 |
Определение количества эритроцитов
|
|
|
|
Оборудование и реактивы:
1. смесители (меланжеры) или пробирки для подсчета эритроцитов.
2. 3% - раствор NaCl (для разведения эритроцитов) или жидкость Гайема.
3. 3% раствор уксусной кислоты.
Смесители представляют собой капиллярную пипетку с расширением - ампулой, содержащей бусинку, способствующую смешению крови с разводящей жидкостью. Смесители, предназначенные для подсчета эритроцитов, обладают капилляром более тонкого калибра и более объемистой ампулой на них нанесены метки одна - 0,5 другая - перед входом в ампулу - 1.0, третья - у выхода из ампулы - 101.
При набирании крови до метки 0,5 она окажется разведенной в 200 раз, при набирании до 1,0 - в 100 раз. Для разведения эритроцитов применяют 3% раствор поваренной соли или жидкость Гайема, в которой лучше сохраняется форма эритроцитов. Нанесены три метки: 0,5, 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10, либо в 20 раз (чаще разводят в 20 раз).
Счетная камера.
Для подсчета форменных элементов наиболее часто применяется камера типа Бюркера с выгравированной на ней сеткой Горяева. Счетная камера состоит из толстого предметного стекла с особым углублением. На дне углубления счетной камеры выгравирована сетка, в клетках которой и подсчитываются форменные элементы. По краям углубления имеются возвышения, куда накладывается покровное стекло. Между нижней поверхностью этого стекла и дном углубления образуется замкнутое пространство, которое и представляет собой счетную камеру. Глубина камеры соответствует 0,1 мм. Счетная камера типа Бюркера разделена пополам глубокой канавкой и имеет на каждой половине сетку Горяева, что позволяет сразу считать 2 капли, не заполняя вновь камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15Х15), 25 из которых разделены на малые, по 16 в каждом; имеются также пустые квадраты, собранные в группы по 4 квадрата. Всего в сетке 100 больших пустых квадратов, собранных в 25 групп (5X5). Каждая сторона маленького квадратика равна 1/20 мм, а так как высота камеры составляет 0,10 мм, то объем равен 1/4000 ммЗ.
|
|
|
Ход исследования:
Для подсчета эритроцитов берут смеситель для эритроцитов, надевают резиновую трубочку, легким насасыванием набирают кровь из укола до метки 0,5. Избыток крови удаляют фильтровальной бумагой, после чего кончик смесителя погружают в приготовленный заранее флакон с 3% раствором поваренной соли или раствором Гайема и насасывают раствор, заполняя всю ампулу до метки 101. Тотчас снимают резиновую трубку, зажимают смеситель по длине между большим и указательным или средним пальцем и встряхивают в течение 3 минут. После этого заполняют счетную камеру, сливают 1-2 капли и выпускают последующую каплю на сетку. При работе с пробирками для подсчета эритроцитов, наливают 4 мл 3% раствора поваренной соли или жидкости Гайема и в нее выпускают 0,02 мл. крови, отмеренной пипеткой от гемометра Сали. Для подсчета белых кровяных элементов в пробирку наливают 0,4 мл 3 - 5% раствора уксусной кислоты и 0,02 мл крови. Энергично встряхивают пробирки, затем в жидкость опускают пипетку из гемометра Сали и, набрав содержимое, заполняют счетную камеру.
Заполнение счетных камер:
Хорошо вымытое и вытертое шлифованное покровное стекло накладывают на выступающие боковые края. Мякотью больших пальцев покровное стекло притирают, двигая вверх и вниз, все время плотно прижимая, пока не появятся, так называемые, Ньютоновы кольца. Перед заполнением камеры вновь энергично встряхивают смесители, выпускают 2 капли на фильтровальную бумагу, а третьей заполняют щелку между камерой и покровным стеклом. Жидкость по капиллярности засасывается между ними и заполняет пространство над сеткой. Жидкость при заполнении камеры не должна затекать в желобки, если это стучится, то ее удаляют фильтровальной бумагой.
|
|
|
Подсчет производят спустя 1-2 минуты (когда эритроциты осядут на дно камеры), пользуясь объективом 40Х и окуляром 7X, либо объективом 8Х и окуляром 15Х. Чтобы не сбиться со счета, придерживаются определенной последовательности счета: передвигая из квадрата в квадрат по горизонтали один ряд слева направо, следующий - справа налево. Считают, помимо находящихся внутри квадрата, все эритроциты, лежащие на двух линиях, например, на левой и верхней, и пропускают все лежащие справа и снизу. Считать эритроциты надо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких.
Чтобы избежать неточности, вследствие не вполне равномерного распределения крови в камере, выбирают для подсчета не 5 рядом лежащих квадратов, а продвигаются по всей сетке.
Количество эритроцитов в 1 ммЗ (искомое) вычисляют следующим образом: единицей счета всегда, при всяком подсчете, в любой сетке служит малый квадрат. Объем его, как было указано, равен 1/4000 мм3. Сосчитав эритроциты в 5 больших квадратах (80 малых квадратов), делят это количество на 80 и умножают на 200 (степень разведения крови) и на 4000 (чтобы получить количество клеток во всем кубическом миллиметре); практически, следовательно, полученное число умножают на 10000 (прибавляют четыре нуля).
Практическая часть
Согласно исходным данным из РГЗ№1 (см. табл.1), были вычислены данные, указанные в таблице 2.
Таблица 2. Полученные данные РГЗ№1.
| № | № задачи | Объём 1 эритроцита, мкм3 | Масса гемоглобина в 1 эритроците, пг | Концентрация гемоглобина в цитоплазме эритроцитов, % |
| 1 | 17 | 61,6 | 24,2 | 39,3 |
| 2 | 30 | 98,6 | 25,7 | 26,0 |
| 3 | 37 | 106,6 | 26,8 | 25,2 |
| 4 | 46 | 70,9 | 22,9 | 32,3 |
| 5 | 51 | 83,5 | 27,6 | 33,0 |
| 6 | 70 | 76,4 | 19,7 | 25,7 |
| 7 | 82 | 78,8 | 22,7 | 28,9 |
| 8 | 91 | 90,2 | 28,9 | 32,0 |
| Среднее | 83,3 | 24,8 | 30,3 |
Задача 1.
Построить графики зависимости между:
Массой гемоглобина в одном эритроците (х) и концентрацией гемоглобина в цитоплазме эритроцитов (у).
Рис.1. Зависимость между массой гемоглобина в 1 эритроците и его концентрацией в цитоплазме эритроцитов.
Направленность кривой зависимости такова, что мы можем сделать вывод о том, что между массой гемоглобина в одном эритроците и концентрацией гемоглобина в цитоплазме эритроцитов существует прямая (положительная) зависимость, т.е. с увеличением массы гемоглобина в 1 эритроците увеличивается и его концентрация в цитоплазме эритроцита. График не проявляет однородный характер, поскольку на взаимосвязь между этими двумя показателям в организме влияют десятки других факторов, которые практически невозможно учесть.
|
|
|
Объёмом каждого эритроцита (х) и концентрацией в нём гемоглобина (у).
Рис. 2. Зависимость между объёмом каждого эритроцита и концентрацией в нём гемоглобина.
На данном рисунке имеется возможность убедиться, что график также не однородный, но имеет направленность сверху вниз, в отличие от предыдущего. Это означает, что между этими двумя показателями существует зависимость, но не прямая, а обратная (отрицательная).
Объёмом каждого эритроцита (х) и массой гемоглобина в нём (у).
Рис. 3. Зависимость между объёмом отдельных эритроцитов и массой гемоглобина в них.
На полученном графике также получена обратная зависимость, график также не однороден. Следовательно, при увеличении объёма каждого отдельного эритроцита масса гемоглобина в его цитоплазме уменьшается и наоборот.
Задача 2.
Математически рассчитать коэффициент корреляционной взаимосвязи между:
Массой гемоглобина в 1 эритроците и концентрацией гемоглобина в цитоплазме эритроцита.
| № | Масса гемоглобина в 1 эритроците, пг | Концентрация гемоглобина в цитоплазме эритроцитов, % | Произведе-ние отклонений а1*а2 | ||||
| Мас-са, пг | Отклоне-ние от средней, а1 | Квадрат отклоне-ния, а12 | Конц. Hb, % | Отклоне-ние от средней, а2 | Квадрат отклоне-ния, а22 | ||
| 1 | 24,2 | +0,6 | 0,36 | 39,3 | -9 | 81 | -5,4 |
| 2 | 25,7 | -0,9 | 0,81 | 26,0 | +4,3 | 18,49 | -3,87 |
| 3 | 26,8 | -2 | 4 | 25,2 | +5,1 | 26,01 | -10,2 |
| 4 | 22,9 | +1,9 | 3,61 | 32,3 | -2 | 4 | -3,8 |
| 5 | 27,6 | -2,8 | 7,84 | 33,0 | -2,7 | 7,29 | +7,56 |
| 6 | 19,7 | +5,1 | 26,01 | 25,7 | +4,6 | 21,16 | +23,46 |
| 7 | 22,7 | +2,1 | 4,41 | 28,9 | +1,4 | 1,96 | +2,94 |
| 8 | 28,9 | -4,1 | 16,81 | 32,0 | -1,7 | 2,89 | +6,97 |
| Сумма Σ | 198,5 | 63,53 | 242,4 | 162,8 | +17,66 | ||
| Средн. М | 24,8 | 30,3 | |||||
В начале по каждому показателю определяли сумму (Σ) из 8 значений. По массе Hb Σ =198,5 пг. По концентрации Hb в цитоплазме эритроцитов Σ =242,4%. Затем определяли среднее арифметическое значение 1 и 2-го показателей (М1 и М2), для чего сумму Σ делим на количество измерений (n):
|
|
|
.
После этого во 2-ой колонке вычисляем и записываем отклонение (разницу) каждого конкретного измерения от среднего арифметического (а). Причём отклонение записывалось с учётом знака (+ или -).
|
|
|
