 |
2.1.1. Гистологические препараты, электронные микрофотографии и схемы.
|
|
|
|
2. 1. 1. Гистологические препараты, электронные микрофотографии и схемы.
1. Приготовление и окраска мазка крови человека. На обезжиренное чистое предметное стекло наносится капля свежевыпущенной крови и шлифованным краем другого стекла делается тонкий мазок. Фиксируют мазок в смеси абсолютного спирта и эфира илиметиловым спиртом (5 мин. ). Окраску проводят по методу Романовского (азур II-эозин) в течение 20 минут. Ополаскивание дистиллированной водой и подсушивание.
2. Гистологический препарат. Мазок крови человека. Окраска азуром II и эозином. Увеличение большое. Найти: 1- эритроциты, 2- тромбоциты, 3 - лейкоциты зернистые - гранулоциты, в том числе: 4- сегментоядерные нейтрофилы, 5- палочкоядерные нейтрофилы, 6 – юные нейтрофилы (редко), 7- эозинофилы, 8 -базофилы (редко), 9 -лейкоциты незернистые - агранулоциты, в том числе: 10 - лимфоциты малые, 11 - лимфоциты средние, 12 - моноциты.
3. Электронная микрофотография. Эозинофил. «Атлас». 2004.
4. Электронная микрофотография. Эозинофил. «Атлас». 2004.
5. Электронная микрофотография. Тромбоциты. Тотальный препарат. «Атлас». 2004.
6. Электронная микрофотография. Тромбоцит. «Атлас». 2004.
2. 1. 2. Демонстрационные препараты
1. Гистологический препарат. Ретикулоцит. Мазок крови человека. Окраска азуром II и эозином по методу Романовского. Увеличение большое (иммерсионное).
2. Гистологический препарат. Базофил. Мазок крови человека. Окраска азуром II и эозином по методу Романовского. Увеличение большое (иммерсионное).
|
|
|
3. Гистологический препарат. Тромбоциты, Мазок крови человека, Окраска азуром П и эозином по методу Романовского, Увеличение большое (иммерсионное).
4. Гистологический препарат. Эозинофил. Окраска азуром II и эозином по методу Романовского. Увеличение большое (иммерсионное).
5. Гистологический препарат. Кровь лягушки, Мазок. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение большое.
2. 1. 3. Контрольные вопросы
1. Функции крови и ее состав. Форменные элементы.
2. Эритроциты, строение и функции.
3. Лейкоциты, классификация, структура, значение.
4. Гранулоциты, их общие признаки. Разновидности, строение и значение различных гранулоцитов.
5. Aгранулоциты, их общие признаки, разновидности, функциональная характеристика.
6. Иммунокомпетентные клетки. Т- и В-лимфоциты.
7. Тромбоциты. Их морфофункциональная характеристика.
8. Гемограмма. Ее значение в медицинской практике.
9. Лейкоцитарная формула, ее значение в медицинской практике.
2. 1. 4. Контрольно-обучающие задачи
1. Определите форменные элементы крови по следующим признакам: преобладают по численности над другими форменными элементами, в них отсутствуют ядра, окраска оксифильная.
2. Oпределите форменные элементы, которые имеют самые малые размеры, всего около 2-3 мкм, не содержат ядер, расположены скоплениями.
3. Определите клетку крови, размер которой крупнее размера эритроцита, содержащую сегментированное ядро и мелкие, едва различимые бледно-сиреневые гранулы.
|
|
|
4. Какая это клетка? По размеру близка к размеру эритроцита, но содержит темноокрашенное округлое ядро, занимающее почти всю клетку. Цитоплазма имеет вид узкого ободка, базофильна. Встречается достаточно часто.
5. Имеются ли отклонения в гемограмме и лейкоцитарной формуле? Если да, то найдите их:
a) лейкопитов-3. 900 в 1 мкл, эритроцитов – 3000. 000 в 1 мкл, тромбоцитов - 300. 000 в 1 мкл, нейтрофилов - 70%, базофилов – 1% энзипофилов - 3%, лимфоцитов - 20%, моноцитов – 6%;
б) лейкоцитов – 15. 000 в 1 мкл, эритроцитов 3. 5000. 000 в 1 мкл, тромбоцитов – 300. 000 в 1 мкл, нейтрофилов – 45%, базофилов – 1%, эозинофилов – 1%, лимфоцитов – 47%, моноцитов – 6%;
в) лейкоцитов – 3. 000 в 1 мкл, эритроцитов – 4. 500. 000 в 1 мкл, тромбоцитов – 250. 000 в 1 мкл, нейтрофилов сегментоядерных – 64%, юных нейтрофилов – 0%, палочкоядерных нейтрофилов – 1%, базофилов – 1%, эозинофилов – 8%, лимфоцитов – 20%, моноцитов – 6%.
2. 2 Понятие о кроветворении Кроветворение или гемоцитопоэз — это сложный биологический процесс, включающий серии клеточных делений и дифференцировок, происходящих в органах кроветворения и приводящих к образованию зрелых форменных элементов крови, поступающих затем в периферическую кровь. Различают эмбриональное кроветворение, когда происходит закладка крови как ткани, и постэмбриональное кроветворение, когда происходит физиологическая регенерация крови. Эмбриональное кроветворение начинается в стенке желточного мешка у эмбриона человека с 2—3 недель его развития, а затем последовательно протекает в печени, тимусе и в селезенке, которая в эмбриональном периоде является универсальным кроветворным органом. Далее эмбриональный гемопоэз протекает в лимфоузлах и красном костном мозге, который и становится универсальным кроветворным органом с 4—5 месяцев эмбриональной жизни. Начальные клетки крови — крупные первичные эритроциты (мегалоциты) образуются из стволовых клеток крови в стенке желточного мешка эмбриона интраваскулярно, внутри первичных кровеносных сосудов. Далее во всех органах кроветворения клетки крови образуются экстраваскулярно и только после соответствующей дифференцировки поступают в сосуды. Постэмбриональное кроветворение или физиологическая регенерация крови складывается из миелоцитопоэза и лимфоцитопоэза (таблица 7). Миелоцитопоэз — это процесс образования гранулоцитов, эритроцитов, моноцитов и тромбоцитов. В постэмбриональном периоде он локализуется в миелоидной системе — красном костном мозге. Лимфоцитопоэз — образование лимфоцитов происходит в лимфоидной системе органов: в вилочковой железе (Т-лимфоциты)‚ в лимфоузлах, в миндалинах и лимфоидных скоплениях кишечника. В красном костном мозге образуются Т-предшественники, натуральные киллеры и В-лимфоциты у человека, предположительно. Основу всех кроветворных органов составляет ретикулярная ткань, в сетчатом остове которой происходит созревание соответствующих форменных элементов крови из стволовых кроветворных клеток крови и их унитарных предшественников. Исключение составляет вилочковая железа, в которой основой является особый сетевидный эпителий, где и образуются Т-лимфоциты. Таблица 7. Этапы и виды кроветворения
|
|
|
|
По современным представлениям источником всех форменных элементов крови является стволовая кроветворная клетка крови мезенхимного костно-мозгового происхождения. Более 100 лет назад известный отечественный гистолог-гематолог А. А. Максимов создал унитарную теорию кроветворения и тем заложил фундамент современного научного представления о гемоцитопоэзе. Он, в частности, выдвинул предположение о родоначальных клетках крови и считал, что они сходны по своим морфологическим признакам с малыми лимфоцитами. Современные морфоиммунологические исследования, в частности, электронно-микроскопические, метод колониеобразования и другие подтвердили представление о том, что стволовые клетки крови ближе всего по своим морфологическим свойствам приближаются к малым темным лимфоцитам. Величайшей заслугой А. А. Максимова явилось также создание на основе световой микроскопии стройной теории унитарного гемоцитопоэза, включающей описания ряда бластных (молодых, делящихся) клеток, а также дифференцирующихся и зрелых форменных элементов, всегда присутствующих в организме в органах кроветворения. Значение этих научных данных не потеряло значения и в настоящее время. Современное представление о стволовых клетках крови и процессе гемоцитопоэза стало возможным при применении метода колониеобразования в кроветворных органах из клеток донора, введенных смертельно облученным животным-реципиентам (метод биологических химер). При изучении гемоцитопоэза в настоящее время принято подразделять развивающиеся кроветворные клетки на шесть классов. I класс — стволовые клетки крови (СКК), находящиеся в красном костном мозге (их до 0, 5%). Они полипотентны, редко делятся. II класс — полустволовые клетки крови (ПСКК), частично детерминированные. Для миелопоэза это колониеобразующие единицы, дающие предшественников гранулоцитарного, эритроцитарного, моноцитарного и тромбоцитарного рядов (КОЕ—ГЭММ) и 2) полустволовые клетки (ПСК) —для лимфопоэза. III класс — унипотентные предшественники, колониеобразующие единицы— (УП-КОЕ) — свои для каждого ростка крови. Их развитие идет под воздействием ряда специфических факторов — эритропоэтинов, гранулопоэтинов, тромбопоэтинов и лимфопоэтинов. IV класс — бластные кроветворные формы, свои для каждого вида форменных элементов. Это молодые, делящиеся клетки. Им присваивается соответствующее название — бласт (образующий). V класс — дифференцирующиеся, созревающие клетки, заканчивающие делиться. Название этих клеток часто образуется уже с присоединением приставки про- и основания -цит. Например: проэритроциты, пролимфоциты и др. VI класс — зрелые форменные элементы, поступающие в периферическую кровь. В периферическую кровь в норме поступают только зрелые форменные элементы. IV, V и VI классы клеток морфологически идентифицируются. В настоящее время для описания развития различных форменных элементов пользуются понятием дифферон. Дифферон — это совокупность клеточных форм, составляющих линию дифференцировки определенного форменного элемента крови. Дифферон эритроцитов. Развитие эритроцитов — эритроцитопоэз I СКК—II ПСКК УП—КОЕ — Э (унипотентные предшественники эритроцитов — КОЕЭ) — IV эритробласты — V — проэритроциты (базофильные, полихроматофильные, ацидофильные — нормобласты) — VI ретикулоциты — эритроциты. За счет размножения полихроматофильных проэритроцитов идет физиологическое пополнение эритроцитов. Это гомопластический гемоцитопоэз. При патологии происходит гетеропластический гемоцитопоэз за счет размножения более молодых форм по эмбриональному типу. В процессе образования эритроцитов происходят изменения морфологии эритропроэтических клеток, уменьшается их размер, происходит смена базофильной окраски на оксифильную в связи с уменьшением в них количества РНК и накоплением гемоглобина. Возникает уплотнение, а затем происходит исчезновение ядра (у нормобласта).
|
|
|
III УП - КОЕ-Б|
|
|
|
|
|
III УП - КОЕ-Эо
I СКК - II ПСКК
III УП - УП-КОЕ-Гн
- IV миелобласты базофильные (Б) - V промиелоциты (Эо) -
миелоциты (Б) - - IV миелобласты эозинофильные (Эо) - V промиелоциты (Эо) - миелоциты (Н) - 
- IV миелобласты нейтрофильные (Н) - V промиелоциты (Н) - миелоциты (Н) - - метамиелоциты Б (юные базофилы) -
- метамиелоциты Эо (юные эозинофилы) -
палочко-ядерные Эо -
- метамиелоцит Н (юные нейтрофилы) -
палочкоядерные Н -
- VI сегментоядерные (слабо) зрелые гранулоциты Б - базофилы
- VI сегментоядерные зрелые гранулоциты Эо - эозинофилы
- VI сегментоядерные зрелые гранулоциты Н - нейтрофилыПромиелоциты имеют неспецифическую зернистость, миелоциты уже приобретают специфическую зернистость, за их счет в норме идет пополнение физиологической убыли гранулоцитов — гемопластический гемоцитопоэз. Гетеропластический гранулоцитопоэз идет по эмбриональному типу из более молодых клеток. Миелоциты имеют округлое овальное ядро, а метамиелоциты уже несколько меньшего размера клетки с подковообразным ядром, они делятся. Далее идет процесс уменьшения размеров клетки, увеличения соответствующей специфической зернистости, изменения ядра на палочковидное и далее сегментированное, характерное для зрелых гранулоцитов. Развитие тромбоцитов - тромбоцитопоэз I СКК — II ПСКК — III УП — КОЕ-МГЦ (унипотентные предшественники мегакариоцитов — КОЕ-МГЦ) — IV мегакариобласты — V промегариоциты — мегакариоциты (гигантские клетки с полиплоидными, лапчатыми ядрами) — VI тромбоцит (участок цитоплазмы мегакариоцита). Дифферон моноцитов. Развитие моноцитов - моноцитопоэз. I СКК — II ПСКК — III УП-КОЕ-М (унипотентные предшественники моноцитов — КОЕ-М) - IV монобласты - V промоноциты - VI моноциты. Дифферон лимфоцитов. Развитие лимфоцитов - лимфоцитопоэз. I СКК - II ПСК лимфоцитопоэза:
а) - III УП - Т-лимфоцитов - IV Т-лимфобласты - V Т-пролимфоциты- VI Т-лимфоциты
б) - III УП - В-лимфоцитов - IV В-лимфобласты - V В-пролимфоциты - VI В-лимфоцитыДля клеток лимфоцитарного ряда характерна способность дедифференцироваться в бластные формы. 2. 2. 1. Гистологические препараты. Электронные микрофотографии и схемы. 1. Схема кроветворения. Учебник. Гистология под ред. В. Г. Елисеева и др., 1983 (2Гистология», 1983), рис. 52, к с. 160 2. Гистологический препарат. Мазок красного костного мозга. Окраска гематоксилином и эозином. Большое увеличение (иммерсия). Отдифференцировать клетки первых 4-х классов гемоцитопоэза без специальных методов исследования невозможно. Основное внимание обратить на клетки 5-х и 6-х классов – созревающие и зрелые. Найти и зарисовать клетки: эритроцитопоэтического ряда – полихроматофильные проэритроциты (клетки с розово-фиолетовой цитоплазмой и крупным, интенсивно окрашенным ядром), 2 – ацидофильные проэритроциты – клетки меньших размеров, ядра компактные, нередко эксцентрично расположенные, цитоплазма ацидафильная, как у зрелых эритроцитов, 3 – клетки гранулоцитопоэтического ряда: миелоциты – крупные клетки с овальным ядром (окраска цитоплазмы в нейтрофильных миелоцитах – мелкая, розово-фиолетовая; в эозинофильных – крупная, розовая; в базофильных – фиолетовая), 4 – метамиелоциты, клетки меньшего размера (с большим количеством специфической зернистости, ядро подковообразное, бобовидное; отдифференцируйте нейтрофильные и эозинофильные метамиелоциты), 5 – зрелые зернистые лейкоциты – нейтрофилы, эозинофилы, базофилы; 6 – элементы тромбоцитопоэтического ряда – мегакариоциты, гигантские клетки с многолопастными ядрами и ацидофильной цитоплазмой. 7 – тромбоциты. 3. Электронная микрофотография. Полихроматофильный проэритроцит из красного костного мозга. «Атлас», 20044. Электронная микрофотография. Нормобласт из красного костного мозга. «Атлас», 2004. 5. Электронная микрофотография. Часть мегакариоцита и отщипляющиеся от него тромбоциты. «Атлас», 2004. 2. 2. 2. Демонстрационные препараты 1. Гистологический препарат. Полихроматофильный проэритроцит. Мазок красного костного мозга. Окраска азуром II и эозином по методу Романовского. Увеличение большое (иммерсионное). 2. Гистологический препарат. Эозинофильный миелоцит. Мазок красного костного мозга. Окраска азуром II и эозином по методу Романовского. Увеличение большое (иммерсия). 3. Гистологический препарат. Базофильный миелоцит. Мазок красного костного мозга. Окраска азуром II и эозином по методу Романовского. Увеличение большое (иммерсионное). 4. Гистологический препарат. Мегакариоцит. Срез красного костного мозга. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение большое (иммерсионное). 5. Гистологический препарат. Срез костного мозга. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение большое (иммерсионное). 6. Гистологический препарат. Кровяные островки. Поперечный срез зародыша курицы на стадии образования осевых органов. Окраска гематоксилином. Увеличение большое. Найти: 1 – висцеральный листок мезодермы; 2- энтодерму; 3 – кровеносные сосуды; 4 – эндотелий сосуда; 5 – первичные кровяные клетки. 2. 2. 3. Контрольные вопросы. 1. Что такое кроветворение? Эмбриональное и постэмбриональное кроветворение. 2. Миелоцитопоэз. Миелоидная система органов. Роль микроокружения для развития меилоидных клеток. 3. Лимфоцитопоэз. Лимфоидная система органов. Роль микроокружения для развития лимфоцитов. 4. Теория кроветворения в современном понятии. Значение работ А. А. максимова в становлении унитарной теории кроветворения. Стволовые клетки. Понятие о колониеобразующих единицах – КОЕ. 5. Характеристика основных 6-и классов клеток развивающейся крови. Регуляция гемоцитопоэза. 6. Эритроцитарный дифферон. Гомо- и гетеропластический эритроцитопоэз. 7. Гранулоцитарный дифферон. Гомо- и гетеропластический гранулоцитопоэз. 8. Моноцитарный дифферон. 9. Тромбоцитопоэз. 10. Лимфоцитарный дифферон. Дифференцировка, дедифферинцировка клеток лимфоидного ряда. 2. 2. 4. Контрольно-обучающие задачи. 1. У пациента в периферической крови 6% ретикулоцитов и имеются эритробласты. О чём это может свидетельствовать? Каково состояние красного костного мозга? Какой тип кроветворения? 2. Студент в день донора сдал 400 мл крови. Назовите, какие клетки красного костного мозга примут участие в регенерации крови (тип кроветворения)? 3. У пострадавшего в результате обширной травмы возникла острая кровопотеря (около 1 литра крови). Назовите какие клетки красного костного мозга при излечении пациента примут участие в регенерации крови? 4. В клинике трансплантации органов и тканей больному произвели пересадку почки. После операции назначили иммунодепрессанты – медикаменты, угнетающие реакцию иммунитета, в частности, подавляющие продукцию антител. На какие клетки крови и лимфы окажут действие данные лекарственные препараты? Каково их функциональное значение?
|
|
|
