 |
Окраска основным фуксином по Пфейферу
|
|
|
|
Окраска бактерий в мазках
Введение
Методы обнаружения возбудителей в мазках
Окраска метиленовым синим Лефлера
Окраска основным фуксином по Пфейферу
Окраска генциановым или метиловым фиолетовым
Окраска карболовым тионином Николя
Окраска акридиновым оранжевым по Дарту-Тернеру
Окраска по Граму
Окраска по Романовскому-Гимзе
Окраска плазмодиев малярии в мазках по Романовскому-Гимза
Методика окраски «толстой капли»
Дифференцированная окраска кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза и лепры)
Окраска микобактерий туберкулеза карбол-фуксином по Цилю-Нильсену
Метод Френкеля
Флюоресцентное окрашивание мазков мокроты (метод Хагеманна)
Метод Киньуна (для срезов)
Метод Файта (для срезов)
Серебрение бактерий в мазках - метод Фонтана
Выявление жгутиков и ресничек
Метод Леффлера
Метод Лайфзона
Выявление капсул бактерий
Метод Клетта
Метод Джоне
Метод Фридлендера (для срезов)
Метод Бурри
Метод Гинса
Выявление спор бактерий
Метод Вайсера-Хьюппе
Метод Меллера
Окраска малахитовым зеленым Шеффера-Фултона
Метод Ожешки
Метод Битгера
Выявление возбудителей сыпного тифа и других риккетсий
Выявление риккетсий в мазках (метод Маккиавелло)
Выявление риккетсий в срезах (метод Ника)
Выявление коринебактерий дифтерии
Выявление стрептококков
Выявление стафилококков
Выявление пневмококков
Выявление менингококков
Выявление гонококков
Выявление возбудителей чумы
Выявление анаэробных спорообразующих бактерий группы клостридий
Выявление возбудителей сибирской язвы
Выявление возбудителей кишечной инфекции
Выявление спирохет и других спиралевидных бактерий
|
|
|
Выявление возбудителей возвратного тифа
Выявление лептоспир
В цитологической практике нередко возникает необходимость в окраске и исследовании бактерий. Это чаще всего касается различного рода экссудатов, мазков из различных органов и тканей. Мазки готовят различно. В тех случаях, когда материал жидкий, наносят каплю его на чистое предметное стекло и размазывают, пользуясь краем другого предметного стекла (лучше шлифованного); если материал очень густой (например, гной), то его либо разводят физиологическим раствором и тогда поступают, как в первом случае, либо размазывают тонким слоем по предметному стеклу при помощи петли или стеклянной палочки. Наконец, можно готовить мазки-отпечатки, для чего чистое предметное стекло прикладывают непосредственно к серозному покрову, слизистой оболочке или к свежей поверхности разреза какого-либо органа (ткани). При наличии жидкого содержимого (экссудат, моча и пр.) рекомендуется центрифугировать и из осадка готовить мазки.
Полученные по одному из вышеуказанных способов мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх. Можно фиксировать мазки и в 96°спирте (10—15 минут).
Фиксированные мазки сохраняются в течение какого угодно времени.
Окрашенные мазки исследуют в масле, с иммерсионным объективом; при желании заключают в бальзам, в таком случае на окрашенный и хорошо высушенный мазок кладут каплю бальзама и покрывают покровным стеклом.
В настоящее время классическую бактериоскопию с окрашиванием микробов различными красителями дополняют получившие широкое распространение иммуноцитохимические методы с применением меченых антител. Во многих случаях (особенно если применяют моноклональные антитела против поверхностных антигенов возбудителя) они позволяют провести высокоспецифичный экспресс-анализ.
|
|
|
Нередко наиболее доступными для исследования с целью идентификации возбудителя являются обработанные в центрифуге экссудаты, выделения, а также - кровь, пунктаты паренхиматозных органов, мазки и отпечатки тканей.
Для обнаружения возбудителей используют различные методы и группы методов.
1. Методы выявления кислых гликозаминогликанов (ГАГ) с помощью ШИК-реакции. Наилучшие результаты получают при выявлении простейших, в частности пневмоцист и токсоплазм, микоплазм, хламидий, некоторых грибов (особенно рода Candida) и капсулообразующих бактерий.
2. Методы с использованием основного фуксина, азура, тионина и метиленового синего (окраски по Пфейферу, Леффлеру, Николя и др.), которые в небольших концентрациях позволяют выявить разную, в основном бактериальную флору- Наиболее эффективны способы окраски по Цилю-Нильсену для выявления спирто- и кислотоустойчивых бактерий, в частности семейства Mycobacteriaceae (микобактерий туберкулеза, лепры и др.) и некоторых простейших (криптоспоридий). Используемые при этом основной фуксин и метиленовый синий позволяют выявить, помимо бактериальной флоры, фуксинофильные внутриклеточные включения, характерные для некоторых вирусных, особенно респираторных, инфекций. Азур и эозин эффективны для выявления различной бактериальной микрофлоры, особенно грамположительной, и некоторых простейших, в частности плазмодия малярии.
3. Методы, основанные на использовании анилинового фиолетового (окраска по Граму и ее модификации), позволяющие выявлять грамположительные бактерии и некоторые грибы, в первую очередь рода Candida. Следует, однако, иметь в виду, что наиболее интенсивно окрашиваются молодые формы. Погибшие или погибающие микроорганизмы утрачивают способность окрашиваться этими методами. В то же время часть грамотрицательных возбудителей, по крайней мере эшерихий, в случае их гибели становятся грамположительными или окрашиваются полихромно.
4. Методы, основанные на импрегнации нитратом серебра кусочков тканей, срезов или мазков, направлены на выявление разной, в основном бактериальной, флоры, поиски которой облегчаются в связи с тем, что импрегнированные серебром микроорганизмы немного увеличиваются в размерах.
|
|
|
Говоря о гистологических срезах, следует отметить, что некоторые микроорганизмы, особенно ДНК-вирусы (семейств Herpesviridae и Adenoviridae) и многие грибы (классов Ascomycetes и Phycomycetes), вполне удовлетворительно окрашиваются гематоксилином. В этом случае использование дополнительных способов окраски из числа перечисленных излишне. Осторожно следует подходить к интерпретации находок при бактериоскопии секционного материала, особенно при поздних вскрытиях, поскольку происходит постмортальная инвазия, а размножение многих видов бактерий происходит даже в предагональном периоде, на что указывают многие авторы.
Окраска метиленовым синим Лефлера
Методика окраски.
Смешивают 30 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего со 100 мл 0,01 % раствора гидроксида калия. Мазки окрашивают в течение 3 — 5 мин, ополаскивают в проточной воде, дифференцируют 3 сек в 0,5 % растворе уксусной кислоты и ополаскивают в проточной воде. Проводят через спирты, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам. Препараты можно изучать при масляной иммерсии без заключения в бальзам, но в этом случае они хранятся недолго.
Результат: бактерии окрашиваются в густо-синий цвет.
Окраска основным фуксином по Пфейферу
Вместо метиленового синего можно воспользоваться карбол-фуксином либо как таковым, либо в разведенном виде (1:10). Окрашивание длится от 15—30 секунд до 2—3 минут, в зависимости от степени разведения перекрашивания допускают дифференцировку 70° спиртом (10—20—30 секунд).
Окраска основным фуксином по Пфейферу. 1 г основного фуксина растворяют в 10—15 мл этилового спирта и смешивают со 100 мл 5 % раствора фенола. Затем 3 капли полученного раствора добавляют к 10 мл дистиллированной, воды и этой смесью окрашивают мазки в течение 30 — 40 мин. После этого ополаскивают водой, дифференцируют 0,1 % раствором соляной кислоты в абсолютном спирте, ополаскивают в абсолютном спирте и заключают в бальзам.
Результат: бактерии окрашиваются в малиново-красный цвет.
|
|
|
