Вопрос 3. Капсула бактерий,окраска капсул

На клет.стенки многих бактерий наслаиваются снаружи более или менее толстые слои сильно обводненного материала с высоким содержа­нием воды-капсулы и слизь. Такие покровы не имеют для бактерий жизненно важное значения, но обладание капсулой придает некоторым патогенным бактериям резистентность к фагоцитозу и тем самым по­вышает их вирулентность.

Различают:а) микрокапсулу- короткие полисахарид.нити(в электр.микроскоп).б) собственно капсула- слизистый слой связанный с кл.ст. Толщина 0.2мкм.в формировании капсулы участвует ЦПМ.КАПСУЛА МОЖЕТ БЫТЬ-1.из полисахаридов без азота.2.из аминосахаров.3.из полипептидов(Bacilus antracis,Yersinia pestis) Ф-ии капсулы: 1)защита.2)источник воды,т.к.она гидратирована.3)источник питания при голодании.4)фактор патогенности у pneumococcus.5) мимикрия от макрофагов,т.к.капсула легко может отделиться,а макрофаг будет е1 фагоцитировать.в) слизистые слои- непрочная связь с ЦПМ.это вещества,выделенные из клетки.

Окраска капсул. Капсулы можно увидеть в световой микроско­п, если добавить к препарату такие красители, как нигрозин, конго красный или китайскую тушь,а затем генциан феолетовым или фуксином(окраска Бури-Гимза) которые в капсулу не проникают. Полу­чается негативное контрастирование; светлая капсула выделяется на темном фоне. Более тонкие капсулы пневмококков ста­новятся видимыми при добавлении гомологичной антисыворотки; при этом происходит отложение белка антител. Наблюдаемая картина на­поминает набухание («реакция набухания» Нейфельда). В большинстве случаев капсула состоит из полисахаридов (у Streptococcus mutans, S.salivarius, коринебактерий). Капсульные полисахариды по­мимо глюкозы содержат аминосахара, рамнозу, 2-кето-З-дезоксигалактоновую кислоту, уроновые кислоты и такие органические кислоты, как ПВК и уксусная к-та. Капсулы некоторых видов Bacillus (В. anthracis, В.subtilis) состоят из полипептидов, в первую очередь полиглутаминовой кислоты.

Капсулообразование считается приспособительной функцией микробов.

У некоторых видов бактерий с веществом капсулы связана их типовая специфичность, определяемая наличием комплекса полисахаридов.

Имеются микробы, которые образуют капсулы только в организме животного или человека (Str. Pneumoniae), и микробы, образующие капсулы как в организме, так и вне его (клебсиеллы пневмонии, озены и риносклеромы). Некоторые бактерии (стафилококки, стрептококки и др) образуют микрокапсулу, обнаруживаемую в электронный микроскоп в виде прочно связанных с клеточной стенкой микрофибрилл, состоящих из мукополисахаридов.

Потенциальную способность к капсолообразованию отмечают у большинства микробов, особенно при культивировании в питательных средах с большим количеством углеводов. У сапрофитных бактерий (Leuconostoc) наблюдают образование общей капсулы для многих особей-зооглея.

Билет №23

Вопрос 3. Хранение культур бактерий.понятие «музейная культура»

Необходимым условием успешной работы с МО-правильное поддержание их с целью сохранения жизнеспособности клеток,таксономических, а также любых других, важных для исследователя свойств. Общего ме­тода, одинаково пригодного для хранения многочисленных и разнообразных групп МО, пока не существует. Поэ­тому в крупных коллекциях разные группы МОсо­храняются различными методами. Кроме того,чтобы исключить возможность потери мо,каждый штамм сохраняется несколькими способами.

Способы хранения МО:1) периодические пересевы на свежие пита­тельные среды,2) сохранение культур на питательной среде под ва­зелиновым маслом,3) хранение клеток в лиофилизированном со­стоянии.4)реже при низ­ких или сверхнизких температурах, в дистиллированной воде или 1%-ном растворе хлористого натрия, на адсорбентах в высушен­ном состоянии. Выбор метода хранения зависит от це­лей, для которых используются мо, а также от имеющегося в распоряжении исследователя оборудования.

1)Периодические пересевы на питательные среды. -это один из первых приемов длительного сохранения МО в лабор-ии,и сейчас ши­роко используется.Аэроб­ов пересевают чаще всего на поверхность ско­шенной агаризованной среды, микроаэрофилов-в полужидкую среду(0,2—0,3% агара),анаэробов-в толщу плот­ной среды или в жидкую среду. Культуры пересевают на свежие среды в 2 пробирки.Одну пробирку используют для работы,а вторую-для сохранения и пересева.

Частота пересева различных мо неодинакова и определяется их свойства­ми. Многие пересеваются один раз в 1—2 месяца,а молочнокислые бак­терии,нуждаются в более частых пересевах. Хранение культур в холодильнике при 4—6° позво­ляет увеличить время между пересевами.

ОДНАКО регулярные пересе­вымогут привести к утрате некоторых морфологических и физиологических признаков,снижению б/х активности культур, повышают опасность инфици­рования ее посторонними мо.Велика вероятность возникнове­ния спонтанных мутантов и их селекция.

2)Хранение под минеральным маслом. -широко используется для бактерий и микроскопичес­ких грибов.Метод обеспечивает довольно длительное сохра­нение жизнеспособности и стабильности таксономических и дру­гих признаков МО. Масло предотвращает высыхание среды, замедляет про­цессы метаболизма и позволяет увеличить время между пересе­вами,

МО выращивают на агаризованной питательной среде;аэробы-на поверх­ности скошенной(под углом 45°)среды, микроаэрофилы и фак.анаэробы-в полужидкой среде, анаэробы-в толще среды. После того как культуры хорошо разовьются, их заливают маслом. Как правило медицинское вазелиновое масло с плотностью 0,8—0,9.Масло стерилизуют 1 ч в автоклаве при 121° (1 атм), а затем для удаления влаги прогревают в течение 1 ч в сушильном шкафу при температуре не выше 150° или ос­тавляют на двое—трое суток при комнатной температуре. Куль­туры заливают маслом так, чтобы слой его не превышал 1 см над средой или верхним краем скошенной среды, и сохраняют при комнатной температуре либо в холодильнике при 4—6°.

Для пересева клетки из-под масла отбирают петлей и, удалив излишек масла проведением петли по стенке пробирки, перено­сят на свежую питательную среду.

3)Хранение в лиофилизированном состоянии. Лиофилизация-процесс высушивания под вакуумом замороженных клеток. Лиофильно-высушенные клетки сохраняют в ампулах, запаянных под вакуумом. Применение этого метода позволяет в течение 10—20 и более лет сохранить без заметных изменений жизнеспособность, морфологические, культуральные, физиологические свойства, а также биохимическую активность клеток.

Для реактивации к лиофилизированным клеткам добавляют по каплям стерильную дистиллированную или водопроводную воду в количестве 0,5—1,0 мл. После регидратации клетки высевают на богатые питательные среды.

Лиофилизацию широко применяют для длительного хранения различных микроорганизмов. Тем не менее этот метод нельзя считать универсальным.К лиофилизации более устойчивы Гр+. 4) Хранение при низких и сверхнизких температ урах. Хранение микроорганизмов в замороженном состоянии при низких и сверх­низких температурах по сравнению с другими методами характе­ризуется наибольшей универсальностью. Однако этот метод тре­бует специального оборудования и большой осторожности в рабо­те с жидким азотом, поэтому используется лишь для сохранения микроорганизмов, не выдерживающих лиофилизацию.

Клетки замораживают при разных температурах (от-10 до -196°) и различных скоростях замораживания. Для защиты от повреждающего действия низких температур используют криопротекторов.(10—20%-ный раствор глицерина)

5)Хранение в dist. или 1%-ном NaCl. МО предварительно выращивают в оптимальных условиях, после чего клетки суспендируют в дистиллированной воде или 1%-ном растворе хлорида натрия.

6)Хранение в высушенном состоянии на адсорбентах. применяют главным образом для актиномицетов,анаэробных спорообраз.бактерий. В качест­ве адсорбентов используют почву, кварцевый песок, силикагель, вату, фильтровальную бумагу.Стерильный адсорбент, помещенный в ампулы, смешивают с густой суспензией клеток и высушивают под вакуумом или при комнатной температуре. Затем ампулы запаивают и хранят при комнатной температуре или в холодильнике.

Билет №24

Вопрос 1. Круговорот серы

В живых клетках S представлена главным образом сульфгидрильными группами в серусодержащих а/к (Cys, Met, гомоCys). В сухом веществе орга­низмов доля серы составляет 1%. При анаэробном разложении органи­ческих веществ сульфгидрильные группы отщепляются десульфуразами; образование H₂S при минерализации в анаэробных условиях называют также десульфурированием. Наибольшие количества встре­чающегося в природе H₂S образуются, однако, при диссимиляционном восстановлении сульфатов, осуществляемом сульфатредуцирующими бактериями. Этот сероводород, образующийся в отсутствие молекулярного кис­лорода в осадках водоемов, может быть окислен анаэробными фототрофными бактериями до серы и суль­фата. Когда сероводород проникает в зоны, содержащие 0₂, он окисляется либо абиотическим образом, либо аэробными серобактерия­ми до сульфата. Серу, необходимую для синтеза серусодер­жащих а/к, растения и часть мо получают пу­тем ассимиляционной сульфатредукции; животные же получают восста­новленные соединения серы с пищей.

⇐ Предыдущая14151617181920212223Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: