
1 Кетоз является состоянием, когда в крови повышен уровень:
а) ацетил КоА; б) ацетоацетил-КоА; в) бета-оксибутирата; г) лактата; д) ацетона; е) ацетоацетата?
2 Ацетил-КоА карбоксилаза:
а) активируется цитратом; б) является лиазой; в) ограничивает скорость окисления жирных кислот; г) содержит биотин; д) является лигазой; е) является трансферазой?
3 Ацетил КоА карбоксилаза ингибируется:
а) цитратом; б) карнитином; в) авидином; г) лактальбумином; д) цианидом; е) NADH?
4 Какие кофакторы являются общими для бета-окисления и биосинтеза ЖК:
а) FAD; б) NAD+; в) NADP+; г) HS-KoA; д) биотин; е) карнитин?
5 Биосинтез ТГ высокоактивен:
а) в печени; б) мозге; в) жировой ткани; г) мышце; д) энтероцитах; е) эритроцитах?
6 При утилизации избытка глюкозы активируется биосинтез СЖК, потому что возрастает содержание:
а) ацетил-КоА; б) NADH+; в) NADPH+; г) кетоновых тел; д) гликогена; е) инсулина?
Лабораторная работа. Определение концентрации общего холестерина в сыворотке (плазме) крови энзиматическим колориметрическим методом.
Принцип метода. При гидролизе эфиров холестерина холестеролэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся и имеющийся в пробе холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Под действием пероксидазы (POD) перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в пробе.
Ход работы.
| Реагенты | Опытная проба, мл | Стандартная проба, мл |
| Сыворотка (плазма) | 0,02 | - |
| Рабочий реагент | 2,0 | 2,0 |
| Стандартный раствор холестерина | - | 0,02 |
|
|
|
Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 5 минут при комнатной температуре (20-250С) или в термостате при температуре 370С. Измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против дистиллированной воды в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5мм при длине волны 490нм. Окраска стабильна не менее 2 часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.
Примечание. При хранении в холодильнике стандартный раствор холестерина может мутнеть. В этом случае следует нагреть раствор при 35-400С до исчезновения мутности.
Расчёт концентрации (С) холестерина проводят по формуле:
| С = Еоп./Ест. • 5,17 (ммоль/л) или С = Еоп./Ест. • 200 (мг/100мл) |
где Еоп. – экстинкция опытной пробы,
Ест. – экстинкция стандартной пробы.
Норма.
Идеальное содержание < 5,2 ммоль/л
допустимое содержание 5,2-6,5ммоль/л
Патологическое содержание > 6,5 ммоль/л
Клинико-диагностическое значение. Увеличение содержания ХС в плазмекрови – гиперхолестеринемия – наблюдается при избыточном потреблении продуктов, богатых холестерином, механической (обтурационной) желтухе, нефрите, микседеме (гипотиреоз), диабете, атеросклерозе, сифилисе, менингитах, некоторых заболеваниях печени, а такжепри наследственных гиперхолестеринемиях.
Снижение содержания ХС в плазме (гипохолестеринемия)отмечается при голодании, анемии, туберкулезе, острых панкреатитах, паренхиматозной желтухе, лихорадочных состояниях, острых инфекционных заболеваниях, хронической сердечной недостаточности, хронической пневмонии, гипертиреозе, раковой кахексии и др.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Рекомендуемая литература
Основная
1.Материал лекций.
2.Кухта В.К.,Морозкина Т.С. Олецкий Э.И., Таганович А.Д. Биологическая химия.
Бином –Асар 2008. –с.240-253.
3.Биохимия: под ред. чл.-корр. РАН, проф Е.С. Северина: М. Геотар-Медицина. 2006г. –с. 396-399, 409-417, 428-436.
4 Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина; 1998. С. 381-388, 392-406.
5.Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. с. 291-297, 305-307
|
|
|
6.Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 2004г. Т. 1.- с.239-242, 287-290.
7.Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Флинта, 1999. с.387-410.
Занятие 16
Лабораторная работа. Определение концентрации липопротеидов высокой и низкой плотности в сыворотке (плазме) крови.
Принцип метода. Хиломикроны, липопротеиды очень низкой плотности (VLDL) и липопротеиды низкой плотности (LDL) осаждаются при добавлении к образцу фосфорновольфрамовой кислоты и Мg2+. После центрифугирования в супернатанте остаются только липоротеиды высокой плотности (НDL).
Ход работы.
| Реагенты | Опытная проба, мл | Стандартная проба, мл |
| Сыворотка (плазма) | 0,15 | - |
| Осаждающий реагент | 0,3 | 0,3 |
| Стандартный раствор | - | 0,15 |
Хорошо перемешать и оставить на 10 мин. при комнатной температуре. Опытную пробу отцентрифугировать в течение 10 мин. при 4 000 об./мин. Прозрачный супернатант используют для определения концентрации НDL. Определить холестерин в опытной и стандартной пробах в течение часа.
| Реагенты | Опытная проба, мл | Стандартная проба, мл |
| Супернатант | 0,2 | - |
| Рабочий реагент | 2,0 | 2,0 |
| Стандартный раствор + осаждающий реагент | - | 0,2 |
Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 минут при комнатной температуре (18-250С) и измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против дистиллированной воды в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5мм при длине волны 490нм. Окраска стабильна не менее 2 часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.
Примечание. Для анализа использовать только прозрачный супернатант. В случае мутного супернатанта (неполное осаждение) или при содержании триглицеридов в пробе более 4,0 ммоль/л следует провести повторное осаждение, увеличив объём осаждающего реагента в 2 раза. Полученный результат умножить на 2.
Расчёт концентрации (С) холестерина НDL проводят по формуле:
| С = Еоп./Ест. • 1,29 (ммоль/л) или С = Еоп./Ест. • 50 (мг/100мл) |
где Еоп. – экстинкция опытной пробы,
|
|
|
Ест. – экстинкция стандартной пробы,
Расчёт концентрации (С) LDL проводят по формуле:
| С = [общий холестерин] – [НDLхолестерин] – [триглицериды/5] мг/100 мл или С = [общий холестерин] – [НDLхолестерин] – [триглицериды/2,2] ммоль/л |
Норма. НDL
МужчиныЖенщины
Нормальные величины: > 55 мг/100мл > 65 мг/100мл
(1,42ммоль/л) (1,68ммоль/л)
Группа риска: 35-55 мг/100мл 45-65 мг/100мл
(0,9-1,42ммоль/л) (1,16-1,68ммоль/л)
Патологическое нарушение липидного обмена:
<35 мг/100мл <45 мг/100мл
(0,9ммоль/л) (1,16ммоль/л)
LDL
Группа риска: ≥150 мг/100мл ≥190 мг/100мл
(3,9ммоль/л) (4,9 ммоль/л)
Клинико-диагностическое значение.
|
|
|
