Сложные методы окраски. Техника окраски другими сложными методами. Коринебактерии дифтерии (corynebacterium diphtheriae)

СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ.

 

Метод Грама позволяет выявить особенности строения клеточной стенки бактерий.

1. Генцианвиолет (бумажки по Синеву) смочить водой 1-2 мин.

2. Раствор Люголя – 1-2 мин.

3. Этиловый спирт – 30-60с

4. Промывание водой

5. Фуксин Пфейффера – 2-3мин.

6. Промыть водой.

фиолетового

красным

При этом методе окраски одни бактерии не обесцвечиваются спиртом и сохраняют окраску   красителя, вторые обесцвечиваются спиртом и окрашиваются красителем.

В зависимости от строения клеточной стенки все микроорганизмы подразделяются на Грам (+) и Грам (-). Способность Грам (+) бактерий удерживать генцианвиолет в комплексе с йодом связана со свойством многослойного пептидогликана взаимодействовать с краской.

 

Особенности строения клеточной стенки Грам(+) и Грам (-) бактерий.

 

Признак	Грам +	Грам -
Толщина клеточной стенки	20-60 нм	15-20 нм
Пептидогликан	Многослойный	Однослойный
% ПГ от КС	До 90%	5-10%
Тейхоевые кислоты	+ (до 50%)	-
Липиды	-	ЛПС, наружная мембрана
Белки-порины	-	+

                   

 

Клеточная стенка Грам(+)

             

 

Цитоплазматическая мембрана

ФИОЛЕТОВЫЙ ЦВЕТ

Клеточная стенка Грам(-)

ГРАМ (+) БАКТЕРИИ ОКРАШИВАЮТСЯ В, ПОТОМУ ЧТО ОНИ УДЕРЖИВАЮТ ГЕНЦИАНОВИОЛЕТ И НЕ ОБЕСВЕЧИВАЮТСЯ СПИРТОМ.

КРАСНЫЙ ЦВЕТ

ГРАМ (-) БАКТЕРИИ ОКРАШИВАЮТСЯ ФУКСИНОМ В, ПОТОМУ ЧТО ОНИ УТРАЧИВАЮТ ГЕНЦИАНОВИОЛЕТ  И ОБЕСВЕЧИВАЮТСЯ СПИРТОМ.

ТЕХНИКА ОКРАСКИ ДРУГИМИ СЛОЖНЫМИ МЕТОДАМИ

1) Метод Нейссера позволяет определить зерна волютина.

1. Ацетат синьки Нейссера (кислый краситель) - 2-3 мин.

2. Люголь – 10-30 сек.

3. Промыть водой.

4. Везувин (щелочной краситель)- 1-3мин.

5. Промыть водой.

желтый цвет.

синий цвет.

Зерна волютина, как щелочные образования, окрашиваются кислым красителем в Цитоплазма бактериальной клетки окрашивается щелочным красителем в

Коринебактерии дифтерии (Corynebacterium diphtheriae)

Зерна волютина

                                              

2) Метод Циля-Нильсена  позволяет определить кислотоустойчивые бактерии.

1. Карболовый фуксин Циля – 3-5 мин.

2. Промывание водой.

3. 5% серная кислота – 1-2 мин.

4. Промывание водой

5. Метиленовая синь – 3-5 мин.

6. Промывание водой.

красный цвет.

Кислотоустойчивые бактерии содержат воска, липиды, оксикислоты, поэтому окрашиваются в

синий цвет.

Кислотонеустойчивые бактерии и структуры содержат мало липидов, поэтому красятся в

      

Туберкулезные палочки в мокроте (Mycobacté rium tuberculó sis)

    Волокна мокроты

    Лейкоциты

 

3) Метод Ожешко позволяет окрасить споры бактерий.

1. На нефиксированный мазок 0, 5% соляной кислоты - 3 мин.

с прогреванием (протрава)

2. Промывание водой (осторожно)

3. Фиксация в пламени спиртовки.

4. Окраска по Цилю-Нильсену.

 

в синий цвет.

красный цвет

Спора, как кислотоустойчивая структура красится в, а цитоплазма клетки, как кислотонеустойчивая структура –

  

 

          

Споры бацилл сибирской язвы
(Bacillus anthracis)

4) Метод Бурри-Гинса позволяет выявить капсулу бактерий (называется негативным контрастированием, так как капсула не прокрашивается).

1. В каплю черной туши, внести культуру, смешать и 2 стеклом

со шлифованным краем приготовить мазок, как из крови.

2. Высушить.

З. Зафиксировать (в пламени горелки)

3. Фуксин Пфейффера – 1  мин.

красный цвет

Капсула не воспринимает красители, поэтому окрашиваем бактерии и окружающий фон. Фон окрашивается тушью в темный цвет, а возбудитель фуксином в, при этом капсула видна в виде белого ободка вокруг бактерий.

 

 

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться:

Воспользуйтесь поиском по сайту: