Методы лабораторной диагностики бруцеллеза - Brucella

РАЗДЕЛ 2: частная микробиология

 

ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:

обучающие:

дать понятие о правилах забора, хранения и транспортировки исследуемого

материала при диагностике туляремии и бруцеллеза;

сформировать понятие о диагностике туляремии и бруцеллеза, особенностях аллергического метода;

обучить методике серологической и экспресс - диагностике туляремии и бруцеллеза

.

ЗАДАНИЯ.

1. Произвести микроскопию препаратов, окрашенных люминисцирующими сыворотками. Результаты зарисовать.

2. Поставить и произвести учет реакции Райта и Хеддельсона.

3. Поставить развернутую РА с туляремийным диагностикумом.

4. Изучить схему бактериологического выделения и идентификации бруцелл и франциселл туляремии.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ.

1. К какой группе инфекций относятся туляремия и бруцеллёз?

2. Какова антигенная структура бруцелл и франсиселл?

3. С каким антигеном связывают вирулентность Francisella tularensis?

4. Перечислите виды бруцелл, какой из них патогенен для человека?

5. Почему бактериологический метод не является основным при микробиологическом исследовании туляремии?

6. Как растут возбудители туляремии и бруцеллёза на питательных средах?

7. Какой токсин вырабатывают бруцеллы и франциселлы?

 

 

ТЕМА: “Микробиологическая диагностика бруцеллеза”.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: выявление возбудителя бруцеллёза.

Род Brucella включён в семейство Brucellaceae отдела Gracilicutes. Представлены неподвижными мелкими (0,5-0,7x0,6-1,5 мкм) Gr - палочками или коккобациллами, факультативные внутриклеточные паразиты. Патогенны для человека B. melitensis, B. bovis, B. suis

Работа проводится в строго режимных условиях!

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ:

1) кровь;

2) СМЖ;

3) костный мозг;

4) моча;

5) грудное молоко;

6) секционный материал.

 

Кровь для выделения гемокультуры берут из локтевой вены 5-10мл, для серологической реакции можно брать из пальца – 1-2мл.

СМЖ, косный мозг – берут стерильным шприцем в стерильную посуду.

Мочу – берут стерильным катетером в стерильную посуду.

Грудное молоко – собирают в стерильную посуду.

 

ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Экспресс методы: РИФ и РНГА;

2. Серологический;

3. Аллергический;

4. Биологический;

5. Бактериологический.

1. Экспресс методы:

РИФ. Из исследуемого материала готовят мазки на чистых обезжиренных предметных стеклах. Фиксируют в 96⁰ этиловом спирте 20 мин, затем высушивают на воздухе. На поверхность мазка наносят бруцеллезную люминесцирующую сыворотку. Окраска проводится 20 минут во влажной камере при 37⁰С. Препарат ополаскивают дистиллированной водой, погружают на 15 минут в физиологический раствор, опять ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Просматривают под люминесцентным микроскопом.

РНГА – ставится в полистироловых планшетах в 2-х лунках.

1-я опытная: 0,25мл исследуемого материала + 1 капля бруцеллезного эритроцитарного диагностикума.

2-я контрольная: 0,25мл исследуемого материала + 1 капля иммунной специфической сыворотки +

1 капля бруцеллезного эритроцитарного диагностикума.

Результат положительный, если эритроциты выпадают на дно лунки равномерным слоем (зонтик), при отрицательной реакции они оседают в виде пуговки.

 

2. Серологический метод.

Реакция Райта – это развернутая РА, ставится в пробирках. Сыворотка больного разводится от 1:25 до 1:1600 в объеме 0,5мл, в каждую пробирку вносим по 0,5мл бруцеллезного диагностикума.

Учет результатов через 2 часа t= 37⁰С, окончательный через 24 часа.

Положительная реакция – титр 1:100 и выше. Можно ставить РА на стекле - реакция Хеддельсона.

 

3. Аллергический метод (проба Бюрне).

В предплечье внутрикожно вводят 0,1мл бруцеллина. Через 24-48 часов учет результатов. В положительном случае отек и гиперемия размером 4 × 6см.

4. Биологический метод.

Заражение проводят путем введения исследуемого материала в паховую область белым мышкам. Из органов павшего животного готовят мазки-отпечатки, окрашивают люм-сывороткой и микроскопируют.

5. Бактериологический метод – посев проводят в комбинированную среду (МПА скошенный +МПБ) в два флакона. Один инкубируют при повышенном содержании СО₂, другой в обычных условиях. Начиная с 4-го дня просматривают посевы. При положительном результате на агаре появляются мелкие, бесцветные, выпуклые колонии.

Если в течение месяца колонии не обнаруживаются, делаем контрольный высев на плотную питательную среду.

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА - BRUCELLA

 

12Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: