Природа люминисценции. Устройство и принцип работы люминисцентного микроскопа.

Люминесцентная микроскопия — один из высокочувстви­тельных и весьма перспективных современных методов исследо­вания. Он позволяет обнаруживать даже небольшие концентрации вирусов в исследуемом материале. В люминесцентном микроскопе видны многие микроструктуры, неразличимые в обычном свето­вом микроскопе, благодаря их природной флуоресценции или об­работке особыми красителями — флуорохромами. Это такие ве­щества, которые обладают интенсивной флуоресценцией. Они широко используются в люминесцентной микроскопии для обра­ботки биологических объектов, имеющих слабую собственную флуоресценцию.

Люминесценция (флуоресценция) — это свечение веществ под воздействием различных видов энергии, возникающее в ре­зультате преобразования энергии, поглощенной данным вещест­вом. Молекулы, поглощающие кванты внешней энергии, прихо­дят в возбужденное состояние, вследствие чего их электроны переходят на орбиты более высоких энергетических уровней. При возвращении на прежние орбиты они отдают избыток энергии в виде квантов света — фотонов. Непрерывный поток фотонов, из­лучаемых возбужденным веществом, и есть люминесценция. В современных люминесцентных микроскопах используют чаще всего сине-фиолетовые лучи, получаемые с помощью специальных фильтров. После возбуждения люминесцен­ции они поглощаются желтым светофильтром, который укрепля­ется на окуляре. В результате создается темный фон в поле зрения микроскопа.

В настоящее время в лабораториях используют люминес­центные микроскопы В любом из них можно выделить три основные части: собственно микроскоп, осветительное устройство и источ­ник света. Осветительное устройство состоит из кварцево­го коллектора, полевой и апертурной диафрагм, регулирующих поток света и камеры со светофильтрами, последние применят для выделения из светового потока сине-фиолетовых лучей. Виру­сологические препараты изучают в падающих сине-фиолетовых лучах. Они проходят через окуляр и падают на препарат. Источником света в люминесцентных микроскопах служат ртутно-кварцевые лампы, обладающие большой поверхностной яркостью..

Микроскоп устанавливают в затемненной части комнаты на прочном столе. В помещении должна быть хорошая вентиляция, устраняющая вредные газы от источника света.

В вирусологической практике люминесцентную микроско­пию используют в двух основных методах: флуорохромировании и методе флуоресцирующих антител.

Флуорохромирование — это обработка препарата одним или несколькими флуорохромами с целью увеличения силы и контра­стности свечения. Метод флуорохромирования может быть ис­пользован для: 1) обнаружения крупных вирусов; 2) выявления внутриклеточных включений; 3) излучения ЦПД вируса в куль­туре клеток; 4) определения типа нуклеиновой кислоты вируса.

Метод флуорохромирования не сложен, но он не дает возможности идентифицировать возбудителей заболеваний.

 

63. Методы, получения различных компонентов крови от лабораторных животных. Получение сыворотки. Кровь после взятия около часа вы­держивают в теплом месте(30...35°С), затем сгустокее обводят металлической палочкой (отделение сгустка от стенок сосуда) и ставят на ночь в холодильник. Сыворотку отса­сывают пипеткой с помощью груши, переносят в стерильный со­суд, фильтруют через асбестовые фильтры"СФ" и консервируют (метриолят натрия, тимол, азид натрия и др.).

Получение эритроцитов. Вначале готовят дефибринированную кровь. Для этого в стерилизованную сухим паром толсто­стенную банку со стеклянными бусами берут кровь и постоянно встряхивают, не давая ей свернуться. По окончании кровопуска­ния банку с бусами продолжают встряхивать еще 10 мин. Полу­ченную таким образом дефибринированную кровь фильтруют че­рез 2 слоя марли в центрифужные пробирки, центрифугируют 10...15 мин при 1500..-2000 об/мин, плазму крови отсасывают пи­петкой, к осадку эритроцитов доливают физиологический рас­твор, хорошо все перемешивают и снова центрифугируют. Эрит­роциты от сыворотки отмывают не менее трех раз до получения прозрачной надосадочной жидкости и до использования сохраня­ют в холодильнике (3—5 дней). Дополнительно в качестве стабилизирующих растворов от предотвращения свертывания крови можно использовать гепарин и др.

Получение взвеси лейкоцитов.

Метод Рабино

К зо мл полученной крови добавляют 0,003 г гепарина, помещают в термостат на 30 мин в наклонном состоянии для оседания эритроцитов, затем поверхностный слой (беловатого цвета) собирают в пробирку и центрифугируют при 1500 оборотов в минуту – 2 мин. Лейкоциты оседают на дно, прозрачную жидкость сливают, к осадку добавляют 5 мл физ. Раствора и дважды в нём отмывают.

 

Метод Ванцетти-Каудиани

К 6 мл крови добавляют 1,5 мл 3% извести гуммарабики, добавляют 1,5 мл нитрата натрия – взбалтывают и оставляют на 30 мин до полного оседания эритроцитов. Поверхностный светлый слой снимают пипеткой в центрифужную пробарку и центрифугируют при 1000 оборотов в мин – 3 мин. Лейкоциты оседают на дне. Прозрачную жидкость сливают, к осадку добавляют 5 мил физ раствораи дважды в нём отмывают.

 

70. Титрование вирусов по инфекционному действию. При работе с вирусами постоянно возникает необходимость определения его количества в том или ином материале. Без этого невозможны экспериментальное заражение вирусами живых лабораторных систем, производство вакцин и диагностических препаратов, оценка активности противовирусных вакцин, получение иммунных сывороток и др.

Титр вируса — это количество вирусных частиц в единице объема материала. Однако, количество вируса невозможно выразить в обычно применяемых единицах (объем, масса), поэтом прибегают к измерению в единицах действия или единицах активности (инфекционные единицы). В практике нашли применение два типа единиц количества вируса: 1) инфекционные единицы локальных повреждений, вызываемые вирусами и оцениваемые по единичному эффекту; 2) инфекционные единиц 50%-го действия вирусов на чувствительные живые объекты.

Определение титра вируса по инфекционным единицам локальных повреждений. Из локальных повреждений, вызываемы вирусами, известны бляшки в зараженных культурах клеток (островки мертвых клеток в слое живых) и оспины — некротические узелки на ХАО куриных эмбрионов. В этих случаях говорят о бляшкообразующих единицах (БОЕ) и оспинообразующих единицах (ООЕ). Одна БОЕ равна дозе вируса, способной образовать одну бляшку, а одна ООЕ — одну оспину.

Определение титра по инфекционным единицам 50%-го действия вирусов на чувствительные живые объекты. Наиболее универсальным является метод определения титра вируса в единицах 50%-го инфекционного действия. По этому методу за единицу количества вируса принимают такую его дозу, которая способна вызывать инфекционный эффект у 50% зараженных объектов. Она обозначается как ЭД₅₀— эффективная 50%-ная доза. Число таких доз вирусов в единице объема материала и есть его титр в данном материале.

Но, в зависимости от вида объекта и характера его поражения, название эффективной дозы может изменяться. Если виру вызывает гибель зараженных лабораторных животных, титр обозначают символом ЛД₅₀ (летальная доза 50% использованных для заражения животных). Если же вирус вызывает только определенные признаки болезни, титр обозначают ИД₅₀ (инфекционная доза для 50% зараженных животных). При титровании в куриных эмбрионах и гибели их титр обозначают как ЭЛД₅₀ (эмбриональная летальная доза); при учете лишь патологоанатомических изменений в курином эмбрионе — ЭИД₅₀ (эмбрион-инфицирующая доза); в случае проявления ЦПД в культуре клеток — ТЦД₅₀ (тканевая цитопатическая доза).

Титр вируса выражают в количестве инфекционных доз приходящихся на единицу объема. Например, 10^3.48 ТЦД_50/0.2мл; 10^4.5 ЕИД_50/0.2мл; 10^7.45 ЛД_50/0.2 мл.

Титрование вирусов по 50%-му инфекционному действию - наиболее универсальный прием, пригодный практически для любого вируса, если подобрать к нему живую систему (тест-объект). Однако, этот метод довольно трудоемкий, длительный и требую статистических расчетов.

61. Семейство Тоговирусов (вирусная диарея крс). (Togaviridae), семейство вирусов, состоящее из родов Alphavirus, Flavivirus, Rubivirus и Pestivirus. Вирусы содержат однонитчатую РНК линейной формы, к-рая является инфекционной. Вирионы диаметром 50—70 нм (альфавирусы), 40—50 нм (флявивирусы), 70 нм (рубивирусы), 40 нм (пестивирусы). Для капсида альфавирусов свойствен икосаэдральный тип симметрии. Род флявивирусов включает 57 вирусов, из них ряд вирусов, имеющих значение в вет. и мед. патологии,— энцефалитов клещевого, энцефаломиелита овец, омской геморрагич. лихорадки, лихорадок жёлтой, К роду рубивирусов относятся возбудители краснухи и, возможно, артерита лошадей, к роду пестивирусов — возбудители диареи коров (комплекс), лихорадки свиней (. Классическая чума свиней),

Вирусная диарея крупного рогатого скота

Остро протекающая контагиозная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, диареей, ринитом, эрозийноязвенным воспалением слизистых пищеварительного тракта. Заболевание установлено в 1946 г. Ольсороном и сотрудниками в США.
Возбудитель: РНКсодержащий вирус, относится к сем. Togaviridae, роду Pestivirus; имеет сферическую форму (Гиллепси, 1961 г.). Вирус сохраняется годами при — 20°С, в культуральной жидкости не теряет биологическую активность до 1 года, в крови, в лимфатических узлах, селезенке и др. патологическом материале — до 6 мес. При температуре 25°С в течение 1 сут вирус практически не снижает биологическую активность, при 37°С погибает через 5 сут. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину и дезоксихолату натрия.
Эпизоотология. Течение и симптомы. Восприимчивы: телята в возрасте от 6 мес до 2 лет.
Инкубационный период: 6—9 суток.
Источник инфекции: больные животные и вирусоносители.
Пути передачи: алиментарный, через обслуживающий персонал.
Симптомы: при остром течении температура повышается до 40—42°С, депрессия, потеря аппетита, истечение из носа, эрозии и язвы на слизистой носовой полости, изъязвления кожи на венчике, кал зловонный, жидкой консистенции, с пеной и слизью; гибель на 2—3 сутки. У коров и молодняка старшего возраста — абортивная форма.
Патолого-анатомические изменения. Обнаруживают подкожные студенистые отеки, гиперемию легких, участки уплотнения красного цвета, окруженные зоной эмфиземы. Слизистая трахеи, бронхов и бронхиол гиперемирована и покрыта слизистогнойным экссудатом. Между долями легкого иногда находят фиброзную ткань. Отмечают также отечность, гиперемию или некроз заглоточных, шейных, бронхиальных и средостепенных лимфоузлов.
Диагностика. В лаборатории проводят РП в агаровом геле, РН в культуре тканей, иммунофлюоресценцию, биопробу на телятах. От больных животных в ранней'стадии болезни отбирают кровь, смывы с носовой полости, фекалии, от вынужденно убитых или павших животных направляют часть различных отделов кишечника, носовой перегородки трахеи, легких, селезенки, лимфоузлы; от абортированных плодов берут кусочки паренхиматозных органов, околоплодную жидкость.
Дифференциальная диагностика. При диагностике вирусной диареи необходимо исключить чуму, злокачественную катаральную горячку, ящур, инфекционный ринотрахеит, парагрипп3, аденовирусную, реовирусную, коронавирусную инфекцию крупного рогатого скота, паратуберкулез, некробактериоз (см. выше).
Профилактика и лечение. Лечение: средства специфической терапии не предложены, проводят симптоматическое лечение.
Профилактика: рекомендуется убой больного скота и проведение ограничительных мероприятий.

62. Получение крови у лабораторных животных. В диагностической работе бактериологических лабораторий часто приходится прибегать к заражению так называемых лабораторных, или опытных, животных. Чаще всего в повседневной практике применяют для этой цели мелких, наиболее дешевых, животных: белых мышей и крыс, морских свинок, кроликов, а из птиц-голубей и кур. Реже используют собак и кошек, еще реже — различные виды сельскохозяйственных животных. Цель биологических методов исследования заключается в определении патогенности или степени вирулентности исследуемого материала, выделении из материала чистых культур микробов, отделении патогенных микроорганизмов из смеси с сапрофитными видами и т. д. Широкое применение находят лабораторные животные и в серологической практике: морские свинки — для получения комплемента, кролики (овцы, телята) — при изготовлении различных агглютинирующих сывороток, гемолизина, эритроцитов и т. п. Для изготовления специальных питатель­ных сред от животных получают кровь, сыворотку, различные органы, ткани и т. д. Кроме того, лабораторные животные широко используются при определении качеств биологических и химиотерапевтических препаратов, а также научно-экспериментальной работе. Лабораторные животные служат так­же для диагностики некоторых инфекционных заболеваний, моделирования экспериментальных острых и хронических ин­фекционных процессов, установления вирулентности и токсигенности изучаемых штаммов микробов, определения актив­ности приготовленных вакцин и исследования их на безвред­ность.

Взятие крови в больших количествах:

-путём пункции из сердца. Дают наркоз, фиксируют в спинном положении, проводят прокол (в 3-4 межреберье), на глубину 1,5-2 см, если игла попадает в желудочек из иглы бьёт струя крови, её направляют в пробирку.(кролик-200мл, морск.свин. 15-20)

- Из ярёмной вены и сонной артерии. Фиксируют на доске спиной вверх, вскрывают сосуды или накладывают 2ве лигатуры, разрезают между ними вену, сосуд опускают в пробирку, снимают лигатуру и собирают кровь.

-Из бедренной артерии. Дают наркоз, фиксируют на спине, на внутренней поверхности бедра кожу рассекают и вводят иглу в вену.

-Из подкожной вены. Дают наркоз, фиксируют на спине, и в подмышечной области разрезают кожу и сосуды. Кровь собирают из «кормашка» в пробирку.

Взятие крови в малых количествах:

-Из краевой вены уха. Растирают ухо ксилолом или эфиром и делают вкол по направлению к голове, можно надрезать ухо лезвием. Кровь собирают в пробирку.

-Из хвостовой вены: натирают хвост ксилолом и обрезают кончик.

-Из ретро-бульбарного сплетения. Животное фиксируют спиной вверх, передавливают сосуды шеи, при этом глаза выходят из арбит, после этого производят прокол пастеровской пипеткой во внутренний уголок глаза за глазное яблоко, по направлению к гортани, кровь поступает в пипетку. Животное остаётся живым и зрячим.

65. Вирус алеутской болезни норок Алеутская болезнь (вирусный плазмоцитоз) — контагиозная болезнь норок, характеризующаяся распространенной плазмоклеточной пролиферацией (плазмоцитоз), гипергаммаглобулинемией, явлениями геморрагического диатеза, артериитом, гепатитом, анемией и прогрессирующим истощением зверей.Возбудитель болезни — вирус, относящийся к семейству ParvoviridaeПомимо комплексов вирус—антитело в организме норок, очевидно, формируются комплексы другого рода, в состав которых входят ДНК и антитела к ДНК, денатурированные белки и антитела к ним.Вирус устойчив к воздействию формалина, эфира и высокой температуры. Формальдегид в 0,3%-ной концентрации при экспозиции 2 нед не инактивирует вирус. Последний в гомогенатах сохраняет патогенные свойства при прогревании 80 °С в течение 1ч, 90...95 "С — в течение 15...30 мин. Растворы щелочей и йода (0,5%-ные), глутарового альдегида (2%-ный), ультрафиолетовые лучи действуют на вирус губительно. При низких температурах он не теряет активности в течение 1 года.

Эпизоотология В естественных условиях к вирусу алеутской болезни восприимчивы норки всех окрасок, однако особи с гомозиготным рецессивным геном АА (алеутские, сапфировые, голубые) заболевают чаще, быстрее и тяжелее переносят болезнь, чем стандартные. Генетические факторы влияют на тяжесть заболевания, но не на восприимчивость. Источником возбудителя инфекции служат больные норки и вирусо-носители, которые выделяют вирус со слюной, мочой, калом, молоком, околоплодной жидкостью. Заражение происходит алиментарно, аэрогенно, внутриутробно, через поврежденную кожу. Определенное значение имеет распространение вируса через предметы ухода, корма и блохами. В свежем очаге инфекции преобладает прогрессирующая форма, в стационарном — бессимптомная.

Течение и клиническое проявление. Клинические признаки болезни обнаруживают незадолго до гибели животного через 1...24 мес после заражения. Самые характерные из них — это прогрессирующее исхудание, периодическое кровотечение из носа и рта, усиливающаяся жажда, анемия, лихорадка. Зверьки малоподвижны, у них сонливый вид, волосы взъерошены, тусклые, линька задерживается. Кончик носа и подушечки пальцев приобретают желтый цвет. Начинается диарея, фекалии дегтеобразные. развиваются парезы и параличи. У самок, заразившихся до периода гона, типичными считают аборты, пропустование, рассасывание плодов, потерю материнского инстинкта..Прогноз болезни неблагоприятный. При бессимптомной форме погибает до 20 % норок. При прогрессирующей — в течение первого года после заражения — более 50 %, а на второй год — до 80 %. Гибель зверей наступает через 2...7 мес, иногда на 675-й день после заражения.

Наиболее характерны патологоанатомические изменения в почках. В почках явления нефрозонефрита. Печень увеличена в 2 раза, цвета красного дерева или мускатного ореха. Селезенка резко увеличена — в 2...5 раз, пятнистая. Лимфатические узлы набухшие, сочные. Гистологические изменения весьма характерны. В почках, печени, селезенке, костном мозге, лимфатических узлах находят явления плазмоци-тоза. Плазматические клетки располагаются диффузно или очагами. Плазмоклеточную очаговую и диффузную пролиферацию можно обнаружить в любой ткани, но чаще поражаются органы кроветворения.

Диагностика и дифференциальная диагностика. Диагноз ставят на основании анализа эпизоотологических данных, клинической картины и результатов патологоанатомического и лабораторного (серологического) методов исследования.

Разработано несколько видов серологических реакций: реакция имму-нофлуоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ELISA), тимоловая проба, реакция йодной агглютинации, проба мочи на белок Бенс-Джонса, реакция иммуноэлектроосмофореза. В настоящее время для диагностики болезни широко применяют также ИФА и ПЦР.

Реакция иммуноэлектроосмофореза (РИЭОФ) широко применяется и служит основным методом прижизненной диагностики алеутской болезни норок, так как отличается высокой специфичностью, позволяя выявлять до 98 % больных через 6... 15 дней после заражения. Все инфицированные норки гибнут, поэтому говорить о естественном иммунитете не приходится.

68. Хромотография и её применение в вирусологии. Методыфракционирования вирусов. Эти методы позволяют проводить дезинтегрирование вирусных частиц на отдельные компоненты и их фракционирование. Выделенные компоненты в дальнейшем можно подвергнуть биохимическому анализу с целью изучения их тонкой структуры и свойств. Фракционирование компонентов вирусной частицы осуществляется при помощи центрифугирования в зональном и равновесном градиентах плотности, зонального электрофореза и хроматографии.
Хроматография. Для очистки и фракционирования вирусов применяют три типа хроматографии: адсорбционную, ионообменную и молекулярно-ситовую.
Метод адсорбционной хроматографии основан на различной степени адсорбции компонентов смеси при фильтровании через неподвижный твердый адсорбент. Решающее значение имеют поверхностные свойства вирусной частицы и адсорбента, а также состав буфера, в котором суспендирован вирус. При элюировании соответствующим буфером вирусные частицы можно отделить от примесей. В качестве адсорбентов для наполнения хроматографических колонок в вирусологической практике чаще всего используют фосфат калия и гидроксилапатит.
При ионообменной хроматографии вирусы пропускают через ионообменник. Ионообменниками называют такие соединения, которые содержат фиксированные функциональные группы и подвижные противоионы. Последние могут обратимо обмениваться с другими ионами того же заряда, не изменяя физические свойства нерастворимой матрицы. Ионообменниками могут быть органические и неорганические соединения. В качестве матрицы могут быть использованы алюмосиликаты, синтетические смолы, полисахариды, белки и целлюлоза.
Метод молекулярно-ситовой хроматографии основан на способности пористых материалов, работающих по принципу `обратных молекулярных сит', разделять смесь веществ по размеру и молекулярному весу компонентов. В качестве таких пористых материалов применяют гранулированные гели полисахаридов (сефадексы, агароза), полиакриламида (биогели) и пористое порошковое стекло. Метод подобного фракционирования обычно называют молекулярно-ситовой хроматографией, молекулярной фильтрацией или гельфильтрацией.

72. Применение электрофореза в вирусологии. Изучение физико-химических свойств вирусов.Электрофоретические методы позволяют определить специфическую физическую характеристику вирусной частицы - относительную электрофоретическую подвижность под влиянием электрического поля. В противоположность коэффициентам седиментации и диффузии эта величина практически не зависит от массы частицы и основывается главным образом на суммарном заряде поверхности частицы.

Классический метод электрофореза, или метод движущейся границы Тизелиуса, широко используемый для анализа белков применяется для физико-химической характеристики вирусных частиц - определения изоэлектрической точки и электрофоретической подвижности.
Фронтальный электрофорез - единственный метод, позволяющий определить электрофоретическую подвижность и изоэлектрическую точку с очень высокой точностью. Кроме того, этот метод широко используется при исследовании гомогенности и степени чистоты вирусных препаратов.
Еще более разрешающий метод - метод зонального электрофореза в градиенте плотности и в гелях. Его используют не только для изучения специфической электрофоретической подвижности вирусов, их дифференцировки и идентификации, но и для выделения генетически однородных штаммов и изучении изменчивости микроорганизмов.

34. Понятие об иммунитете и его формы. Противовирусный иммунитет. На любое вмешательство извне, будь то инородное тело или микроорганизм, организм включает механизмы защиты, запрограммированные в нем в течение долгих лет естественного отбора и жизни непосредственно данной особи. Вся эта совокупность реакций и приспособлений называется ИММУНИТЕТ. Другими словами, ИММУНИТЕТ – это состояние невосприимчивости организма к инфекционному началу или инородному веществу. Иммунитет бывает активным (естественный и искусственный), пассивный, противобактериальный и противовурусный.Отличие противовирусного иммунитета от других видов иммунитета связано со своеобразием структуры и размножения вирусов, особенностями патогенеза вирусных инфекций. Наблюдается широкая индивидуальная изменчивость в способности организма создать противовирусный иммунитет. Она определяется множеством факторов - возраст, стрессы, питание, суточный биоритм, время года и т.д. В отдельных случаях вирусы видоизменяются. Известна способность многих вирусов размножаться и повреждать иммунные клетки, что может приводить к нарушению нормального функционирования иммунной системы, провоцируя развитие аутоиммунных заболеваний. Другим результатом повреждения клеток иммунной системы может быть подавление иммунитета, что способствует переходу острой инфекции в хроническую. Повышение невосприимчивости к вирусным инфекциям достигается, в первую очередь, вакцинацией. Продолжительность противовирусного иммунитета при вакцинации широко варьируется. Однако возможности противовирусной вакцинации не беспредельны, т.к. большое число прививок может привести к развитию аллергических реакций, а при наличии у вируса высокой способности видоизменяться вакцинация может не дать желаемого эффекта. В этих случаях актуальны способы повышения неспецифической защиты организма.
Интерфероны, иммуномодуляторы и химиопрепараты используют в тех случаях, когда вакцины отсутствуют или их применение поздно (заражение уже произошло). Они оказывают выраженное активизирующее влияние на систему иммунитета и, как правило, эффект лечения ими тем выше, чем раньше оно начато. Поэтому перечисленные препараты следует вводить при появлении первых признаков вирусного заболевания. Одновременно назначают общеукрепляющую терапию (витамины) и симптоматическую.

78. Вирус ИРТ крупного рогатого скота. Инфекционный ринотрахеит КРС)

 

ИРТ (красный нос, контагиозная бронхопневмония) – остропротекающая контагиозная болезнь КРС, характеризующаяся преимущественно катарально-некротическими поражениями дыхательного тракта, лихорадкой, общим угнетением и коньюнктивитом, а так же развитием пустулезного вульвовагинита, при попадании вируса в половые органы животного и абортами.

Болезнь распространена повсеместно. Экономический ущерб за счет снижения удоев на 50-60%, яловости коров и выбраковки слепых телят.

Клиника. Болезнь проявляется в 5-ти формах:

- Поражение верхних дыхательных путей – респираторная форма. Внеззапное повышение температуры, гиперемия слизистой оболочки носа, носоглотки и трахеи, угнетением, сухим болезненным кашлем, обильными серозно-гнойными истечениями из носа и пенистым слюноотделением. При тяжелом течении отмечают асфиксию.

- Вагиниты.

- Энцефалиты. Отмечается психическое расстройство, нарушение равновесия, угнетение, конвульсии, слюнотечение. В основном заболевают телята 2-6 месячного возраста.

- Артриты.

- Коньюнктивиты.

Локализация вируса – тропизм к клеткам органов дыхания и размножения, кроме того, наблюдается тропизм к клеткам пищеварительного тракта. В больших количествах вирус обнаруживают в прямой кишке телят.

 

Источник – больные животные и латентные вирусоносители. Особенно опасны быки производители. Переболевание сопровождается появлением стойкого и длительного иммунитета, который может передаваться потомству с АТ молозива. Большим разнообразием отличаются живые вакцины (в СНГ – Бивак – от ПГ-3 и ИРТ), используются инактивированные вакцины (из штамма 4016), субъединичные вакцины.

 

 

Семейство Аденовирусов.

 

 

60.РДП.

Реакция диффузной преципитации.

Цель: индикация, идентификация и титрование антигена или антитела.

Сущность: Антиген и антитело диффундируют на встречу друг к другу в агаровом геле, и при специфичности, в месте соединения образуется комплекс антиген-антитело в виде светлой полосы – линии преципитации.

Техника постановки:

-микрометод

В агаровом геле по трафарету вырезают 5 луночек, в центральную лунку вносим вирусный материал или стандартную сыворотку с антителами. Вокруг исследуемого объекта, вирус суспензию(заведомо положительный антиген или вирус), заведомо отрицательный антиген, и физиологический раствор. Помещают стекло в трмостат при 37⁰ в условиях влажной ткани. Учёт через 6-12-24 часа, контролем являются заведомо полож. и заведомо отриц. антигены. Линия преципитации обязательно должна быть м/у сывороткой и положит. антигеном.

Не должна быть между антигеном и физ. раствотом.

-макрометод

Тоже самое, что и микрометод, только в чашке петри.

-капилярный метод

Стеклянный каиляр заполняют агаровым гелем, с одной стороны вливают антиген, с другой антитело. Это реакция требует высокой концентрации компонентов.

 

79. ИФА. Одним из наиболее часто применяемых в современной вирусологии методов исследования патологического материала является ИФА: иммуноферментный анализ. Другое не менее распространённое название метода – ELISA. При постановке данной реакции используют коньюгат. Это сыворотка меченная ферментом – очень часто пероксидазой.

Прямой метод ИФА. Сущность. Если в ииследуемом материале имеется специфичный антиген, то при добавлении стандартной сыворотки меченной пероксидазой образуется комплекс антиген-антитело, и при добавлении к ним субстрата ОФД (ортофенилдиамин), появляется коричневое окрашивание различной интенсивности. Реакция положительная. Животное больное.

Если в исследуемом материале специфического антигена окрашивания не происходит.

В лунку вносят 0,1 вируссуспензии, + 0,1 сыворотки меченной пероксидазой = контакт при 37⁰ – 1 час, потом луночки встряхиваются, затем добавляют 0,1 мл ОФД, в темноте при комнатной температуре на 15-20 мин.

Учёт – появление коричневого окрашивания указывает на наличие вируса.

 

50. Вирус Оспы птиц (лат. – Variola avium; англ. – Pox; оспа-дифтерит) – контагиозная болезнь птиц отряда куриных, голубиных, воробьиных, характеризующаяся поражением эпителия кожи, дифтеритическим и катаральным воспалением слизистых оболочек ротовой полости и верхних дыхательных путей.

Болезнь вызывает вирус оспы птиц, который относится к роду Poxviridae и тесно связан с другими вирусами оспы птиц, включая вирусы индеек, голубей и канареек. Размеры вириона от 120 до 330 ммк.

Штаммы вирусов оспы птиц дифференцируют по характеру и срокам наступления цитопатогенного действия (ЦПД) в культуре фибробластов куриных эмбрионов. Вирусные частицы после внедрения адсорбируются на оболочке клеток, затем проникают внутрь клетки и синтезируют вирусную ДНК. Специфические внутриплазматические включения (тельца Боллингера), выявляемые при оспе птиц и представляющие собой скопления вирионов, имеют диагностическое значение. Кроме этого известны тельца Бореля, также представляющие собой вирионы возбудителя.Устойчивость вируса к действию физических и химических факторов различная и зависит от его состояния. Под действием 1…3%-ных растворов гидроксида натрия, фенола, 20%-ного раствора гидроксида кальция вирус быстро погибаетИсточником возбудителя инфекции является больная и переболевшая птица, которая в течение 2 мес. после клинического выздоровления выделяет вирус в окружающую среду (с эпителиальными корочками, пометом, слизью из носовой и ротовой полостей.

Патогенез Вирус оспы – эпителиотропный возбудитель, поэтому начинает размножаться сразу же после попадания в чувствительные эпителиальные клетки. Размножающийся вирус вызывает гибель клетки и в большом количестве прорывается в кровоток, приводя к вирусемии. В дальнейшем вирус оседает в новых эпителиальных клетках и обусловливает вторичные поражения, поэтому принято различать первичный и вторичный оспенные процессы. Пораженные эпителиальные клетки образуют бородавчатые разращения на коже или дифтеритические пленки на слизистых оболочках. В патогенезе инфекции немалое значение имеет участие условно-патогенной микрофлоры, которая осложняет течение оспы. В стадии вирусемии вирус можно обнаружить в крови, печени, почках, нервной системе.Болезненный процесс развивается, как правило, в течение З…4 нед. Течение оспенного процесса у кур в отличие от млекопитающих не имеет отдельных стадий. Оспой поражаются открытые части тела, головы, лапок, область отверстия клоаки.
У кур инкубационный период при состоянии заражения продолжается от 7 до 20 дней. Болезнь обычно протекает хронически. Различают следующие формы: кожную, дифтеритическую, смешанную и катаральную. При кожной форме на 4…5-й день после заражения или позже на коже у основания клюва, век, на гребне, бородках и на других участках телапоявляются круглые, сначала бледно-желтые, а затем красноватые пятна, постепенно превращающиеся в небольшие узелки – папулы. У их основания появляются кровоизлияния, а поверхность покрывается клейким серозным экссудатом, который, засыхая, превращается в красно-коричневые корочки. Чем вирулентнее вирус и моложе птица, тем более злокачественно протекает заболевание. В тяжелых случаях поражаются оперенные участки тела, что приводит к быстрой гибели птицы. После отпадения корочек на их месте остается гладкая регенерированная ткань. При дифтеритической форме поражаются слизистые оболочки верхних дыхательных путей и ротовой полости.При поражении респираторных органов проявляются клинические симптомы затрудненного дыхания. Смешанная форма инфекции сопровождается характерным поражением кожи и слизистых оболочек ротовой ПОЛОСТИ.При катаральной форме оспы типичный оспенный и дифтеритический процессы отсутствуют, возникает катаральное воспаление конъюнктивы глаз, носовой полости, подглазничного синуса.Предварительный диагноз должен быть подтвержден результатами лабораторных исследований.В лабораторию обычно отправляют пораженные участки кожи, из которых делают мазки-отпечатки и гистосрезы для обнаружения возбудителя.Выделение вируса осуществляют заражением суспензией 9… 12-дневных куриных эмбрионов. При наличии вируса на ХАО формируются оспенные очаги, сливающиеся друг с другом или расположенные изолированно.Выполняют биопробу на неиммунных цыплятах, которым вируссодержащую жидкость втирают в перьевые фолликулы бедра.Также готовят срезы для гистологического исследования и окрашивают их по методу Морозова или Пашена для обнаружения телец-включений Боллингера. В мазках-отпечатках из срезанных оспинок можно обнаружить и тельца Борреля.Серологические исследования проводят в РДП или РИФ.Оспу птиц необходимо дифференцировать от инфекционного ларинготрахеита, парши, дерматонекрозов, вызываемых стафилококками, гиповитаминоза А.После переболевания оспой у птицы формируется иммунитет длительностью 2…3 года.

76. Дифференциальная диагностика вирусов классической чумы от псевдочумы птиц. Так как Болезнь Ньюкасла (псевдочума птиц) и грип птиц (классическая чума) имеют сходную клинику и патологоанатомические изменения, дифференцировать эти заболевания удаётся лишь лабораторными методами. Для этого в начале вспышки из трупов или от больной птицы в лабораторию направляют головной мозг, лёгкие и селезёнку.

В лаборатории вирус дифференцируют:

1. Постановка биопробы

Ставиться только в сомнительных случаях на не иммунной птице того же аозраста и породы.

Заражают внутримышечно 4 птицы суспензией

При Б.Н. признаки: Первые признаки через 3-7 недель после заражения гибель через 1-5 суток до 2х недель,

При гриппе птиц: Первые признаки через 1-5 дней

Гибель через 10-72 часов

2. Выделение на куриных эмбрионах

3. Дифференциация в РЗГА

Особенности: Б.Н. не агглютинирует эритроциты лошади.

48.Клеточный иммунитет (т и в лимфоциты). Под термином «иммунитет» (лат. immunitas — освобождение от дани, избавление от чего-либо) подразумевают невосприимчивость организма к инфекционным и неинфекционным агентам, обладающим генетической чужеродностью. Иммунная система — совокупность органов, тканей и клеток, обеспечивающих постоянство организма. Различают центральные (костный мозг, вилочковая железа, лимфоидная ткань кишечника, бурса) и периферические (селезенка, лимфатические узлы, лимфоидная ткань в слизистых оболочках кишечного типа) органы иммунной системы. Лимфоциты разделяют на функционально различные популяции и субпопуляции. Основными из них являются Т- и В-лимфоциты. Лимфоциты развиваются в тимусе и и костном мозге, затем, мигрируют в перефирические лимфоидные ткани (миндалины, лимфоузлы, селезёнку, пиеровы бляшки тонкого кишнчника и аендикс, где они могут реагировать с антигеном. Т-лимфоциты образуются в вилочковой железе (тимусе). В-лимфоциты образуются в лимфоидной ткани кишечника у млекопитающих.Т-лимфоциты расщепляют антигены, ответственны за реализацию клеточных иммунных реакций, пом

⇐ Предыдущая12

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: